段海寶, 茆 雙, 杜 楠, 張 敏, 葛紅星, 魏 敏, 孟學(xué)平, 董志國(guó)

干露脅迫對(duì)青蛤呼吸代謝及抗氧化相關(guān)酶活力的影響

段海寶, 茆 雙, 杜 楠, 張 敏, 葛紅星, 魏 敏, 孟學(xué)平, 董志國(guó)

(江蘇海洋大學(xué) 江蘇省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)建設(shè)實(shí)驗(yàn)室, 江蘇 連云港 222005)

研究了不同時(shí)間和溫度下干露對(duì)青蛤()失水率、存活率、呼吸代謝相關(guān)酶及抗氧化相關(guān)酶的影響。結(jié)果表明, 隨著干露時(shí)間的增加, 青蛤的失水率顯著增加, 且高溫狀態(tài)下青蛤失水加劇; 在3℃和10℃條件下干露48 h未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。在20℃條件下, 干露時(shí)間超過(guò)24 h后, 青蛤出現(xiàn)死亡現(xiàn)象, 死亡率為3.33%, 至48 h死亡率增加至5.33%; 隨著干露時(shí)間的增加, 青蛤的呼吸代謝相關(guān)酶的活性整體呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)(<0.05), 10℃條件下青蛤的呼吸代謝相關(guān)酶的活性整體高于3℃和20℃; 隨著干露時(shí)間的增加, 青蛤的抗氧化相關(guān)酶的活性呈現(xiàn)與青蛤呼吸代謝相關(guān)酶相似的變化趨勢(shì), 且不同溫度條件下, 干露時(shí)間達(dá)到48 h時(shí), 青蛤的抗氧化相關(guān)酶活性顯著低于對(duì)照組(<0.05)。綜上表明青蛤受干露脅迫時(shí)具有一定的自我調(diào)節(jié)能力, 但干露時(shí)間超過(guò)其耐受限度時(shí)會(huì)對(duì)青蛤的生理狀態(tài)造成影響。

青蛤(); 溫度; 干露; 呼吸代謝; 抗氧化

青蛤()隸屬軟體動(dòng)物門(Mollusca)、瓣鰓綱(Lamellibranchia)、簾蛤目(Venerida)、簾蛤科(Veneridae), 俗稱黑蛤, 鐵蛤, 牛眼蛤等。青蛤?qū)儆趶V溫廣鹽性雙殼貝類, 廣泛分布在中國(guó)、日本、韓國(guó)及東南亞各國(guó)的沿海灘涂地區(qū)及河口地區(qū)[1]。青蛤作為海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)高蛋白貝類, 具有肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值高等特點(diǎn)[2-3], 為人們所喜食。目前隨著青蛤人工育苗技術(shù)的不斷成熟, 加之消費(fèi)者對(duì)高質(zhì)量蛋白需求的日益增加, 青蛤等海產(chǎn)貝類市場(chǎng)潛力巨大。

貝類的養(yǎng)殖及運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)時(shí)常經(jīng)歷離水干露的過(guò)程。干露會(huì)造成水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體水失衡, 進(jìn)而抑制其呼吸功能, 最終造成血液pH失調(diào)而窒息死亡[4-6]。近年來(lái), 有關(guān)干露對(duì)貝類生長(zhǎng)及活力影響的研究報(bào)道較多, 主要有干露脅迫對(duì)蝦夷扇貝()[7]、海灣扇貝()[8]、菲律賓蛤仔()[9-10]、魁蚶()[11-12]、文蛤()[13]、太平洋牡蠣()[14-15]、施氏獺蛤()[16]、硬殼蛤()[17]和毛蚶()[18]等生理狀態(tài)和生命活動(dòng)的影響研究, 均表明雙殼類的海洋經(jīng)濟(jì)貝類具有較強(qiáng)的耐干露能力。雙殼貝類的耐干露能力受到諸多因素的影響, 除了個(gè)體差異、種類差異等之外, 也受到外界的溫度、濕度以及干露時(shí)間的影響[7, 14, 19]。而關(guān)于干露脅迫下貝類呼吸代謝和抗氧化生理研究較少。本研究探索不同干露時(shí)間及干露溫度對(duì)青蛤呼吸代謝和抗氧化能力的影響, 初步探索青蛤耐干露能力, 旨在為青蛤活體運(yùn)輸提供科學(xué)依據(jù), 并進(jìn)一步為貝類耐干露新品種的選育提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)所用青蛤由國(guó)家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系連云港綜合試驗(yàn)站提供, 規(guī)格為: 平均殼長(zhǎng)(2.76±0.12) cm, 平均殼高(2.70±0.14) cm, 平均殼寬(1.65±0.10) cm, 平均濕質(zhì)量(6.95±0.95) g。實(shí)驗(yàn)開始前2 d停止投餌, 養(yǎng)殖水溫為(19±1)℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)組通過(guò)恒溫箱設(shè)置三個(gè)溫度分別為3、10和20℃(記為T3、T10、T20), 對(duì)青蛤進(jìn)行干露脅迫, 對(duì)照組為實(shí)驗(yàn)站正常養(yǎng)殖條件下的青蛤。每個(gè)溫度實(shí)驗(yàn)組設(shè)置三個(gè)平行組, 每組均放置50粒青蛤。實(shí)驗(yàn)組分別于干露時(shí)間2、6、12、24、48 h取樣, 每個(gè)青蛤取消化腺0.1 g左右, 浸潤(rùn)PBS洗去樣本表面的體液及雜質(zhì), 然后放入1.5 mL離心管中于超低溫冰箱中保存。在上述時(shí)間點(diǎn)分別記錄各組青蛤死亡粒數(shù)。

