HPLC法測定甘草中甘草苷、甘草酸銨含量

何書平

【摘 要】目的：飲片廠采購甘草為研究對象，測定甘草苷、甘草酸銨含量。用高效液相色譜法測定甘草中甘草苷、甘草酸銨含量。方法：色譜柱為C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液（梯度洗脫），檢測波長為237nm。結(jié)果：結(jié)果表明，甘草中甘草苷、甘草酸銨含量符合2015年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】甘草;甘草苷;甘草酸銨;水分測定;含量測定;高效液相色譜法

【中圖分類號】R927.2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019（2020）06--01

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖。性平味甘，歸心、肺、脾、胃經(jīng)。補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥[1]。甘草是一味傳統(tǒng)的中藥材，有“國老”之稱[2]?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載甘草具有主五臟六腑寒邪氣、堅(jiān)筋骨、長肌肉、倍氣力、金瘡腫、解毒之功效。甘草提取物主要活性成分有甘草皂苷、甘草酸、甘草次酸，甘草總黃酮、甘草苷及甘草多糖等[3]。甘草的藥理主要是抗炎抗菌[4]、抗心腦再灌注損傷[5]、氧化衰老[6]、抗腫瘤[7]、增強(qiáng)免疫[8]等，這些與甘草提取物活性成分的藥理作用密不可分。

1 實(shí)驗(yàn)材料：甘草粉末（過三號篩）。

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器：Aglient高效液相色譜儀、101-1-S-Ⅱ型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、稱量瓶、BS/BT系列電子天平

1.2 試劑：甘草苷對照品、甘草酸銨對照品、乙腈（色普純）、乙醇（分析純）、磷酸。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 水分測定 甘草水分測定用2015年版《中國藥典》0832水分測定法第二法（烘干法）[9]，取供試品2-5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。

3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱為C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液（梯度洗脫），檢測波長為237nm。

時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%） 流動(dòng)相B（%）

0～8 19 81

8～35 19→50 81→50

35～36 50→100 50→0

36～40 100→19 0→81

對照品溶液的制備：取甘草苷對照品、甘草酸銨對照品適量，精密稱定，加70%乙醇分別制成每1ml含甘草苷20?g、甘草酸銨對照品0.2mg的溶液，即得（甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.0207）。供試品溶液的制備：取2份甘草粉末（過三號篩）約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10?l，注入液相色譜儀測定。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 水分測定結(jié)果

水分% 平均水分%

樣品1 6.6 6.7

樣品2 6.8

4.2 甘草苷對照品、甘草酸銨對照品色譜圖、甘草樣品色譜圖（圖1、2）

4.3 含量結(jié)果 測量對照品溶液和供試品溶液中待測物質(zhì)的峰面積，按下式計(jì)算含量：，見表1、表2、表3。

5 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)對中藥飲片廠采購甘草對照2015年版《中國藥典》，用HPLC法對其進(jìn)行含量測定，按干燥品計(jì)算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%、甘草酸銨（C42H62O16）不得少于2.0%。收購甘草符合藥典規(guī)定含量，控制該藥材的含量，保證飲片的質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

國家藥典委員會.中國藥典，一部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015.

張耀峰.甘草及其活性成分的藥理活性研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究，2019，11（9）：141-142.

陳保華，高穎.甘草及其制品在牙膏中的應(yīng)用[J].口腔護(hù)理用品工業(yè)，2017，27（6）：6.

董金香，鄧毅，劉靚，等.甘肅野生甘草內(nèi)生菌發(fā)酵液與宿主水煎液、總黃酮、總皂苷對LPS致raw

2 64.7分泌炎癥因子的影響[J].北方藥學(xué)，2016，13（7）：137.

劉敬.異甘草素對小鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用研究[D].煙臺：煙臺大學(xué)，2018.

陳晶晶，李向進(jìn).甘草苷對H2O2所致SH-EP1細(xì)胞株氧化應(yīng)激損傷中細(xì)胞活力值及細(xì)胞中線粒體凋亡分子、抗氧化分子含量的影響[J].中醫(yī)藥信息，2018，35（3）：36.

AYEKA P A，BIAN Y H，GITHAIGA P M，et al.The immunomodulatory activities of licorice polysaccharides （Glycyrrhiza uralensis Fisch.）in CT 26 tumor-bearing mice[J].BMC Complement Altern Med，2017，17（1）：536.

王悅，賈李佳，韓蓓佳，等.新疆脹果甘草多糖對小鼠免疫功能促進(jìn)作用研究[J].食品研究與開發(fā)，2016，37（7）：41.

國家藥典委員會.中國藥典，四部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015.