李文桂,陳雅棠

重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 傳染病寄生蟲病研究所，重慶 400016

新培斯病毒（Sindbis virus，SinV）是一種感染鳥類的蟲媒病毒，可波及人類，出現(xiàn)以關(guān)節(jié)痛、斑丘疹和發(fā)熱為特征的新培斯熱。新培斯病毒的基因組大小為11.8 kb，可插入3.2 kb 的外源基因，是一種理想的疫苗載體。pSinrep5、pSinrep504和pSin-Lacz 等載體是新培斯病毒的高效表達(dá)載體[1-2]，pVAX-EGFP、pVAX-Gluc 和 pBR-EGFP 等重組質(zhì)?？梢员磉_(dá)綠色熒光蛋白（GFP）、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）或高斯蟲體螢光素酶（Gluc），這為篩選重組新培斯病毒提供了方便[3-4]。重組新培斯病毒的復(fù)制子含有病毒基因組的5′和3′端的順式作用序列以及復(fù)制/轉(zhuǎn)錄酶編碼基因，病毒結(jié)構(gòu)蛋白的基因被外源基因所替代，復(fù)制/轉(zhuǎn)錄酶控制載體RNA 在宿主細(xì)胞胞漿內(nèi)的復(fù)制以及亞基因組織mRNA 表達(dá)外源基因，由輔助載體RNA提供反式互補(bǔ)結(jié)構(gòu)蛋白在宿主體內(nèi)將復(fù)制子RNA 包裝成重組病毒顆粒?；赗NA 和SinV 的復(fù)制子需要體外合成加帽的RNA，并且不穩(wěn)定；基于DNA 和RNA 的雙功能復(fù)制子載體操作簡單，表達(dá)效率高[5-8]。國內(nèi)外學(xué)者報(bào)道了大量表達(dá)病原體蛋白的重組新培斯病毒，這些病原體包括漢城病毒、LAC 病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、風(fēng)疹病毒、狂犬病毒、偽狂犬病毒、口蹄疫病毒、丙型肝炎病毒、麻疹病毒、Ⅰ型人類免疫缺陷病毒、日本腦炎病毒、傳染性胃腸炎病毒、單純皰疹病毒1型、剛地弓形蟲、約氏瘧原蟲、埃及伊蚊、結(jié)核分枝桿菌和炭疽桿菌等。本文簡要綜述以新培斯病毒為傳遞載體的病原體疫苗的研制現(xiàn)狀。

1 重組新培斯病毒抗病毒

1.1 布尼亞病毒

1.1.1 漢城病毒 漢城病毒（Seoul virus，SeoV）是腎綜合征出血熱的病原體之一，其基因組的M/S基因分別編碼糖蛋白（glycoprotein，GP）和核殼蛋白（nucleocapsid protein，NP），將 GP/NP 的 DNA 疫苗或重組蛋白免疫倉鼠可產(chǎn)生中和抗體[9-10]。Ka?mrud 等[11]以漢城病毒 SR-11 株的總 RNA 為模板擴(kuò)增 M/S 基因，插入 pWRG 得 pWRD-M/S，與 pSin?rep5 重組得pSinrep5-M/S，轉(zhuǎn)化幼倉鼠腎細(xì)胞（BHK-21），Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的相對分子質(zhì)量（Mr）69 000 的 G1、50 000 的 G2 及46 000 的N 蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用皮下注射途徑將3 μg 重組質(zhì)粒接種倉鼠，在第一次接種后3、6 周加強(qiáng)2 次，在第一次接種后9 周血清 IgG 和中和抗體滴度分別為 1∶1600～1∶6400 和1∶160～1∶2560，此時(shí)通過肌肉注射用 103PFU 有毒株進(jìn)行攻擊，攻擊后4 周血清IgG 和中和抗體的滴度分別為1∶200～1∶3200 和1∶320～1∶25 600。