1.2.2 樣品處理

冷凍保存的樣品在高溫滅菌過(guò)的研缽中, 用液氮研磨法進(jìn)行研磨, 并根據(jù)實(shí)際的取樣重量, 按質(zhì)量(g)︰體積(mL)=1︰9的比例加入預(yù)冷PBS緩沖液, 4℃下10 000 r/min離心10 min, 取上清液即10%的勻漿上清液, 備用。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、乳酸脫氫酶(LDH)、琥珀酸脫氫酶(SDH)測(cè)定方法參考南京建成科技有限公司試劑盒說(shuō)明書; 參照Bradford的方法用考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)待測(cè)樣本蛋白濃度[20]。

死亡率計(jì)算公式如下:

死亡率=(死亡個(gè)體數(shù)/總個(gè)體數(shù))×100%

干露過(guò)程中, 青蛤機(jī)體水分及體腔液會(huì)有一定損耗, 失水量占初始重量的比值為失水率。失水率計(jì)算公式如下:

式中:為干露時(shí)青蛤的失水量占青蛤初始重量的比;1為干露前青蛤的質(zhì)量;為每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量青蛤的質(zhì)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示, 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。利用單因素方差分析(one-way ANOVA)結(jié)合Duncan多重比較, 以<0.05時(shí)為差異顯著; 利用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。

2 結(jié)果

2.1 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤死亡率的影響

在不同溫度條件下, 干露脅迫對(duì)青蛤的死亡率影響如表1所示。T3和T10組在干露48 h內(nèi)未出現(xiàn)死亡青蛤。T20組干露24 h出現(xiàn)死亡個(gè)體, 死亡率為3.33%, 且死亡率有升高趨勢(shì), 干露48 h死亡率達(dá)到5.33%。對(duì)照組未出現(xiàn)死亡情況。

表1 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤的死亡率/%

2.2 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤失水率的影響

不同溫度條件下, 干露脅迫對(duì)青蛤失水率影響如圖1, 各溫度組均隨著干露時(shí)間的增加失水加劇。T20組失水最為嚴(yán)重, T3組的失水率最低。干露2 h時(shí), T10組和T20組的失水率均顯著大于T3組(<0.05)。干露6、12、24和48 h時(shí), 失水率結(jié)果均為T20組>T10組>T3組(<0.05)。

圖1 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤的失水率

注: 圖中同一干露時(shí)間下不同字母表示數(shù)據(jù)間有顯著性差異(< 0.05), 下同

2.3 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤呼吸代謝酶活的影響

2.3.1 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤LDH活力的影響

不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤LDH活力的影響如圖2所示。隨著干露時(shí)間的增加, T3組、T10組和T20組青蛤LDH活力在總體上呈下降趨勢(shì), T10組LDH活力大于T3組和T20組。對(duì)照組LDH活力變化不明顯。T3和T10組隨著干露時(shí)間的增加, 青蛤LDH活力呈現(xiàn)先下降后短暫上升再下降的趨勢(shì), 且均在干露12 h至24 h出現(xiàn)上升的趨勢(shì)。

