柄果海桐化學(xué)成分研究(III)*

張呂麗， 吳云飛， 李祖強(qiáng)， 羅蕾

(1．云南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650500；2．云南大學(xué) 化學(xué)科學(xué)與工程學(xué)院，云南 昆明 650091)

海桐科(Pittosporaceae)海桐花屬(Pittosporum)植物全球資源豐富，全世界約160種，主要分布于大洋洲、西南太平洋各島嶼、東南亞及亞洲東部熱帶[1].在我國海桐花屬植物資源分布也較豐富，有46種，8變種，多分布于云南、四川、福建、廣東、廣西及貴州等地.云南有16種該屬植物，其中柄果海桐(PittosporumpodocarpumGagnep)僅分布在云南和四川，是民間藥用植物，其枝葉常用于治療扁桃體炎、咽喉炎和止血等.前文已報(bào)道從滇產(chǎn)柄果海桐枝葉中分離、提純并鑒定出16個(gè)化合物[2-3].本文報(bào)道從該植物中分離出的另外7個(gè)單體，鑒定為:二十四酸甘油酯 (tetracosanoicacid glyceride,1),β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (β-stigmasterol -3-O-β-D-glucopyranoside,2),β-豆甾醇 (β-stigmasterol,3),咖啡酸 (caffeic acid,4),(2S,3S, 4R,8E)-2-[(2R)-2-羥基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇((2S,3S,4R,8E)-2 -[(2R) -2-hydroxypentacosanoylamino]-8-octadecene -1,3,4 -triol，5),楤木腦甙(Aralia cerebroside,6),葡萄糖(glucose,7).單體1-7均屬首次從此植物中分離得到.細(xì)胞毒試驗(yàn)表明，化合物2,3,5,6具有細(xì)胞毒活性.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Xevo TQ-S質(zhì)譜儀(美國沃特世公司)；Advance 500型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))(Bruker公司)；柱層析用37～75 μm及40～60 μm硅膠(青島海洋化工廠)；薄層析(TLC)用F254硅膠片(Merck公司)；其余試劑均為分析純.

1.2 提取和分離

柄果海桐枝葉35 kg，以95%乙醇浸泡，并濃縮提取液，得粗提物浸膏2.1 kg，此浸膏于索氏提取器中，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等五種有機(jī)溶劑依次提取，并濃縮提取液，分別得到五個(gè)組分：石油醚組分(100 g)、氯仿組分(80 g)、乙酸乙酯組分(80 g)、丙酮組分 (100 g)和甲醇組分 (800 g).各組分經(jīng)過多次硅膠柱層析及重結(jié)晶等方法，提純得到7個(gè)單體.

1.3 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)

用處于對數(shù)生長期的人白血病細(xì)胞系(K562)，采用細(xì)胞染色法，分別對柄果海桐中的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇萃取的五個(gè)組分進(jìn)行體外細(xì)胞毒試驗(yàn)，繪制各個(gè)組分對K562細(xì)胞生長抑制率圖，由此測算出半數(shù)致死濃度IC50，篩選出活性組分(IC50≤20 g/mL).采用同樣的方法，對分離提純所得的單體進(jìn)行細(xì)胞毒試驗(yàn)，篩選出抗癌活性成分.

2 結(jié)果與討論

2.1 組分及單體細(xì)胞毒活性

柄果海桐粗提物分步提取出的石油醚組分、氯仿組分、乙酸乙酯組分、丙酮組分和甲醇組分對K562細(xì)胞的IC50分別為4.6、12.0、20.0、31.0 μg/mL和33.0 μg/mL.試驗(yàn)結(jié)果表明，石油醚、氯仿及乙酸乙酯提取組分有一定的細(xì)胞毒活性.化合物2,3,5,6對K562細(xì)胞的IC50分別為12.0、4.6、20.0 μg/mL和14.0 μg/mL，具有一定的細(xì)胞毒活性.

