曾永明 凌經(jīng)昌 陳松武 周麗珠 羅玉芬 谷瑤

【摘 要】文章對(duì)保證農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵要素進(jìn)行分析，結(jié)果表明：提取步驟的濾心分離時(shí)間要嚴(yán)格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴(yán)格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實(shí)時(shí)觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時(shí)液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL時(shí)要準(zhǔn)確;檢測(cè)結(jié)束后，對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證很重要，采用盲樣的空白基質(zhì)加標(biāo)畫標(biāo)準(zhǔn)曲線的辦法判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，得出真值，上報(bào)能力驗(yàn)證結(jié)果，一個(gè)月后有Z值反饋，結(jié)果為滿意。

【關(guān)鍵詞】能力驗(yàn)證;前處理;凈化;基質(zhì)加標(biāo)

【中圖分類號(hào)】S7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-0688（2020）12-0061-03

實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證是指認(rèn)可機(jī)構(gòu)為確保實(shí)驗(yàn)室維持較高的校準(zhǔn)和檢測(cè)水平而對(duì)其能力進(jìn)行考核、監(jiān)督和確認(rèn)的一種活動(dòng)，對(duì)于提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力有重要的意義，是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果真實(shí)水平的有效手段，也是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系持續(xù)改進(jìn)和不斷提高的有效措施。

本文就如何保證農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿意的關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行探討和分析。能力驗(yàn)證的項(xiàng)目多是蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)[1]，一般采用固相微萃取技術(shù)-氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)[2-12]，為了保證黑木耳作為安全、營(yíng)養(yǎng)、保健的食用林產(chǎn)品[3]，要想通過農(nóng)產(chǎn)品黑木耳中五氯硝基苯和氯氰菊酯農(nóng)藥殘留的能力驗(yàn)證，保證能力驗(yàn)證的結(jié)果值滿意，樣品前處理有幾點(diǎn)要注意：提取步驟的濾心分離時(shí)間要嚴(yán)格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴(yán)格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實(shí)時(shí)觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時(shí)液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL要準(zhǔn)確。檢測(cè)結(jié)束后，對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，采用盲樣的空白基質(zhì)加標(biāo)畫標(biāo)準(zhǔn)曲線的辦法，分析判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，得出真值，上報(bào)能力驗(yàn)證結(jié)果。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器與設(shè)備

MS 3 basis旋渦混合器（IKA儀器有限公司），TD5A-WS離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司），VM24固相萃取裝置（博納艾杰爾科技有限公司），WNV-10G氮吹儀（博納艾杰爾科技有限公司），GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津公司），配備電子捕獲ECD檢測(cè)器，色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm毛細(xì)色譜柱）。

1.1.2 試劑與材料

正己烷（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）（140 ℃烘烤4 h）、無水硫酸鈉（分析純，650 ℃灼燒4 h）。凈化小柱用安譜公司的CNWBOND Florisil 1 g、6 mL的弗羅里析柱。2種加標(biāo)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）、氯氰菊酯（Cypermethrin）購(gòu)于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)監(jiān)測(cè)研究所，濃度均為100μg/mL。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用丙酮和正己烷提取試樣中的五氯硝基苯和氯氰菊酯農(nóng)藥，提取溶液經(jīng)濾心、濃縮、凈化、再濃縮，最后用正己烷定容，用氣相色譜儀的電子捕獲檢測(cè)器（ECD）進(jìn)行檢測(cè)。用外標(biāo)法進(jìn)行定性和定量[1]。

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配置

根據(jù)甲基對(duì)硫磷和水胺硫磷的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的定值含量進(jìn)行配置，先確定甲基對(duì)硫磷和水胺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液線性范圍，它會(huì)影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和線性系數(shù)。本實(shí)驗(yàn)選擇4個(gè)濃度點(diǎn)，考核樣品的濃度最好在曲線的中點(diǎn)，以便定量準(zhǔn)確。具體線性范圍根據(jù)檢測(cè)考核樣品粗篩濃度確定。