1.1.1 拉克羅斯病毒 拉克羅斯病毒（Lacrosse virus，LACV）是蟲媒性腦炎的病原體之一。M 負(fù)鏈的mRNA 編碼一個(gè)多聚體，隨后裂解為糖蛋白G1 和G2。將G1 和G2 的重組蛋白免疫倉鼠可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生中和抗體[12]。Kamrud 等[13]以pMORF為 模 板 擴(kuò) 增 1154 bp 的 G2、3474 bp 的 G1 和2651 bp 的 TG1 基 因 ，插 入 pSinrep5 得 pSinrep5-G2/G1/TG1，將它們分別轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，West?ern 印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為38 000 的G2、125 000 的 G1 和 60 000 的 TG1 蛋 白 可 被 患 者 血清所結(jié)合，但未報(bào)道保護(hù)力的試驗(yàn)結(jié)果。

1.2 披膜病毒

1.2.1 委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒 委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus，VEEV）的26S RNA 的C 端是結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)，經(jīng)過突變成為 TC-83，其 N 端的未翻譯區(qū)（UTR）G3A 位點(diǎn)突變成為G3A[14-15]，這些突變株可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生更多的IFN-α，從而提高機(jī)體的免疫應(yīng)答。Paessler等[16]將 pTC-83 與 pSinV 重組得 pSinV-83S，加輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的E1 蛋白可被患者血清所結(jié)合。經(jīng)皮下注射途徑將106PFU 疫苗接種Swiss 鼠，接種后3 d 提示血清中和抗體上升，此時(shí)皮下注射106PFU委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒Ie 株SH3 型進(jìn)行攻擊，攻擊后7 d 免疫組和對照組的存活率分別為100%（10/10）和 0（0/10）。Maruggi 等[17]將 G3A 基因插入pSinrep5 得pSinrep5-G3A，加輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，免疫熒光提示重組病毒可以呈現(xiàn)融合蛋白分子。經(jīng)肌肉注射途徑將106IU 疫苗接種BALB/c 鼠，第一次接種后3 周加強(qiáng)1 次，第一次接種后5 周血清IgG 上升，脾細(xì)胞的CTL 活性增強(qiáng)，流式細(xì)胞儀（FACS）檢測表明脾 IFN-γ+CD4+和CD8+T 細(xì)胞數(shù)目明顯增多。

1.2.2 風(fēng)疹病毒 風(fēng)疹病毒（Rubella virus，RubV）是風(fēng)疹的病原體，糖蛋白E1 和E2 和殼蛋白（CP）均是主要的結(jié)構(gòu)蛋白，具有一定的免疫原性[18]。Chen 等[19]以風(fēng)疹病毒的基因組DNA 為模板擴(kuò)增166 bp 的 E1、923 bp 的 E2 和 839 bp 的 CP 基 因 ，插入 pH251 得 pH251-E1/E2/CP，與 pToto2JCI 重組得 pToto-E1/E2/CP，分別轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，West?ern 印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為60 000 的E1、43 000 的 E2 以及 32 000 的 CP 蛋 白 可被患者血清所結(jié)合。

1.3 彈狀病毒

1.3.1 狂犬病毒 狂犬病毒（Rabies virus，RaV）是狂犬病的病原體，其糖蛋白（rabies virus glycopro?tein，RGP）是一種較好的免疫蛋白[20]。Saxena 等[21]以pTarget-RVG 為模板擴(kuò)增RVG 基因，插入pAL?pha 得 pALpha-RVG，將 其 轉(zhuǎn) 化 BHK-21 細(xì) 胞 ，Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為67 000 的RVG 蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用肌肉注射途徑將50 μg 重組質(zhì)粒接種Swiss 鼠，第一次接種后 21 d 加強(qiáng) 1 次，第一次接種后 5 周血清 IgG 上升，脾細(xì)胞增殖，可分泌高水平的IL-2、IFN-γ和IL-4 等細(xì)胞因子，F(xiàn)ACS 檢測表明脾CD4+和CD8+T 細(xì)胞數(shù)目增多，此時(shí)皮下注射20 LD50狂犬病毒CVS 株進(jìn)行攻擊，攻擊后2 周免疫組和對照組的存活率分別為100%（10/10）和0（0/10）。

