（廣州市公安局刑事技術(shù)所，廣東廣州 510440）

在人群擁擠的公交車、地鐵等公眾場合，有時會遇到一些變態(tài)男子用生殖器貼在女性身后摩擦以獲得性高潮的猥褻案件，給受害人帶來嚴重的心理傷害。受害人報案后，嫌疑人即使很快被抓獲，往往也不承認犯罪事實。如何從受害人身上找到嫌疑人留下的精斑成為定罪的關(guān)鍵。嫌疑人一般射精到受害人的衣物上，傳統(tǒng)做法是提取受害人的衣物送檢，檢驗人員直接剪取衣物上可疑精斑進行檢驗，但有些受害人要求不破壞衣物，且檢驗后將衣物返還。作者對近年受理的20宗公眾場所猥褻案件提取的23份衣物上可疑精斑采用棉簽擦拭的方法采集，然后進行精斑預試驗、確證試驗和STR 檢驗，結(jié)果報道如下：

1 材料與方法

1.1 材料

23 份含有可疑精斑的衣物包括裙子、上衣、褲子，均為2014～2019年廣州市公安局刑事技術(shù)所受理的20 宗公交車或地鐵猥褻案的檢材。

其中12宗案件有嫌疑人的口腔拭子作為比對樣本。

1.2 方法

1.2.1 精斑檢材采集：采用肉眼或激光物證勘查儀（上海恒光警用器材有限公司）查找衣物上可疑精斑部位，然后取1 支生物檢材采集與保存套管（廣州浩源實驗器材科技有限公司），在其尖頭棉簽上滴1滴自帶的LTE液濕潤后，反復擦拭衣物上可疑精斑部位10 次以上，放回套管中，3天內(nèi)進行檢驗。再用1支新的生物檢材采集與保存套管棉簽按上述方法擦拭衣物上可疑精斑部位作備份。

1.2.2 精斑預試驗和確證試驗：剪取擦拭后的棉簽頭部約芝麻大小置透明塑料膜上，滴1 滴α-磷酸萘酚-固藍B 試劑［1］進行精斑預試驗。

取剩下的棉簽頭置1.5mL 離心管中，加入200μL TES 緩沖液浸泡約10min，期間振蕩數(shù)次，10000rpm/min 離心1min，取上清100μL 滴加到人精液PSA 金標試劑條（北京芬格爾安科技有限公司）加樣區(qū)進行精斑確證試驗。

1.2.3 DNA 提?。貉b檢材的離心管中加入制備的裂解液（Lysis：1M DTT 為100∶1）500μL，按文獻［2］在Maxwell?16 自動儀（Promega 公司，美國）上進行磁珠提取操作，洗脫體積100μL。人員樣本亦按上法提取DNA。

1.2.4 DNA定量：取提取的精斑DNA模板2μL 按文獻用Quantifiler 法醫(yī)人類DNA 定量試劑盒（AB 公司，美國）在7500 型熒光定量PCR 儀（AB 公司，美國）上進行定量PCR反應(yīng)。

1.2.5 熒光標記STR 復合擴增檢測：采用PowerPlex?21 System（Promega 公司，美國）在ProFlex PCR 擴增儀（AB 公司，美國）上進行復合擴增，擴增體系10μL 中加入DNA 模板1μL。取1μL 擴增產(chǎn)物在AB 3130XL 遺傳分析儀上進行毛細管電泳檢測分型。

2 結(jié)果和討論

23份衣物上可疑精斑擦拭物，采用α-磷酸萘酚-固藍B 試劑進行精斑預試驗，有21 份在1min 內(nèi)呈紫紅色陽性反應(yīng)，進行人精液PSA 金標試劑條反應(yīng)亦出現(xiàn)2 條紫紅色帶的陽性反應(yīng)。10份精斑預試驗和確證試驗均為陽性的擦拭物提取的DNA進行定量PCR反應(yīng)，測得濃度為0.32ng/μL～1.41ng/μL，100μL 洗脫最后得到的體積大約為85μL，因此最后獲得的精斑DNA大約27～120ng，平均DNA 量為73.52 ±10.37ng。采用PowerPlex?21 System 試劑盒擴增檢測，均成功獲得完整的男性STR 分型，13份比中嫌疑人，2 份輸入DNA 數(shù)據(jù)庫中比中前科人員。有2 份擦拭物因α-磷酸萘酚-固藍B試劑精斑預試驗陰性，做確證試驗時剪了少許帶斑跡的衣物和擦拭物一起浸泡30min，結(jié)果仍是陰性，按接觸DNA 提取檢驗亦未檢出STR分型。根據(jù)案情，這是1 宗女事主因在地鐵里摸到后背有濕而懷疑被猥褻的案件，因此可以確定其上衣和裙子上沒有精斑。

