陽文武 萬莉 羅長琴 周祥德
建立測定河粉中脫氫乙酸的高效液相色譜方法。方法:用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸,經(jīng)脫脂、去蛋白處理,以甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液(5:95)為流動相,流速1.0mL/min,在293nm波長下檢測。結(jié)果:在1.00mg/L~200 mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)r=0.9999,目標(biāo)物的加標(biāo)回收率為95.3%~99.5%,RSD為0.50%~1.2%,檢測限為1.0mg/kg。結(jié)論:該方法具有靈敏度高、精密度、準(zhǔn)確度良好、分析速度快、操作簡單等優(yōu)點,可以用于測定河粉中的脫氫乙酸。
雪白透明、韌而爽滑的“河粉”一直是人民鐘愛的民間傳統(tǒng)美食。按規(guī)定(GB 2760-2014)河粉中不允許添加防腐劑。但近年來,不法商人采取在河粉中添加脫氫乙酸,達(dá)到防腐保鮮,延長保質(zhì)期的目的。而脫氫乙酸是一種廣譜型防腐劑,在高劑量才能抑制細(xì)菌,食用過量有礙健康,可能會導(dǎo)致出現(xiàn)胃腸道不適、肺栓塞、皮膚反應(yīng)等副作用。目前GB 5009.121-2016規(guī)定了部分食品中脫氫乙酸的檢測方法,河粉可參考執(zhí)行,但需要對檢驗方法進(jìn)行驗證優(yōu)化。為更好防范河粉中添加脫氫乙酸,保障人民群眾吃得安全放心,需要通過對河粉中脫氫乙酸進(jìn)行檢測研究。目前,測定脫氫乙酸的方法有紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法。本文采用高效液相色譜法檢測河粉中脫氫乙酸,操作簡便,準(zhǔn)確度、精密度好,靈敏度高,完全能夠滿足于檢驗機構(gòu)日常檢測任務(wù)的要求。
儀器與試藥
島津LC-20A型高效液相色譜儀,KH-2000DB超聲清洗機,Sartorius萬分之一電子分析天平(QUINTIX224-1CN),脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(購買于北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司,編號為BST002-1701、濃度1000mg/L),甲醇、乙酸銨為色譜純,其他試劑均為分析純。
方法與結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn)系列工作液配制
分別精密吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用水將其稀釋成脫氫乙酸含量分別為1.00mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、50.0 mg/L、100mg/L、200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。
供試品溶液的制備
稱取樣品2g,置于50mL離心管中,加入約30mL水、5mL硫酸鋅溶液,用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.5,加水稀釋至刻度,搖勻,超聲提取10min,4000r/min 離心10min,取上清液過0.45μm 有機濾膜,供高效液相色譜測定。
色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗
色譜柱:Angel C18(4.6mm× 250 mm,5μm),流動相:甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液(5:95),流速 1.0mL/min,檢測波長293nm,柱溫30℃,進(jìn)樣量:10μL。在上述色譜條件下,脫氫乙酸的保留時間為12.min,且色譜峰分離度良好,色譜圖見圖1。
1.脫氫乙酸
檢出限
按GB/T16631-2008《高效液相色譜法通則》以3倍信噪比計算檢測限為1.0mg/kg。
精密度試驗
精密吸取濃度為10.0 mg/L對照品溶液10μL,按“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6次,測定成分峰面積。結(jié)果脫氫乙酸峰面積的RSD為0. 66% 。
加樣回收率試驗
精密稱取已知含量(含脫氫乙酸0.266mg/g)的河粉9份,每份約1g,以三份為一組,每組分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL,按“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液,按“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項下色譜條件進(jìn)樣測定,計算加樣回收率,結(jié)果見表1。結(jié)果每組的平均回收率分別為95.3%、98.7%、99.5%,RSD分別為1.2%、0.59%、0.50%。表明該方法準(zhǔn)確度良好。
穩(wěn)定性試驗
取同一試樣溶液分別在0,4,8,12,16,20h進(jìn)樣測定。結(jié)果脫氫乙酸峰面積的RSD為0.72%,說明加標(biāo)試樣溶液在20h內(nèi)穩(wěn)定。
樣品測定
取13批河粉,按“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液,在“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項色譜條件下進(jìn)行測定,外標(biāo)法定量。結(jié)果見表2。可以看出河粉中這種違法添加已經(jīng)非常泛濫,不合格率高達(dá)84.6%,必須采取有效措施加以控制。
討論
3.1在供試品溶液制備中,比較了超聲后用正丁醇除雜對測定結(jié)果的影響,最終確定了“2.2”項中的方法。
3.2系統(tǒng)適用性試驗中,比較了甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液 3種流動相,同時比較了不同流速(0. 8、1. 0、1.2mL/min)對測定結(jié)果的影響,最終確定了“2.3”項的色譜條件。脫氫乙酸的最大吸收波長為293nm,故選擇293nm作為檢測波長。
作者簡介:陽文武,主管中藥師,從事食品藥品檢驗工作;
通訊作者:周祥德,高級工程師,從事食品藥品檢驗工作。
重慶市萬州食品藥品檢驗所