1.3.2 偽狂犬病毒 偽狂犬病毒（Pseudorabies vi?rus，PRV）是偽狂犬病的病原體，其糖蛋白gB/gC/gD 具有較好的免疫原性，將糖蛋白的DNA 疫苗免疫仔豬可產(chǎn)生較好的保護(hù)力[22]。Dufour 等[23]以偽狂犬病毒的基因組DNA 為模板擴(kuò)增gB/gC/gD基因，插入 pCR-Ⅱ得 pCR-gB/gC/gD，與 pSincp 重組得pSincp-gB/gC/gD，將它們分別轉(zhuǎn)化豬腎細(xì)胞株（PK15），免疫熒光提示重組病毒可以呈現(xiàn)融合蛋 白 分 子 。 將 340 μg 的 pSin-gB、pSin-gC 和pSin-gD 等量混合組成混合疫苗，經(jīng)肌肉注射途徑接種8 周齡仔豬，第一次接種后3 周加強(qiáng)1 次，第一次接種后6 周血清IgG 上升，外周血單核細(xì)胞（PBMC）分泌高水平IFN-γ，此時(shí)用106.3TCID50有毒株進(jìn)行滴鼻攻擊，攻擊后6 d 免疫組和對照組的存活率分別為100%（8/8）和0（0/8）。

1.4 RNA病毒

1.4.1 口蹄疫病毒 口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）是家畜口蹄疫的病原體。P1-2A 是殼蛋白前體，在蛋白水解酶3C 作用下裂解為 VP1、VP2、VP3 和 VP4，其中 VP1 存在許多細(xì)胞表位。將VP1 蛋白的合成肽或DNA 疫苗免疫小鼠或仔豬均可抵抗口蹄疫病毒有毒株的攻 擊[24-25]。 Dory 等[26]將 P12A3C3D 基 因 插 入 pSincp得pSincp-P12A3C3D，將其轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，免疫熒光提示重組病毒可以呈現(xiàn)融合蛋白分子。將 1020 μg 重組質(zhì)粒加 340 μg pSincp-GM-CSF組成混合疫苗，采用肌肉或皮下注射途徑接種7周齡仔豬，第一次接種后2 和4 周加強(qiáng)2 次，第一次接種后6 周血清IgG 和中和抗體上升，皮下注射組的抗體水平高于肌肉注射組。

MEG990 是一個(gè)多價(jià)表位基因，是將口蹄疫病毒的O 型、A 型和亞洲型VP1 序列的C 端串聯(lián)起來而成的，含有2 個(gè)免疫顯性表位和1 個(gè)B 細(xì)胞 表 位[27]。 Dar 等[28]以 pET-MEG990 為 模 板 擴(kuò) 增1 kb 的 MEG990 基因，插入 pSinCMV-Vac 得 pSin?CMV-MEG990，轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為17 000 的蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用肌肉注射途徑將1、2、5 和10 μg 重組質(zhì)粒接種豚鼠，接種后4 周血清IgG 和中和抗體上升，此時(shí)肌肉注射103GPID50口蹄疫病毒A 株進(jìn)行攻擊，攻擊后7 d 觀察足墊皮損，結(jié)果發(fā)現(xiàn) 1、2、5 和 10 μg 接種組以及對照組的保護(hù)力分別為 0（0/6）、0（0/6）、16.7%（1/6）、33.4%（2/6）和0（0/6），提示高劑量接種組的免疫效果優(yōu)于低劑量接種組。

1.4.2 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒（Hepatitis virus C，HCV）是丙型肝炎的病原體，E 區(qū)基因編碼GP33 和GP72 蛋白。付娟娟等[29]以pVRC-HCV為模板擴(kuò)增 1.7 kb 的 E1E2 基因，插入 pBR-XJ 得pBR-E1E2，與 pVA-XJ 重組得 pVA-E1E2，加輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡提示重組病毒 表 達(dá) 的Mr為 35 000 的 E1 和 60 000 的 E2 蛋 白可被患者血清所結(jié)合。