圖2 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤的乳酸脫氫酶(LDH)活力變化

干露2 h時(shí), T3組、T10組和T20組LDH活力均低于對(duì)照組(>0.05)。干露2 h至6 h時(shí), T20組青蛤LDH活力下降幅度最大, 且干露6 h LDH活力顯著低于T3組、T10組和對(duì)照組(<0.05)。干露12 h和24 h時(shí), T3組和T20組的LDH活力顯著低于對(duì)照組(<0.05), T10組LDH活力與對(duì)照組無(wú)明顯差異(>0.05)。干露48 h時(shí), 實(shí)驗(yàn)組青蛤LDH活力均顯著低于對(duì)照組(<0.05), 且T3組LDH活力大于T10組和T20組(>0.05)。

2.3.2 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤SDH活力的影響

不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤SDH活力的影響如圖3所示。隨著干露時(shí)間的增加, 各溫度組的青蛤SDH活力在整體上呈下降趨勢(shì), 其中T3組和T10組青蛤SDH活力呈現(xiàn)先下降后上升再下降的趨勢(shì), 且均在干露12~24 h時(shí)SDH活力呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。對(duì)照組青蛤的SDH活力整體變化不大。

圖3 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤琥珀酸脫氫酶(SDH)的活力變化

干露2 h時(shí), 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組青蛤的SDH活力之間無(wú)顯著性差異(>0.05)。干露6 h和12 h時(shí), 實(shí)驗(yàn)組青蛤SDH活力均顯著低于對(duì)照組(<0.05), 且T10組青蛤SDH活力顯著大于T3組和T20組(<0.05)。干露48 h時(shí), 各溫度組的SDH活力都顯著低于對(duì)照組(<0.05), 而各溫度組之間差異不顯著(>0.05)。

2.4 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤抗氧化能力的影響

2.4.1 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤SOD活力的影響

不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤SOD活力的影響如圖4所示。隨著干露時(shí)間的增加, T3組、T10組和T20組SOD活力均呈現(xiàn)先下降后上升再下降的趨勢(shì), 干露48 h內(nèi)整體呈下降趨勢(shì)。

圖4 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤超氧化物歧化酶(SOD)活力的變化

干露2 h時(shí), T3組和T10組SOD活力低于對(duì)照組(>0.05), T20組SOD活力顯著低于對(duì)照組(<0.05)。干露6 h時(shí), T20組SOD活力最高, T3組、T10組和對(duì)照組均顯著低于T20組(<0.05)。干露12 h時(shí), T3組和T20組SOD活力顯著高于T10組和對(duì)照組(<0.05)。干露24 h時(shí), SOD活力顯著表現(xiàn)為: 對(duì)照組>T10組>T3組>T20組(<0.05)。

2.4.2 不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤CAT活力的影響

不同溫度條件下干露脅迫對(duì)青蛤CAT活力的影響如圖5所示。隨著干露時(shí)間的增加, T3組、T10組和T20組CAT活力總體上呈現(xiàn)顯著下降的趨勢(shì)。

圖5 不同溫度和不同干露時(shí)間下青蛤過(guò)氧化氫酶(CAT)活力的變化

干露2 h時(shí), 各溫度組CAT活力差異顯著, T3組>對(duì)照組>T10組>T20組(<0.05)。干露6 h時(shí), T3組和對(duì)照組CAT活力無(wú)顯著性差異(>0.05), T10組和T20組CAT活力均顯著低于對(duì)照組(<0.05)。干露12 h、24 h和48 h時(shí), 各溫度組CAT活力均顯著低于對(duì)照組(<0.05)。

