氯化膽堿中N,N-二甲基乙醇胺的測定方法

周潔 高衎 李春剛 唐祁勻(上?，F(xiàn)代制藥海門有限公司，江蘇 南通 226100)

1 引言

N,N-二甲基乙醇胺，又名N，N-二甲基-2-羥基乙胺、2-二甲基氨基乙醇，具有基因毒性示警結(jié)構(gòu)[1]?？捎米骶植柯樽韯?、紡織助劑、燃料油添加劑、離子交換樹脂等，極為廣泛地應(yīng)用于人們的生產(chǎn)和生活中[2-4]。作為一種基因毒性雜質(zhì)，極低濃度的N,N-二甲基乙醇胺即可損傷DNA，嚴(yán)重威脅了患者的生命安全[5-8]。因此，N,N-二甲基乙醇胺含量的準(zhǔn)確測定十分關(guān)鍵。受到其他類似結(jié)構(gòu)化合物的分析方法的啟發(fā)，擬通過氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用對其進(jìn)行研究。本文通過對色譜柱、檢測器的篩選及色譜參數(shù)的優(yōu)化，建立了一種定量測定產(chǎn)品中N,N-二甲基乙醇胺含量的氣相色譜法。該方法經(jīng)濟(jì)、實(shí)用，具有很高的應(yīng)用價(jià)值。

2 儀器與試藥

2.1 儀器

安捷倫E7890型氣相色譜儀；安捷倫7697A型頂空進(jìn)樣器；Empower色譜工作站；梅特勒ML240型電子分析天平；色譜柱Aglient DB-624(30m×0.53mm×3.0μm)。

2.2 試藥

N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品(阿拉丁，B170912批，純度為99.5%)；氯化膽堿(國藥集團(tuán)，69008560批，純度為99.5%)；甲醇(德國默克，10951907818批，色譜級)；二甲亞砜(德國默克，K48040300625 批，色譜級)。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

以6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱；起始溫度為40℃，維持5min，以每分鐘20℃的速率升至230℃，維持2.5min；進(jìn)樣口溫度230℃，分流比1:1；檢測器(FID)溫度為250℃；流速為5mL·min-1。頂空條件：加熱箱溫度為100℃；定量環(huán)溫度為105℃；傳輸線溫度為120℃；GC循環(huán)時(shí)間為25min；樣品平衡時(shí)間為20min；進(jìn)樣體積為1.0mL。

3.2 溶液配制

3.2.1 供試品溶液的配制

取氯化膽堿約0.2g，精密稱定，置于20mL頂空瓶中，精密加入二甲亞砜2.0mL，超聲使完全溶解，密封即得。

3.2.2 N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品約250mg，精密稱定，置于50mL容量瓶中，加二甲亞砜適量，超聲使完全溶解，冷卻，用二甲亞砜定容，搖勻，作為N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別精密移取N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.5mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL，置于不同的50mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋到刻度，搖勻即得。

3.2.3 回收率溶液的配制

取氯化膽堿約0.2g，精密稱定，置于20mL頂空瓶中，平行稱取9份。分別精密加入80%、100%、120%的N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mL，密封即得。

表2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3 專屬性

精密量取“3.2”項(xiàng)下的供試品溶液、N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液及空白溶劑二甲亞砜各適量，分別頂空進(jìn)樣1.0mL，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶劑不干擾測定，N,N-二甲基乙醇胺峰與氯化膽堿及其殘留溶劑峰分離度均大于2.0，方法專屬性良好。

3.4 定量限、檢測限

取“3.2.2”項(xiàng)下配制的N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐步稀釋，使S/N約為10，記錄此時(shí)濃度為定量限。繼續(xù)稀釋，使S/N約為3，記錄此時(shí)濃度為檢測限。結(jié)果見表1。

表1 定量限與檢測限結(jié)果

3.5 線性關(guān)系

取“3.2.2”項(xiàng)下配制的5種不同濃度的N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，分別頂空進(jìn)樣1.0mL，記錄色譜圖。按“3.1”項(xiàng)下的方法進(jìn)行測定。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。測得在50～150μg·mL-1范圍內(nèi)，N,N-二甲基乙醇胺濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，線性方程為 y=1.6914x-62.3380，r=0.9991。

3.6 重復(fù)性

取供試品(69008560批)適量，照“3.2.1”項(xiàng)下平行配制6份。以“3.2.2”項(xiàng)下的N,N-二甲基乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對照，按外標(biāo)法計(jì)算供試品溶液中的N,N-二甲基乙醇胺的含量。結(jié)果見表2。

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取“3.2.3”項(xiàng)下的回收率溶液各適量，分別頂空進(jìn)樣1.0ml，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度水平的樣品回收率均在98%～102%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜5.0%，詳見表3。本方法準(zhǔn)確度良好，滿足定量測定的要求。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)語

本研究建立了一種測定氯化膽堿中N,N-二甲基乙醇胺含量的氣相色譜法，經(jīng)驗(yàn)證，該方法專屬、靈敏、準(zhǔn)確，滿足定量分析的要求。然而N,N-二甲基乙醇胺作為一種基因毒性雜質(zhì)，控制限度極低，單一氣相色譜很難達(dá)到要求，往往需要結(jié)合GC-MS進(jìn)行后續(xù)研究。該方法為N,N-二甲基乙醇胺的GC-MS測定法提供了摸索基礎(chǔ)，也能夠幫助企業(yè)初步判斷N,N-二甲基乙醇胺的含量，節(jié)省后續(xù)GC-MS的檢驗(yàn)成本。