1.5 其他病毒

1.5.1 麻疹病毒 麻疹病毒（Measles virus，MV）是麻疹的病原體，將其血凝素（H）和融合蛋白（F）的DNA 疫苗接種小鼠可誘導(dǎo)高水平的中和抗體[30]。Pasetti 等[31]采用肌肉注射途徑將 100 μg rSin-H/F 接種棉鼠，第一次接種后4 周加強(qiáng)1 次，第一次接種后8 周通過皮下注射方法用5×104TCID50麻疹病毒的減毒株加強(qiáng)2 次，第一次接種后12 周血清 IgG 上升，ELISPOT 檢測發(fā)現(xiàn)血 PBMC的 IFN-γ+SFCs 數(shù)目增加，此時(shí)用 2×107TCTD50麻疹病毒Edmonston 株進(jìn)行滴鼻攻擊，攻擊后4 d 取肺檢查病毒負(fù)荷，結(jié)果提示rSinV-H 免疫組、rSinV-F 免疫組和對照組的保護(hù)力分別為100%（16/16）、81%（13/16）和0（0/16）。

1.5.2 Ⅰ型人類免疫缺陷病毒 Ⅰ型人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）的結(jié)構(gòu)基因 gag 編碼核衣殼蛋白 P24、P7 和內(nèi)膜 蛋 白 P14。 Kong 等[32]將 GagCRF08 基 因 插 入pSinrep5 得 pSinrep5-GagCRF08，與 pSinrep15 重組得pSinrep19-GagCRF08，將其轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為50 000 的pr55Gag 蛋白可被患者血清所結(jié)合。

env 基因編碼一種前體蛋白gp160，gp160 可裂解為 gp120 和 gp41。 Van Marle 等[33]將 env 基因插入 pSL1180 得 pSL-env，與 pSinrep5 重組得 pSin?rep5-env，加 pDH-BB 轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western印跡提示重組病毒表達(dá)的Mr為120 000 的gp120蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用肌肉注射途徑將 5×105IU 的疫苗接種 SCID/NOD 鼠，接種后 7 d取腦組織，發(fā)現(xiàn)接種組小鼠的腦組織發(fā)生變性，神經(jīng)元丟失，免疫鼠的行為學(xué)出現(xiàn)異常改變。

1.5.3 日本腦炎病毒 日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）是日本腦炎的病原體。膜前蛋白（premembrane protein，PrM）是膜蛋白M 的糖基化前體，外膜蛋白（envelope glycoprotein，E）是被膜糖蛋白，非結(jié)構(gòu)蛋白1（nonstructural pro?tein 1，NS1）是糖基化蛋白。將 PrM/E 和 NS1 的重組蛋白免疫小鼠可對抗JEV 有毒株的攻擊[34-35]。Pugachev 等[36-37]以日本腦炎病毒cDNA 為模板擴(kuò)增prM/E 和 NS1 基 因，插入 pSinrep5 得 pSinrep5-prM/E/NS，將它們分別轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡提示重組病毒表達(dá)的prM/E 和NS1 蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用腹腔注射途徑將107PFU 疫苗接種Swiss 鼠，接種后3 周血清IgG 和中和抗體上升，此時(shí)腹腔注射3×108PFU 日本腦炎病毒進(jìn)行攻擊，攻擊后3 周rSin-prM/E 免疫組、rSin-NS1免疫組和對照組的存活率分別為40%（8/20）、15.8%（3/19）和 0（0/20），提示 rSin-prM/E 免疫組的保護(hù)力高于rSin-NS1 免疫組。

1.5.4 傳染性胃腸炎病毒 傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）是人畜胃腸炎的常見病原體之一。S 基因編碼的被膜蛋白（envelope protein，E）在病毒聚集和釋放中起作用。Ortego 等[38]以傳染性胃腸炎病毒PUR46-MAD株的DNA 為模板擴(kuò)增249 bp 的E 基因，插入pSL-SC11 得 pSL-E，與 pSinrep21 重 組 得 pSin?rep21-E，將其轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡檢測發(fā)現(xiàn)重組病毒表達(dá)的Mr為12 000 的E 蛋白可被患者血清所結(jié)合，Southern 雜交提示目的基因整合入病毒的基因組中。