3 討論

3.1 干露脅迫對(duì)青蛤死亡率和失水率的影響

青蛤?qū)儆诔遍g帶埋棲貝類, 經(jīng)常會(huì)面臨各種環(huán)境因子的改變, 干露是其必須面臨的重要環(huán)境變化之一。干露于貝類而言, 本來(lái)就是一種環(huán)境脅迫, 貝類無(wú)法濾食, 而溫度又會(huì)影響水產(chǎn)動(dòng)物的代謝速率[21]。實(shí)驗(yàn)證明, 隨著干露時(shí)間增加失水率逐漸增加, 這一結(jié)果也與劉旭緒研究干露脅迫對(duì)魁蚶幼貝失水率的研究結(jié)果較為相似[11]。相同干露時(shí)間, 溫度越高, 其失水率也越高。干露脅迫下青蛤的死亡率主要表現(xiàn)為: 在干露時(shí)長(zhǎng)48 h內(nèi), 3℃和10℃均未出現(xiàn)死亡情況, 在20℃條件下干露時(shí)長(zhǎng)在24 h及以后出現(xiàn)死亡情況。研究發(fā)現(xiàn), 隨著溫度的升高, 青蛤死亡率也隨之增加, 這與王文文和楊鳳等在菲律賓蛤仔干露實(shí)驗(yàn)所得結(jié)論相似[9-10]。而低溫干露條件, 能夠有效保障青蛤的存活率, 這與于瑞海等[8]在海灣扇貝耐干露研究中所得結(jié)果相一致。另外, 對(duì)西施舌稚貝的研究表明, 隨著干露溫度的升高, 死亡時(shí)間顯著提前[22]。而對(duì)太平洋牡蠣的研究結(jié)果表明, 低溫干露下貝類的成活率顯著高于高溫條件[15]。但是, 也有研究表明施氏獺蛤稚貝對(duì)低溫干露的耐受性較差[16], 這可能由于青蛤?qū)購(gòu)V溫性貝類, 適應(yīng)的溫度范圍廣, 可以適應(yīng)低溫干露條件, 而低溫環(huán)境屬于施氏獺蛤生存海區(qū)溫度變化范圍之外, 導(dǎo)致其死亡率高。

青蛤遭受干露脅迫時(shí), 其雙殼緊閉, 以減少體內(nèi)水分的流失, 從而提高其耐干露能力。在干露期間, 青蛤借助體內(nèi)的水分可維持短時(shí)間機(jī)體的存活, 因此青蛤在遭受干露脅迫時(shí)其死亡率與失水率密切相關(guān)。我們認(rèn)為, 青蛤24 h內(nèi)的運(yùn)輸基本可以常溫進(jìn)行, 更長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸則最好能在低溫條件下運(yùn)輸, 這樣會(huì)降低青蛤的死亡率。

3.2 干露脅迫對(duì)青蛤呼吸代謝的影響

LDH是無(wú)氧呼吸代謝的標(biāo)志酶, 其可催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸, 乳酸分解為機(jī)體提供ATP[23], LDH活力的高低反映了機(jī)體無(wú)氧代謝的水平[10, 24-25], SDH是有氧呼吸的第一個(gè)酶, 有氧呼吸時(shí)其在三羧酸循環(huán)中可以將琥珀酸氧化成延胡索酸[26], SDH活力的高低反映了機(jī)體有氧代謝的水平[27], 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定干露過(guò)程中, 青蛤LDH和SDH活力, 反映青蛤的呼吸代謝水平。48 h內(nèi), 各溫度組LDH和SDH活力總體上呈下降趨勢(shì), 且低于對(duì)照組, 表明干露脅迫抑制了青蛤呼吸代謝酶活力。這與干露脅迫對(duì)日本囊對(duì)蝦和三疣梭子蟹呼吸代謝酶的影響研究有所不同, 段亞飛認(rèn)為, 干露脅迫下脊尾白蝦有氧呼吸被抑制, 依靠無(wú)氧呼吸代謝維持生理活動(dòng), 所以SDH活力下降而LDH活力升高[28]。姜娜認(rèn)為, 無(wú)氧呼吸的增加是三疣梭子蟹適應(yīng)干露脅迫的表現(xiàn)[29], 而本研究在干露12 h和24 h之間, 3℃組和10℃組LDH活力均出現(xiàn)上升趨勢(shì), 這一結(jié)果不僅在一定程度上與上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致, 無(wú)氧呼吸以減少對(duì)體內(nèi)氧氣的消耗也與干露脅迫對(duì)大竹蟶的呼吸代謝的影響研究較為一致[30], 究其原因, 可能是由于無(wú)氧呼吸出現(xiàn)乳酸的堆積, 激發(fā)了LDH活力, 從而將乳酸催化為丙酮酸, 為機(jī)體維持生命提供能量[31]。

