HPLC法測定河粉中脫氫乙酸

陽文武 萬莉 羅長琴 周祥德

建立測定河粉中脫氫乙酸的高效液相色譜方法。方法：用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸，經(jīng)脫脂、去蛋白處理，以甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液（5：95）為流動相，流速1.0mL/min，在293nm波長下檢測。結(jié)果：在1.00mg/L～200 mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，目標(biāo)物的加標(biāo)回收率為95.3%～99.5%，RSD為0.50%～1.2%，檢測限為1.0mg/kg。結(jié)論：該方法具有靈敏度高、精密度、準(zhǔn)確度良好、分析速度快、操作簡單等優(yōu)點，可以用于測定河粉中的脫氫乙酸。

雪白透明、韌而爽滑的“河粉”一直是人民鐘愛的民間傳統(tǒng)美食。按規(guī)定（GB 2760-2014）河粉中不允許添加防腐劑。但近年來，不法商人采取在河粉中添加脫氫乙酸，達(dá)到防腐保鮮，延長保質(zhì)期的目的。而脫氫乙酸是一種廣譜型防腐劑，在高劑量才能抑制細(xì)菌，食用過量有礙健康，可能會導(dǎo)致出現(xiàn)胃腸道不適、肺栓塞、皮膚反應(yīng)等副作用。目前GB 5009.121-2016規(guī)定了部分食品中脫氫乙酸的檢測方法，河粉可參考執(zhí)行，但需要對檢驗方法進(jìn)行驗證優(yōu)化。為更好防范河粉中添加脫氫乙酸，保障人民群眾吃得安全放心，需要通過對河粉中脫氫乙酸進(jìn)行檢測研究。目前，測定脫氫乙酸的方法有紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法。本文采用高效液相色譜法檢測河粉中脫氫乙酸，操作簡便，準(zhǔn)確度、精密度好，靈敏度高，完全能夠滿足于檢驗機構(gòu)日常檢測任務(wù)的要求。

儀器與試藥

島津LC-20A型高效液相色譜儀，KH-2000DB超聲清洗機，Sartorius萬分之一電子分析天平（QUINTIX224-1CN），脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（購買于北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司，編號為BST002-1701、濃度1000mg/L），甲醇、乙酸銨為色譜純，其他試劑均為分析純。

方法與結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)系列工作液配制

分別精密吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水將其稀釋成脫氫乙酸含量分別為1.00mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、50.0 mg/L、100mg/L、200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

供試品溶液的制備

稱取樣品2g，置于50mL離心管中，加入約30mL水、5mL硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至7.5，加水稀釋至刻度，搖勻，超聲提取10min，4000r/min 離心10min，取上清液過0.45μm 有機濾膜，供高效液相色譜測定。

色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Angel C18（4.6mm× 250 mm，5μm），流動相：甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液（5：95），流速 1.0mL/min，檢測波長293nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量：10μL。在上述色譜條件下，脫氫乙酸的保留時間為12.min，且色譜峰分離度良好，色譜圖見圖1。

1.脫氫乙酸

檢出限

按GB/T16631-2008《高效液相色譜法通則》以3倍信噪比計算檢測限為1.0mg/kg。

精密度試驗

精密吸取濃度為10.0 mg/L對照品溶液10μL，按“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6次，測定成分峰面積。結(jié)果脫氫乙酸峰面積的RSD為0. 66% 。

加樣回收率試驗

精密稱取已知含量（含脫氫乙酸0.266mg/g）的河粉9份，每份約1g，以三份為一組，每組分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL，按“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液，按“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項下色譜條件進(jìn)樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果每組的平均回收率分別為95.3%、98.7%、99.5%，RSD分別為1.2%、0.59%、0.50%。表明該方法準(zhǔn)確度良好。

穩(wěn)定性試驗

取同一試樣溶液分別在0，4，8，12，16，20h進(jìn)樣測定。結(jié)果脫氫乙酸峰面積的RSD為0.72%，說明加標(biāo)試樣溶液在20h內(nèi)穩(wěn)定。

樣品測定

取13批河粉，按“供試品溶液的制備”項下方法制備供試品溶液，在“色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗”項色譜條件下進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。結(jié)果見表2。可以看出河粉中這種違法添加已經(jīng)非常泛濫，不合格率高達(dá)84.6%，必須采取有效措施加以控制。

討論

3.1在供試品溶液制備中，比較了超聲后用正丁醇除雜對測定結(jié)果的影響，最終確定了“2.2”項中的方法。

3.2系統(tǒng)適用性試驗中，比較了甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液 3種流動相，同時比較了不同流速（0. 8、1. 0、1.2mL/min）對測定結(jié)果的影響，最終確定了“2.3”項的色譜條件。脫氫乙酸的最大吸收波長為293nm，故選擇293nm作為檢測波長。

作者簡介：陽文武，主管中藥師，從事食品藥品檢驗工作;

通訊作者：周祥德，高級工程師，從事食品藥品檢驗工作。

重慶市萬州食品藥品檢驗所