草莓品種離體繁殖中NAA 的作用

周秋蓮 張林 田前進 申子昂 李新賢

（1.華南農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學系 廣東 廣州 510000 2.煙臺青旗農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司 山東 煙臺 264000）

草莓的離體快繁一般采用莖尖培養(yǎng)獲得脫毒幼芽，通過叢芽培養(yǎng)增殖，再將叢芽分出單芽進行生根培養(yǎng)后練苗移栽[1-3]。有關草莓叢芽培養(yǎng)的研究表明，適當?shù)募毎至阉睾蜕L素的配比是提高培養(yǎng)效率的關鍵[4-6]，一般細胞分裂素用0.5mg/L 濃度的6-BA[3、7-10]，生長素用濃度0～0.5mg/L 的NAA[3、7-8、11-13]。何歡樂等[3]認為草莓“豐香”最優(yōu)的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L，潘超等[9]認為“紅豐”品種的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2～1.0mg/L，二者均不需要添加NAA。而翟婷婷等[14]認為“紅顏”和“甜查理”增殖培養(yǎng)基最適宜的NAA 濃度分別為0.1mg/L 和0.5mg/L，李慧采用濃度為0.2mg/L 的NAA 獲得了較高的不定芽再生率。李曉亮的研究表明，高濃度的生長素（NAA）會誘導叢芽產(chǎn)生愈傷組織，而愈傷組織的形成會影響草莓種苗的綜合素質[13]。目前關于叢芽增殖培養(yǎng)基的報道多以一至兩個草莓品種作為供試材料，對于叢芽增殖培養(yǎng)中NAA 的效應，尤其是NAA 濃度與草莓品種的互作還鮮有報道。本實驗選用草莓品種豐香、佐賀清香和盧比，研究NAA 濃度對不同草莓品種叢芽培養(yǎng)的影響，為建立高效的草莓離體繁殖體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

以豐香、佐賀清香和盧比三個草莓品種的脫毒試管苗為材料，取其中生長健壯的單芽接種。

1.2 實驗設計

基本培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂8.0g/L，6-BA 的濃度為0.5mg/L，不同處理的NAA 濃度分別為0（對照組）、0.05、0.10、0.15 和0.20mg/L，每個濃度處理接種芽30 個（6 瓶），設3 次重復。在25℃，光照/黑暗為12h/12h，光照強度1500lux 的條件下培養(yǎng)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

接種第30d，對每個外植體進行調查，觀察長度大于0.5cm幼芽數(shù)量，以及愈傷組織有無，若基部發(fā)生愈傷組織的則測量愈傷組織的直徑。按以下公式計算叢芽增殖系數(shù)：

增殖系數(shù)=培養(yǎng)30d 的幼芽總數(shù)/接種外植體總數(shù)

數(shù)據(jù)通過軟件SAS9.2 進行方差分析、平均數(shù)的多重比較以及相關分析。

2 結果與分析

2.1 NAA 濃度對草莓品種叢芽增殖系數(shù)的影響

叢芽增殖系數(shù)的NAA 濃度和品種兩因素方差分析結果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作，以下就各個品種在不同NAA 濃度下的叢芽增殖系數(shù)分別進行分析。

各個處理三個重復的叢芽增殖系數(shù)平均數(shù)列于表1。

豐香在叢芽增殖培養(yǎng)基中增殖系數(shù)隨NAA 濃度的增高而下降（表1）。NAA 濃度為0mg/L 增殖系數(shù)最大，為2.47；NAA 濃度為0.05mg/L 時，增殖系數(shù)為2.20，與0mg/L 處理無顯著性差異；NAA 濃度為0.1mg/L 時，增殖系數(shù)為1.72，下降幅度加大，與前兩個處理間存在顯著性差異；NAA 濃度增加到0.15mg/L 時，增殖系數(shù)為1.96，與0.1mg/L 處理無顯著性差異；NAA 濃度為0.2mg/L時，增殖系數(shù)最低，為1.48。

表1 不同NAA 濃度下的草莓品種叢芽增殖系數(shù)

盧比在不同濃度NAA 的處理中叢芽增殖系數(shù)表現(xiàn)先升后降的趨勢。NAA 濃度為0.05mg/L 時，獲得最高增殖系數(shù)（2.98），與其它4 個處理間達到顯著性差異；NAA 濃度為0、0.1mg/L 和0.15mg/L 處理的增殖系數(shù)相近，僅相差約0.2；NAA 濃度為0.20mg/L 時，增殖系數(shù)低至2.07。