不同溫度條件下, 干露24 h, 3℃組與10℃組青蛤LDH與SDH活力均有一定程度的增加, 可能是因?yàn)樵摐囟葪l件下青蛤在24 h內(nèi)失水率較低, 機(jī)體保存了一定量的水分, 可以通過(guò)有氧呼吸和無(wú)氧呼吸共同維持其生命現(xiàn)象。而20℃組, 由于其失水量逐漸增加且失水較為嚴(yán)重, 青蛤LDH和SDH呈持續(xù)下降趨勢(shì), 且顯著低于3℃、10℃和對(duì)照組, 表明20℃組遭受干露脅迫時(shí), 生命活力逐漸下降, 這也可能是20℃組青蛤在24 h就開始出現(xiàn)死亡, 并死亡率逐漸升高的原因。另外, 3℃組和20℃組的LDH和SDH活力整體水平上低于10℃組, 10℃組呼吸代謝酶活力與對(duì)照組較為接近, 表明在10℃干露條件下, 青蛤呼吸代謝酶活力接近正常養(yǎng)殖情況, 青蛤能維持較強(qiáng)的生命活力, 所以, 該溫度條件可作為長(zhǎng)途活體運(yùn)輸參考溫度。

3.3 干露脅迫對(duì)青蛤抗氧化能力的影響

青蛤?qū)儆诘偷葻o(wú)脊椎動(dòng)物, 缺乏免疫球蛋白, 其免疫活動(dòng)基本是靠非特異性免疫來(lái)實(shí)現(xiàn)。SOD和CAT能夠清除和分解體內(nèi)O2–、H2O2等氧化物, 減少活性氧自由基(ROS)對(duì)機(jī)體造成的損傷, 在保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧損傷中起著重要的作用[32-34]。在生物抗氧化系統(tǒng)中, SOD和CAT相互配合, SOD首先將O2–歧化為O2和H2O2, CAT繼而將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O。實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定SOD和CAT活力, 反映不同溫度干露脅迫下, 青蛤抗氧化水平的高低情況。結(jié)果表明, 各實(shí)驗(yàn)組SOD活力的出現(xiàn)波動(dòng)峰值順序?yàn)?0℃組>3℃組>10℃組, 且峰值為20℃組最高, 10℃組最低, 這可能由于10℃組青蛤, 在干露脅迫下機(jī)體受損程度較小, 在同樣的時(shí)間刻需要依靠SOD消除的ROS沒(méi)有另外兩組[29]。還表明20℃組干露脅迫對(duì)青蛤機(jī)體的損傷程度高于3℃組和10℃組, 該結(jié)果也與呼吸代謝酶所得結(jié)果相一致。而各組SOD活力出現(xiàn)峰值之后, 均呈現(xiàn)出下降趨勢(shì), 這可能由于干露過(guò)程中, 機(jī)體能量持續(xù)消耗, 以至于能量不足以持續(xù)調(diào)控自身SOD活力, 以減少ROS對(duì)機(jī)體的損傷。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組CAT活力總體水平為3℃組>10℃組>20℃組, 其中3℃組接近對(duì)照組水平, 20℃組與對(duì)照組差異較大, 表明高溫干露脅迫對(duì)青蛤的損傷大于低溫干露。實(shí)驗(yàn)組CAT活力, 在干露12 h以后, 均隨著時(shí)間的增加而下降。

通過(guò)不同溫度和干露時(shí)間青蛤SOD和CAT活力的變化表明, 干露初期, 青蛤是可以通過(guò)調(diào)節(jié)自身抗氧化能力的強(qiáng)弱來(lái)應(yīng)對(duì)干露脅迫, 并且更接近養(yǎng)殖水溫的20℃組, 表現(xiàn)出SOD活力的快速上升, 這可能是由于, 干露溫度為20℃時(shí), 青蛤機(jī)體還能依靠殼內(nèi)保存的水分維持較高的生命活力和較強(qiáng)的非特異性免疫; 但是, 隨著干露時(shí)間的延長(zhǎng), 三組青蛤抗氧化能力都有顯著下降, 且明顯低于對(duì)照組, 這可能是青蛤殼內(nèi)水分不斷消耗, 只能通過(guò)減少自身的生命活動(dòng), 來(lái)應(yīng)對(duì)干露脅迫。