1.5.5 單純皰疹病毒1 型 單純皰疹病毒1 型（Herpes simplex virus type 1，HSV-1）是皰疹的病原體之一，將其糖蛋白gB 的DNA 疫苗免疫小鼠可誘導(dǎo)有效的保護(hù)力[39-40]。Hariharan 等[41]以單純皰疹病毒1 型KOS 株的DNA 為模板擴(kuò)增3555 bp的 gB 基因，插入 pCI 得 pCI-gB，與 pSin2.5 重組得pSin2.5-gB，轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡檢測發(fā)現(xiàn)重組病毒表達(dá)的Mr為110 000 的gB 蛋白可被患者血清所結(jié)合。采用肌肉注射途徑將0.01、0.1、0.3、3 和 100 μg 重組質(zhì)粒接種 BALB/c 鼠，接種后2 周血清IgG 上升，脾細(xì)胞的CTL 活性增加，此時(shí)腹腔注射5×107PFU 單純皰疹病毒1 型Mck?rae 株進(jìn)行攻擊，攻擊后2 周各組的存活率分別為34%（11/32）、82%（48/52）、97%（31/32）和 100%（15/15），表明重組質(zhì)粒的接種劑量可影響免疫效果，接種劑量愈大，免疫效果愈好。

2 重組新培斯病毒抗寄生蟲

2.1 剛地弓形蟲

剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii，Tg）是弓形蟲病的病原體，將其表面抗原1（surface antigen 1，SAG1）接種小鼠可產(chǎn)生較好的保護(hù)力[42]。Xiong等[43]將 P30（SAG1）基因插入 pGEX-1N 得 pGEXP30，與pToto2J1 重組得pTJ-P30，加輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡檢測發(fā)現(xiàn)重組病毒表達(dá)的Mr為56 000 的P30-GST 融合蛋白可被患者血清所結(jié)合，但未進(jìn)行保護(hù)力試驗(yàn)。

2.2 約氏瘧原蟲

約氏瘧原蟲（Plasmodium yoelii，Py）是一種常見的鼠瘧原蟲，Py 環(huán)子孢子蛋白（Py circumsporo?zoite protein，PyCSP）在子孢子入侵肝細(xì)胞的過程中起關(guān)鍵作用。Tsuji 等[44]采用皮下注射途徑將5×106PFU 疫苗 接種 BALB/c 鼠 ，接 種后 2 周 經(jīng)FACS 證實(shí)脾CD8+T 細(xì)胞數(shù)目增多，此時(shí)靜脈注射2×104約氏瘧原蟲的子孢子進(jìn)行攻擊，攻擊后42 h 取肝，RT-PCR 定量顯示免疫組的肝Py rRNA 水平下降80%左右。

2.3 埃及伊蚊

埃及伊蚊（Aedes aegypti）是登革熱的主要傳播媒介。R2D2 是一種傳播阻斷性抗原，可以干擾伊蚊的發(fā)育[45]。Geiss 等[46]將 R2D2 基因插入pBG78 得 pBG78-R2D2，加 pBG44 轉(zhuǎn)化 BHK-21 細(xì)胞，Western 印跡檢測發(fā)現(xiàn)重組病毒表達(dá)的Mr為40 000 的R2D2 蛋白可被患者血清所結(jié)合。

3 重組新培斯病毒抗細(xì)菌

3.1 結(jié)核分枝桿菌

結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteria tuberculosis，MTB）是結(jié)核病的病原體，Ag85 具有分枝菌酸轉(zhuǎn)移酶活性，在細(xì)菌細(xì)胞壁合成晚期起關(guān)鍵作用。將Ag85 的DNA 疫苗免疫小鼠可有效抵抗MTB 的攻 擊[47]。 Kirman 等[48]以 結(jié) 核 分 枝 桿 菌 DNA 為 模 板擴(kuò)增 Ag85A 基因，插入 pcDNA3.1 得 pcD-Ag85A，與pSincp 重組得pSincp-Ag85A，將其轉(zhuǎn)化BHK-21細(xì)胞，Western 印跡檢測發(fā)現(xiàn)重組病毒表達(dá)的Ag85A 蛋白可被患者血清所結(jié)合；采用皮下注射途徑將100 μg 重組質(zhì)粒接種C57BL16 鼠，第一次接種后2 周加強(qiáng)1 次，第一次接種后4 周脾細(xì)胞分泌高水平IFN-γ，此時(shí)霧化吸入500 CFU 結(jié)核分枝桿菌Erdman 株進(jìn)行攻擊，攻擊后4 周免疫組肺組織的細(xì)菌免疫負(fù)荷下降至1/8 左右。