分別吸取上述農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液100μL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成濃度為1μg/mL的混合工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，保存在4 ℃的冰箱中。檢測(cè)時(shí)，通過稀釋配置共4個(gè)濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，隨考核樣品進(jìn)行氣相色譜檢測(cè)。

1.4 色譜條件

毛細(xì)色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;設(shè)定起始溫度：180 ℃保持8 min，以15 ℃/min的速度升到220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;進(jìn)樣體積：1μL;進(jìn)樣口溫度：250 ℃，分流進(jìn)樣，分流比為1∶50;檢測(cè)器溫度：280 ℃;氮?dú)饬魉伲?0 mL/min;柱流速：2 mL/min。

1.5 樣品的提取

本次能力驗(yàn)證的樣品為已粉碎的干黑木耳樣品，由能力驗(yàn)證組織機(jī)構(gòu)加入五氯硝基苯和氯氰菊酯農(nóng)藥，本實(shí)驗(yàn)室收到1個(gè)黑木耳考核樣品及1個(gè)黑木耳空白樣品，樣品重量各約10 g。

分別稱取黑木耳考核樣品和黑木耳空白樣品各1.0 g于50 mL離心管中，加入9 mL蒸餾水復(fù)原至黑木耳鮮樣狀態(tài)，然后加入5.00 mL丙酮，渦旋1 min，加入15 mL正己烷和1～2 g氯化鈉，蓋上蓋子，MS 3 basis旋渦混合器上渦旋3 min，將離心管放入離心機(jī)，在4 000 r/min離心5 min，吸取上層清液到另一個(gè)50 mL離心管中;再加入10 mL正己烷，用MS3basis旋渦混合器重復(fù)渦旋提取3 min，同樣在4 000 r/min離心5 min，合并兩次提取液，在40 ℃水浴氮吹濃縮至2 mL，待凈化。

1.6 提取液的凈化和定容（見表1）

向SPE小柱（1g，6mL）中填充高約2 cm的無水硫酸鈉，放入VM24固相萃取裝置中進(jìn)行固相萃取操作。在固相萃取柱中，以1.0 mL/min流速加入正己烷+丙酮（9+1）、體積為6.0 mL潤(rùn)洗SPE小柱進(jìn)行活化。以1.5 mL/min 流速加入待凈化樣品提取溶液于SEP小柱中進(jìn)行凈化。洗脫：以1.5 mL/min 流速，依次用2.5mL正己烷+丙酮（9+1）進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。將收集的洗脫液在水浴40 ℃下氮吹濃縮至近干，用正己烷溶解定容為2.0 mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測(cè)。

1.7 上機(jī)檢測(cè)

進(jìn)行氣相色譜上機(jī)檢測(cè)時(shí)，設(shè)置色譜柱溫為程序升溫：開始溫度設(shè)定為180 ℃，保持8 min，以15 ℃/min的速度升至220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;進(jìn)樣口溫度為250 ℃;檢測(cè)器（ECD）溫度為280 ℃;載氣（高純氮≥99.999%）流速為30 mL/min;采用分進(jìn)樣，分流比為1∶50;進(jìn)樣量為1μL。

用五氯硝基苯和氯氰菊酯配制成濃度各為50μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行色譜分析，保留時(shí)間依次為五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）9.346 min、氯氰菊酯（Cypermethrin）28.055 min（如圖1所示）。

2 檢測(cè)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析

2.1 檢測(cè)結(jié)果

五氯硝基苯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示。氯氰菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示。黑木耳考核樣品分析結(jié)果見表2。

2.2 判斷結(jié)果準(zhǔn)確性

當(dāng)上述結(jié)果出來后，需要驗(yàn)證這些結(jié)果的準(zhǔn)確性，通常會(huì)采用加標(biāo)回收率的辦法，蔬菜中農(nóng)藥殘留多有基質(zhì)效應(yīng)，有可能得出的數(shù)據(jù)比實(shí)際加標(biāo)量要大得多，本實(shí)驗(yàn)采用空白基質(zhì)做加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證。

黑木耳空白基質(zhì)樣約10 g，稱取1.0 g樣品后，還剩9 g左右，稱4個(gè)1.0 g黑木耳空白基質(zhì)樣品，分別加入上文的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液100、150、200、300μL，嚴(yán)格按照上文前處理方法重做一遍，得出空白基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線，再重新計(jì)算檢測(cè)結(jié)果。