2.2 單體結(jié)構(gòu)鑒定

通過質(zhì)譜(MS)和核磁共振(NMR)等波譜分析的方法，對分離提純的7個(gè)單體分別進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，分別為:二十四酸甘油酯 (1),β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2),β-豆甾醇 (3),咖啡酸 (4),(2S,3S,4R,8E) -2- [(2R)-2-羥基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇 (5),楤木腦甙(6),葡萄糖(7).單體1-7均為首次從該植物中分離得到.化合物1-7的結(jié)構(gòu)見圖1.

化合物1,白色粉末，溶于吡啶，分子式為：C27H54O4，ESI-MS(m/z):465[M+Na]+，m.p.79～81℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N)(ppm)δ:4.12(2H,dd,J=5.5,1.5 Hz,H-1),3.94(1H,m,H-2),3.62(2H,m,H-3),2.34(2H,t,J=7.5 Hz,H-2′),1.63(2H,m,H-3′),1.25 (40H,m,J=26.1,21.6 Hz,H-4′～23′ ),0.85(3H,t,J=6.8 Hz,H-24′);13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm) δ:71.1(C-1),66.9(C-2),64.4(C-3),173.9(C-1′),34.6(C-2′),29.9～29.5 (C-4′～21′),32.3(C-22′),25.5(C-3′),23.1(C-23′),14.4(C-24′).上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,鑒定為二十四酸甘油酯.

化合物2,白色粉末，溶于吡啶，分子式：C35H58O6，ESI-MS(m/z):573[M-1]-，m.p.275～277 ℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N) (ppm)δ:5.34(1H,d,J=4.7Hz,H-6),5.19(1H,dd,J=15.1,8.7 Hz,H-22),5.07(1H,dd,J=15.1,8.6 Hz H-23),5.04(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′of Glc),4.59(1H,dd,J=12.0,1.5Hz,Ha-6′),4.41(1H,dd,J=12.0,5.6Hz,Hb-6′),4.30(2H,m,H-3′,4′) ,4.08(1H,t,J=7.8 Hz,H-2′),3.97(1H,m,H-5′),3.99(1H,m,H-3),1.06(3H,d,J=7.0 Hz),0.93(3H,s),0.91(3H,d,J=6.5 Hz),0.88(3H,t,J=7.0Hz),0.85(3H,d,J=6.5 Hz),0.65(3H,s).經(jīng)波譜數(shù)據(jù)分析，并與已知物波譜數(shù)據(jù)及TLC對照[6-7]，鑒定化合物2為β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷.

化合物3,白色針晶，易溶于氯仿，分子式：C29H48O，ESI-MS(m/z):413[M+H]+，m.p.145～146 ℃.1H NMR(500 MHz,CDCl3) (ppm)δ:5.37(1H,d,J=4.7 Hz,H-6),5.18(1H,dd,J=15.1,8.7 Hz,H-22),5.03(1H,dd,J=15.1,8.6 Hz,H-23),3.55(1H,m,H-3),1.08(3H,d,J=6.6 Hz),1.04(3H,s),0.88(6H,d,J=6.4 Hz),0.82(3H,d,J=6.4 Hz),0.71(3H,s).經(jīng)波譜數(shù)據(jù)分析，并與已知物波譜數(shù)據(jù)[5-6]及TLC對照，鑒定化合物3為β-豆甾醇.

化合物4,白色針晶，溶于甲醇，分子式為：C9H8O4，ESI-MS(m/z):163[M-H]-，m.p.224～227℃.1H NMR(500 MHz,Me2CO-d6) (ppm)δ:7.56(1H,d,J=15.9 Hz,H-3),7.05(1H,dd,J=9.0,4.5 Hz,H-9),7.00(1H,d,J=2.0 Hz,H-5),6.89(1H,d,J=8.2 Hz,H-8),6.28 (1H,d,J=15.9 Hz,H-2) .13C NMR(125 MHz,Me2CO-d6)(ppm)δ:167.3(C-1),114.2(C-2),145.4(C-3),126.8(C-4),115.0(C-5),145.0(C-6),147.8(C-7),115.5(C-8),121.6(C-9).上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,鑒定為咖啡酸.