佐賀清香不同濃度NAA 的處理之間叢芽增殖系數(shù)都有顯著性差異，也表現(xiàn)先升后降的趨勢。0mg/L 時增殖系數(shù)最低為2.28，0.05mg/L 處理增殖系數(shù) 略有增加，為2.74；NAA 濃 度0.10mg/L 時，增殖系數(shù)最高，為3.87；NAA 濃度為0.15mg/L 時，增殖系數(shù)下降了0.52，為3.36；NAA 濃度為0.2mg/L 時，增殖系數(shù)為2.73，是所有處理中最小的。

本研究結果表明，NAA 濃度對草莓離體繁殖的效率有顯著作用，存在兩種作用模式：一種是無添加NAA 的處理繁殖系數(shù)最高，NAA 濃度增高繁殖系數(shù)呈下降趨勢，如品種豐香；另一種是添加適當?shù)腘AA 有利于芽增殖，超過一定限度時增殖系數(shù)下降，盧比和佐賀清香分別在NAA 濃度0.05 和0.1mg/L 處理呈現(xiàn)最高增殖系數(shù)。3 個品種的數(shù)據(jù)一致顯示，NAA 濃度太高對芽增殖不利，當濃度達到0.2mg/L 時，繁殖系數(shù)均較低。

2.2 NAA 濃度對草莓叢芽繁殖外植體愈傷組織形成的影響

愈傷組織直徑的兩因素方差分析結果表明，草莓品種間、NAA 濃度間均存在極顯著（P＜0.01，下同）差異，說明NAA 濃度和基因型對叢芽繁殖外植體愈傷組織的形成都有作用，草莓品種和NAA 濃度之間也存在極顯著的互作。

各個處理三個重復的愈傷組織直徑平均數(shù)列于表2。

表2 不同NAA 濃度下草莓品種叢芽培養(yǎng)外植體的愈傷組織直徑（cm）

表2 可見，3 個供試品種在不同濃度NAA 的叢芽增殖培養(yǎng)基中，愈傷組織直徑都有顯著差異，而且NAA 濃度愈高，愈傷組織的直徑愈大。各個品種不添加NAA 的處理皆未見愈傷組織，開始形成愈傷組織的NAA 濃度不同，盧比和佐賀清香在0.1mg/L下觀察到愈傷組織形成，而豐香在0.15mg/L 開始形成愈傷組織。在相同NAA 濃度下，不同品種的愈傷組織直徑也是不同的，愈傷組織直徑最大的是在較低NAA 濃度下就可見愈傷組織的佐賀清香品種。盧比在0.1mg/L 濃度下有少量愈傷組織，大于未形成愈傷組織的豐香；而在0.15mg/L 和0.2mg/L 濃度下豐香的愈傷組織直徑大于盧比。對愈傷組織直徑與芽繁殖系數(shù)進行了相關分析，相關系數(shù)為0.2557，二者無顯著相關關系，說明在此實驗的培養(yǎng)期間內愈傷組織的形成并未對叢芽增殖造成大的影響。

3 討論

本實驗結果表明，NAA 對草莓離體培養(yǎng)芽增殖的作用隨品種而不同。豐香繁殖系數(shù)隨NAA 濃度增高而降低，NAA 為0 時繁殖系數(shù)最高；盧比和佐賀清香則先增后降，分別在添加0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 的培養(yǎng)基中得到最佳增殖系數(shù)。NAA 濃度達到0.2mg/L 時，3 個品種繁殖系數(shù)均顯著下降。

草莓是一種在組培快繁過程中極易發(fā)生變異的作物[15]，許多研究表明，在組織培養(yǎng)的愈傷組織階段易于產(chǎn)生遺傳性的變異。李曉亮等[13]認為NAA 濃度的增加會轉變根的發(fā)生方式（根從愈傷組織發(fā)出），最終影響草莓種苗的綜合素質[17]。因此，在芽增殖系數(shù)相同的情況下，以不形成或少形成愈傷組織的培養(yǎng)條件為好。本研究中雖然0.05mg/L 和0.1mg/LNAA 中盧比和佐賀清香得到了較高的芽增殖系數(shù)，但由于有不同程度的愈傷組織形成，發(fā)生變異的風險較大。而在6-BA 添加濃度為0.5mg/L、NAA 為0時，3 個品種均未產(chǎn)生愈傷組織。因此，可以初步認為該激素配比是相對安全的。

有關草莓組培中激素和品種間的互作，袁惠燕在不同6-BA濃度的草莓莖尖培養(yǎng)中觀察到，供試草莓品種受激素條件的影響不同可分為兩種，穩(wěn)定型品種莖尖培養(yǎng)易得到良好效果，而敏感型品種只有選擇最適激素條件才能獲得滿意的培養(yǎng)效果[16]。本研究也觀察到了基因型與NAA 濃度的互作。因此，種苗離體快繁中有必要為不同品種配套合適的激素濃度。