2.3 上報(bào)結(jié)果并通過

根據(jù)以上空白基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算檢測(cè)結(jié)果，分析判斷結(jié)果在合格范圍內(nèi)，上報(bào)能力驗(yàn)證結(jié)果：五氯硝基苯含量為0.10（mg/kg），氯氰菊酯含量為0.79（mg/kg）;1個(gè)月后有Z值反饋，結(jié)果為滿意。

3 討論

（1）要想通過黑木耳中農(nóng)藥殘留的能力驗(yàn)證，樣品前處理有幾點(diǎn)要注意：提取步驟的濾心分離時(shí)間要嚴(yán)格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴(yán)格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實(shí)時(shí)觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時(shí)液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL要準(zhǔn)確。

（2）試驗(yàn)結(jié)束后，驗(yàn)證結(jié)果很重要，不同的蔬菜有不同的農(nóng)藥殘留，基質(zhì)效應(yīng)都不一樣，回收率也不一樣，要進(jìn)行粗篩，首先得出農(nóng)藥品的大概含量，然后選擇與盲樣品種一樣的蔬菜里加標(biāo)，這時(shí)采用盲樣的空白基質(zhì)加標(biāo)畫標(biāo)準(zhǔn)曲線是最好的辦法。

（3）為防止待測(cè)液中五氯硝基苯和氯氰菊酯衰減，在前處理結(jié)束后樣品需及時(shí)上機(jī)檢測(cè)。上機(jī)測(cè)定順序：先測(cè)試劑空白和樣品空白，再由低濃度到高濃度依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后加測(cè)一次試劑空白，最后測(cè)定考核樣品。每個(gè)樣品必須上機(jī)平行測(cè)定兩次，以便降低因儀器不穩(wěn)定造成的誤差。結(jié)果取平均值，忌諱人為剔除平行性差的樣品結(jié)果。

（4）認(rèn)真分析樣品檢測(cè)全過程及色譜圖、計(jì)算結(jié)果等，細(xì)致比較試劑空白和樣品空白基質(zhì)的色譜圖，判別考核樣品中添加濃度含量低的農(nóng)藥，防止出現(xiàn)漏判、誤判，確保本次能力驗(yàn)證結(jié)果滿意。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]NY/T 761—2008，蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定[S].

[2]GB/T 5009.146—2008，植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測(cè)定[S].

[3]GB/T 5009.19—2008，食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定[S].

[4]何繼東.固相萃取-定量濃縮在蔬菜水果農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2016，22（1）：75-76.

[5]陸英洲，陸德勝.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留方法的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（9）：2185-2186.

[6]翟碩莉，張秀豐.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)桃中多種農(nóng)藥殘留量[J].衡水學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，20（1）：8-12.

[7]孟玲芝，劉坤，劉榮光，等.固相萃取技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].吉林農(nóng)業(yè)，2018（12）：55.

[8]陳華鳳，陳霞，劉剛，等.固相萃取技術(shù)在茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].四川農(nóng)業(yè)科技，2018（6）：45-46.

[9]段麗村，周建于，李佳欣，等.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)血清中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的研究[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2016，35（12）：1606-1610.

[10]曾永明，陳松武，周麗珠，等.固相萃取-氣相色譜法測(cè)定林業(yè)灌溉水中、滴滴涕殘留量[J].企業(yè)科技與發(fā)展，2019，455（9）：144-145.

[11]曾永明，秦榮秀，陳明江，等.食材型檸檬香茅6種有機(jī)磷農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果分析[J].食品工業(yè)，2019，38（9）：301-303.

[12]曾永明，陳松武，羅玉芬，等.麻竹筍6種有機(jī)磷農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果分析[J].企業(yè)科技與發(fā)展，2017，431（9）：54-56.

[13]梁明玉，羅先群，黃雪星.茶枝屑栽培黑木耳試驗(yàn)初探[J].廣西林業(yè)科學(xué)，2019，48（3）：404-407.