化合物5,白色粉末，溶于吡啶，分子式為：C43H85O5N，ESI-MS(m/z):718[M+Na]+，m.p.131～132 ℃.13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm)δ:61.8(C-1),52.7(C-2),76.6 (C-3),72.7(C-4),33.6(C-5),26.5(C-6),33.1(C-7),130.6(C-8),130.5(C-9),32.8(C-10),29.5～30.4(C- 11～15),175.0(C-1′),72.2(C-2′),35.5(C-3′),25.6(C-4′),29.3(C-5′),29.5～30.4(C-6′～22′) 31.9(C-16,C-23′),22.7(C-17,C-24′),14.1(C- 18,C-25′).上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,鑒定為(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-羥基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇.

化合物6,白色粉末，溶于吡啶，分子式為：C40H77O10N，ESI-MS(m/z):754[M+Na]+， 770[M+K]+，1485[2M+Na]+，m.p.215～217 ℃.1H NMR(500 MHz,C5D5N) (ppm)δ:8.58(1H,d,J=9.2 Hz,N-H),5.56(1H,dt,J=5.6,15.6 Hz,H-9),5.45(1H,dt,J=5.8,15.6 Hz,H-8),5.24(1H,m,H-2),4.95(1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),4.72(1H,dd,J=10.6,6.7 Hz,H-1),4.57(1H,m,H-2′),4.48(1H,dd,J=3.1,12.8 Hz,H-6″),4.33(1H,dd,J=5.1,12.9 Hz,H-6″),4.29(1H,m,H-3),4.33(1H,H-4 ″ ),4.19(2H,m,H-4,3″),3.99(1H,t,J=7.8 Hz,H-2″),3.88(1H,m,H-5″),1.24[s,(CH2)n],0.87[6H,td,J= 6.8,3.3 Hz,(-CH3)2].13C NMR(125 MHz,C5D5N) (ppm)δ:70.7(C-1),52.0(C-2),76.2(C-3),72.7(C-4),32.4(C-7),131.2(C-8),131.0(C-9),33.3(C-10),176.1(C-1′),72.7(C-2′),105.8(C-1″),75.4(C-2″),78.7(C-3″),71.4(C-4″),78.8(C-5″),62.9(C-6″),35.9～23.3[(-CH2)25],14.6(C-18,C-16′).上述波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致,鑒定為楤木腦甙.

化合物7,白色粉末，溶于吡啶，分子式為：C6H12O6，ESI-MS(m/z):203[M+Na]+，m.p.168～169 ℃.與標(biāo)準(zhǔn)樣品用TLC對照一致，故鑒定化合物7為葡萄糖.

2.3 討論

課題組在前期的篩選工作已確定滇產(chǎn)柄果海桐的粗提物具有抗癌活性，所以研究是在抗癌活性篩選結(jié)果指導(dǎo)下，對柄果海桐枝葉的有效部位進(jìn)行分離提純，鑒定出7個(gè)單體.這些單體均是首次從該植物中分離得到.通過細(xì)胞毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其中的4個(gè)單體，β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2)、β-豆甾醇 (3)、(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-羥基二十五酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇 (5)和楤木腦甙(6)具有細(xì)胞毒活性，即為該植物中的抗癌活性成分.

圖1 化合物1-7的結(jié)構(gòu)

與課題組之前的研究即文獻(xiàn)[2]和[3]相比，本文報(bào)道了與之前不同的7個(gè)成分，化合物的結(jié)構(gòu)類型豐富多樣，有甾醇、甘油酯、咖啡酸和神經(jīng)酰胺等類，與課題組從海桐屬另一植物羊脆木(PittosporumkerriiCraib)中分離出來的化合物[7,10-12]也有部分相似.