4 結(jié)論

綜上所述, 干露脅迫不僅會(huì)加劇青蛤失水, 而且會(huì)通過(guò)影響其呼吸代謝和抗氧化相關(guān)酶活性, 導(dǎo)致青蛤死亡。所以, 青蛤長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)選擇在不超過(guò)10℃的環(huán)境溫度下進(jìn)行, 這樣青蛤?qū)?huì)保持較好的呼吸代謝功能, 且干露脅迫所造成的機(jī)體損傷也會(huì)較小。而關(guān)于青蛤?qū)Ω陕兜哪褪軝C(jī)制的探討, 還有待于后續(xù)實(shí)驗(yàn)從轉(zhuǎn)錄組, 代謝組以及基因組方面進(jìn)行深入研究。

[1] 王興強(qiáng), 曹梅, 閻斌倫, 等. 青蛤的生物學(xué)及其繁殖[J].水產(chǎn)科學(xué), 2006, 6: 312-316. Wang Xingqiang, Cao Mei, Yan Binlun, et al. Biology and reproduction of clam[J]. Fisheries Science, 2006, 6: 312-316.

[2] 李曉英, 董志國(guó), 閻斌倫, 等. 青蛤與文蛤的營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(23): 366-370.Li Xiaoying, Dong Zhiguo, Yan Binlun, et al. Analysis and evaluation of nutritional components inand[J]. Food Science, 2010, 31(23): 366-370.

[3] 劉志新, 趙莎莎, 閆海強(qiáng), 等. 青蛤的養(yǎng)殖與藥用價(jià)值研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 42(14): 4365- 4366, 4379. Liu Zhixin, Zhao Shasha, Yan Haiqiang, et al. Advances in researches on breeding and medical value of[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2014, 42(14): 4365-4366, 4379.

[4] 姜令緒, 劉群, 王仁杰, 等. 三疣梭子蟹()幼體不同干露溫度下死亡率的研究[J].海洋與湖沼, 2012, 43(1): 127-131. Jiang Lingxu, Liu Qun, Wang Renjie, et al. Larvae mor-tality ofunder different desiccation temperatures[J]. Oceanologia Et Limnologia Sinica, 2012, 43(1): 127-131.

[5] Madenjian C P, Rogers G L, Fast A W. Predicting night time dissolved oxygen loss in prawn ponds of Hawaii: Part I. Evaluation of traditional methods[J]. Aquacu-l-tural Engineering, 1987, 6(3): 191-208.

[6] Koji O, Irawan B, Kikutani Y. Studies on the salinity and desiccation tolerances ofand(Decapoda: Grapsidae)[J]. Hydrobiologia, 1998, 386(1): 27-36.

[7] 劉忠穎, 劉衛(wèi)東, 李軍, 等. 溫度和規(guī)格對(duì)蝦夷扇貝干露耐受性的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2018, 37(4): 464-468. Liu Zhongying, Liu Weidong, Li Jun, et al. Effects of temperature and size on air exposure tolerance in juvenileJapanese Scallop[J]. Fisheries Science, 2018, 37(4): 464-468.

[8] 于瑞海, 辛榮, 趙強(qiáng), 等. 海灣扇貝不同發(fā)育階段耐干露的研究[J]. 海洋科學(xué), 2007, 6: 6-9.Yu Ruihai, Xin Rong, Zhao Qiang, et al. Survival rate on the different stages ofin the different exposure times[J]. Marine Sciences, 2007, 6: 6-9.

[9] 楊鳳, 譚文明, 閆喜武, 等. 干露及淡水浸泡對(duì)菲律賓蛤仔稚貝生長(zhǎng)和存活的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2012, 31(3): 143-146. Yang Feng, Tan Wenming, Yan Xiwu, et al. Effects of exposure to air, immersion in fresh-water on growth and survival of juvenile Manila Clam[J]. Fisheries Science, 2012, 31(3): 143-146.

[10] 王文文. 干露脅迫對(duì)菲律賓蛤仔免疫指標(biāo)和基因表達(dá)的影響[D]. 大連: 大連海洋大學(xué), 2016.Wang Wenwen. Effects of exposure in air on immune index and gene expression in[D]. Dalian: Dalian Ocean University, 2016.

[11] 劉旭緒, 張秀梅, 覃樂(lè)政, 等. 干露時(shí)長(zhǎng)及溫度對(duì)魁蚶幼貝潛沙行為及呼吸代謝的影響[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2017, 47(3): 19-26. Liu Xuxu, Zhang Xiumin, Qin Lezheng, et al. Effects of air exposure duration and temperature on burrowing behavior and respiratory metabolism of juvenile[J]. Periodical of Ocean University of China, 2017, 47(3): 19-26.

