陳修香 韓 勇 李 英

1.山東省東港區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東東港276800；2.山東省日照市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心，山東東港276800；3.山東省五蓮縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心叩官畜牧獸醫(yī)站，山東五蓮262300

禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱，因其致病性和毒性的不同，可分為非致病性、低致病性和高致病性三大類。其中高致病性禽流感最為嚴(yán)重，不僅可導(dǎo)致易感動(dòng)物90%～100%死亡，還可以感染人類，甚至致人死亡，嚴(yán)重危害家禽業(yè)和公共衛(wèi)生安全[1]。通過免疫監(jiān)測(cè)，根據(jù)免疫抗體水平科學(xué)地進(jìn)行綜合免疫預(yù)防，可以及時(shí)了解禽流感免疫后的效果，準(zhǔn)確掌握疫情動(dòng)態(tài)，以便預(yù)測(cè)疫病的動(dòng)態(tài)，控制疫病的發(fā)展。日照市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心為了掌握全市禽流感抗體水平，在全市禽場(chǎng)進(jìn)行隨機(jī)抽樣，開展免疫效果監(jiān)測(cè)。本試驗(yàn)采取禽流感血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法，檢測(cè)H5（Re-8）禽流感抗體水平，了解日照市H5 禽流感免疫后抗體水平情況。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)、方法

本試驗(yàn)于2018 年11 月10-20 日在日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控中心進(jìn)行，采取禽流感血凝和血凝抑制試驗(yàn)方法。

1.2 血清樣品

為配合日照市秋季防疫檢查工作，進(jìn)行禽流感的免疫效果監(jiān)測(cè)，日照市于2018 年11 月中下旬對(duì)全市4 個(gè)區(qū)（縣）8 家規(guī)?；輬?chǎng)進(jìn)行了抽樣檢測(cè)，共抽查240 份血清。

1.3 檢測(cè)試劑

H5（Re-8）禽流感抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清均購(gòu)自哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)為2018001。

1.4 儀器設(shè)備

振蕩器為金壇市醫(yī)療器械生產(chǎn)，型號(hào)為78-2；移液器為Sartorius 公司生產(chǎn)。

1.5 血凝試驗(yàn)操作程序

測(cè)抗原的血凝價(jià)：在微量反應(yīng)板的1～12 孔加入25 μL 的PBS；換滴頭，吸取25 μL 的抗原加入到第1 孔，然后倍比稀釋至11 孔，并棄去剩下的25 μL，換滴頭；每孔再加入25 μL 的PBS，混勻后，每孔加入25 μL 的1%體積比雞紅細(xì)胞懸液；震蕩混勻，在室溫下作用30 min 后觀察結(jié)果。

HA 試驗(yàn)的判定方法：將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌。完全血凝（不流淌）的抗原的最高稀釋倍數(shù)代表1 個(gè)血凝單位（HAU）。

1.6 血凝抑制試驗(yàn)操作程序

HI 抗體滴度：根據(jù)HA 試驗(yàn)結(jié)果配制4HAU，在微量板上的第1～11 孔加入25 μL 的PBS，第12孔加50 μL 的PBS；吸取25 μL 待檢血清加入到第1 孔內(nèi)，充分混勻后倍比稀釋至第10 孔；在第1～11 孔加入25 μL 的4HAU，室溫作用30 min；然后每孔加入25 μL 的1%體積比的雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，在室溫下作用30 min 后觀察結(jié)果。

HI 試驗(yàn)的判定方法：以完全抑制4 個(gè)HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度。HI 效價(jià)≥4 log2 判為陽(yáng)性，＜4 log2 判為陰性。

2 結(jié) 果

1）禽流感血凝試驗(yàn)結(jié)果。H5（Re-8）禽流感血凝效價(jià)為9。

2）H5（Re-8）禽流感抗體檢測(cè)結(jié)果。血清檢測(cè)240 份，免疫合格230 份，抗體總體合格率95.8%。

3 討 論

1）監(jiān)測(cè)情況分析。從檢測(cè)結(jié)果來看，抽檢的4個(gè)區(qū)（縣）8 家規(guī)?；輬?chǎng)禽流感總體免疫合格率為95.8%，符合國(guó)家要求。

2）疫苗免疫效果分析。通過養(yǎng)殖戶了解到有個(gè)別群體的免疫效果一般，不同個(gè)體即使是相同的免疫程序，所產(chǎn)生的免疫效果也不一樣，主要與群體先天狀況和養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理水平有關(guān)。

3）高抗體水平的雞群可以有效抵抗禽流感病毒的攻擊，但也有試驗(yàn)證明，高抗體的雞群仍可分離到AI 強(qiáng)毒并排毒，但發(fā)病癥狀較輕。而沒有感染AI 強(qiáng)毒的雞群則分離不到AIV，因此對(duì)種禽場(chǎng)不能掉以輕心，更應(yīng)加強(qiáng)生物安全等綜合防治措施[2]。