對于衣物精斑檢材，常規(guī)做法是直接剪取衣物上的可疑精斑部位進行精斑預試驗、確證試驗及DNA 提取、STR 檢驗。但公交車、地鐵等公眾場合的猥褻案中，犯罪分子侵害的對象往往是年青女子，留有精斑的衣物比較時尚昂貴，受害者即使同意將衣物脫下檢驗，也常要求檢驗時不破壞衣物并檢驗后返還。同時這類案件事主報案時精斑往往未干燥，直接采用棉簽轉(zhuǎn)移的方法操作簡便快捷，不僅方便受害人也方便檢驗人員檢驗。尤其生物檢材采集與保存套管內(nèi)置干燥劑，棉簽懸空放置，可杜絕檢材粘附于包裝物造成的損耗和未及時檢驗造成的腐敗降解［3］。DNA 定量結(jié)果表明，衣物上干燥精斑的1 根擦拭物用磁珠法提取的平均DNA量為73.52±10.37ng，足以進行多次STR 檢驗。為保證將精斑盡可能多轉(zhuǎn)移，可提取2 支擦拭物，1支檢驗，1支以備復核。為證實這種可能性，筆者檢驗了其中5支第2次擦拭的精斑，精斑預試驗和確證試驗同樣均為陽性，并檢出與第1次擦拭物相同的男性STR分型。

筆者曾遇到1 宗猥褻案件，懷疑嫌疑人直接把精液射到受害人的裸露大腿上，受害人自行用紙巾擦拭后報案，并將擦拭的紙巾提交給警方?？紤]到紙巾污染受害人皮膚脫落細胞的可能，故采用了差異裂解法對紙巾上精斑進行DNA提取，但最后上清液和沉淀物提取的DNA均檢出單一的男性STR分型。分析精斑DNA含量遠超過女性皮膚脫落細胞DNA的含量，優(yōu)勢擴增使女性DNA未能檢出。這意味著混有女性皮膚脫落細胞的精斑檢材也可作為純精斑檢材一步提取DNA。

這類公共場所猥褻案定案的關(guān)鍵是精斑的確定。目前精斑的預試驗方法是針對精液中的前列腺液的酸性磷酸酶反應(yīng)。除精液外，部分蔬菜、水果也含有少量酸性磷酸酶，此外，某些避孕藥酸性磷酸酶也呈弱陽性反應(yīng)。因此現(xiàn)在行業(yè)標準“法庭科學DNA 實驗室檢驗規(guī)范（GA/T 383-2014）”中對可疑精斑不再要求預試驗，只要求確證試驗。精斑的確證試驗有精子檢出法和人精液PSA 金標試劑條法。前者最可靠，但對于無精癥或輸精管結(jié)扎術(shù)者的精斑無法檢測，且操作比較繁瑣。后者采用免疫學的方法針對精液中的前列腺特異性抗原進行檢測，靈敏度高，精液稀釋60000 倍仍呈陽性反應(yīng)，且不受精液中有無精子的影響，但一些特殊情況下會出現(xiàn)假陰性或假陽性的情況［4～5］。筆者一直堅持用α-磷酸萘酚-固藍B 試劑進行精斑預試驗，根據(jù)陽性反應(yīng)的強弱決定下一步確證試驗的檢材量，并用TES 充分浸泡震蕩檢材10min 以上進行確證試驗，檢驗近千份可疑精斑檢材從未遇到精斑預試驗與確證試驗均為陰性卻檢出男性STR分型的情況。檢驗的20宗猥褻案23份可疑精斑檢材中，21份精斑預試驗與確證試驗均為陽性的檢材均成功檢出男性STR分型，2份精斑預試驗和確證試驗均為陰性的衣物上可疑斑跡，后來按接觸DNA提取檢驗亦未檢出STR 分型。這說明公眾場合猥褻案中衣物可疑精斑采用棉簽擦拭采集結(jié)合磁珠法提取DNA檢驗是一種簡便快捷的方法。