Derrick 等[49]以 PJW4303-tpA85B 為 模 板 擴(kuò) 增Ag85B 基因，插入 pCR2-1 得 pCR2-1-Ag85B，與pSincP 重組得 pSincp-Ag85B，轉(zhuǎn)化 RD 細(xì)胞；從重組病毒中抽提總RNA 作為模板，用RT-PCR 方法可克隆出Ag85B 基因。采用肌肉注射途徑將5 μg 重組質(zhì)粒接種C57BL/6 鼠，第一次接種后3 和6周加強(qiáng)2 次，第一次接種后10 周血清IgG 上升，此時(shí)霧化吸入300 CFU 結(jié)核分枝桿菌Erdman 株進(jìn)行攻擊，攻擊后190 d 免疫組肺組織的細(xì)菌負(fù)荷下降至1/7 左右。

3.2 炭疽桿菌

炭疽桿菌（Bacillas anthracis）是炭疽的病原體，其保護(hù)性抗原的結(jié)構(gòu)域4（protective antigen domain 4，PAd4）含有中和表位，具有一定的免疫原 性[50]。 Thomas 等[51]將 PAd4 插 入 pE2S1 得pE2S1-PAd4，加輔助質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BHK-21 細(xì)胞，免疫熒光提示重組病毒可以呈現(xiàn)融合蛋白分子。采用肌肉注射途徑將107PFU 疫苗接種Swiss 鼠，第一次接種后2、4 和6 周加強(qiáng)3 次，第一次接種后8周血清IgG 和中和抗體上升，此時(shí)用10 LD50炭疽桿菌孢子進(jìn)行滴鼻攻擊，攻擊后30 d 免疫組和對照組的存活率分別為20%（2/10）和0（0/10），當(dāng)加用頭孢呋辛?xí)r，免疫組的存活率可達(dá)90%（9/10）。

4 結(jié)語

重組新培斯病毒疫苗作為一種新型疫苗具有下述優(yōu)點(diǎn)：新培斯病毒復(fù)制子的基因組小，操作簡單，生產(chǎn)方便；在宿主細(xì)胞內(nèi)短暫、高水平表達(dá)外源蛋白；在宿主胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)錄mRNA，消除了潛在的mRNA 拼接事件；重組新培斯病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，在細(xì)胞質(zhì)中合成大量正、負(fù)鏈RNA，組成大量雙鏈RNA 復(fù)制中間體；抗原提呈細(xì)胞TLR3 受體可識別雙鏈mRNA，誘導(dǎo)IFN 和TNF-α產(chǎn)生，促進(jìn)免疫應(yīng)答[52]；雙鏈RNA 可激活宿主細(xì)胞內(nèi)RNase L 和PKR 等途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[53]；感染的細(xì)胞凋亡后可避免外源基因整合進(jìn)宿主細(xì)胞的染色體基因組中，提高了生物安全性[54]；新培斯病毒的宿主范圍廣；新培斯病毒本身無免疫背景，很少存在免疫耐受問題；新培斯病毒具有嗜神經(jīng)性，對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療非常有吸引力[55]。

重組新培斯病毒是一種新型疫苗，用于感染的防治具有十分廣闊的前景。但將重組新培斯病毒發(fā)展成為一種理想疫苗亟待解決下述問題：重組新培斯病毒疫苗高效啟動子和增強(qiáng)子的研究；重組新培斯病毒表達(dá)蛋白的翻譯后修飾及調(diào)控；多價(jià)重組新培斯病毒的研制；口服重組新培斯病毒的研制；重組新培斯病毒的新的選擇標(biāo)志篩選；重組新培斯病毒的接種劑量、次數(shù)和間隔時(shí)間探索等。隨著這些問題的闡明，我們對重組新培斯病毒用于感染防治將更有信心。