[12] An M I, Choi C Y. Activity of antioxidant enzymes and physiological responses in ark shell,, exposed to thermal and osmotic stress: Effects on hemolymph and biochemical parameters[J]. Com-parative Biochemistry & Physiology Part B Bioche-mi-stry & Molecular Biology, 2010, 155(1): 1-42.

[13] 魏偉, 唐保軍, 孫鵬, 等. 干露脅迫對(duì)文蛤?yàn)V水率及呼吸排泄的影響[J]. 廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 37(6): 37-42. Wei Wei, Tang Baojun, Sun Peng, et al. Effects of air exposure on filtration, respiration and excretion rates of[J]. Journal of Guangdong Ocean University, 2017, 37(6): 37-42.

[14] 于瑞海, 王昭萍, 孔令鋒, 等. 不同發(fā)育期的太平洋牡蠣在不同干露狀態(tài)下的成活率研究[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2006, 4: 617-620. Yu Ruihai, Wang Zhaoping, Kong Lingfei, et al. A study on the survival rate of Pacific oysters in different exposure states at different development stages[J]. Periodical of Ocean University of China, 2006, 4: 617- 620.

[15] Starkie R L, Hargreaves M, Rolland J, et al. Heat stress, cytokines, and the immune response to exercise[J]. Brain Behavior & Immunity, 2005, 19(5): 404-412.

[16] 劉超, 郭景蘭, 彭張明, 等. 施氏獺蛤稚貝對(duì)高溫和干露的耐受性研究[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2015, 34(3): 169- 173. Liu Chao, Guo Jinglan, Peng Zhangming, et al. Tolerance of juvenile shellfishto high- tem-perature and dry exposure[J]. Fisheries Science, 2015, 34(3): 169-173.

[17] 李忠泓, 王國(guó)棟. 硬殼蛤稚貝對(duì)淡水浸泡、干露和低溫的耐受能力[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2004, 23(6): 14-16. Li Zhonghong, Wang Guodong. Tolerance ofjuveniles to exposure to freshwater bath, drying and low temperature[J]. Fisheries Science, 2004, 23(6): 14-16.

[18] 王玉清, 孫同秋, 王沖, 等. 干露及溫度變化對(duì)毛蚶苗種成活率的影響[J]. 河北漁業(yè), 2016, 2: 1-3. Wang Yuqing, Sun Tongqiu, Wang Chong, et al. Effects of desiccation and temperature on survival of juvenile[J]. Hebei Fisheries, 2016, 2: 1-3.

[19] 邱清波, 李由明, 吳麗云, 等. 干露對(duì)綴錦蛤、文蛤、美女蛤和織錦巴非蛤耗氧率的影響[J]. 海南熱帶海洋學(xué)院學(xué)報(bào), 2018, 25(2): 20-24. Qiu Qingbo, Li Youming, WuLiyun, et al. Effect of exposure on the oxygen consumption rates ofs,,and[J]. Journal of Qiongzhou University, 2018, 25(2): 20-24.

[20] Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J]. Analytical Biochemistry, 1976, 72(s1–2): 248-254.

[21] Blaxter J H S, Hempel G. The influence of egg size on Herring Larvae (L.)[J]. ICES Journal of Marine Science, 1963, 28(2): 211-240.

[22] Donaghy L, Lambert C, Choi K S, et al. Hemocytes of the carpet shell clam () and the Manila clam (): Current know-le-dge and future prospects[J]. Aquaculture, 2009, 297(1-4): 10-24.

[23] Kaja S, Payne A J, Singh, et al. An optimized lactate dehydrogenase release assay for screening of drug candidates in neuroscience[J]. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 2015, (73): 1-6.

[24] Viru M. Differences in effects of various training regi-mens on metabolism of skeletal muscles.[J]. Journal of Sports Medicine & Physical Fitness, 1994, 34(3): 217.

[25] 蔡彬, 江幸福, 羅禮智, 等. 溫、濕度對(duì)粘蟲蛾飛行能源物質(zhì)利用的影響[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào), 2002(7): 1068- 1074. Cai Bin, Jiang Xingfu, Luo Lizhi, et al. Influences of temperature and humidity on utilization of energy substances during flight in the moths of Oriental Armyworwm,(Walker)[J]. Acta Ecologica Sinica, 2002(7): 1068-1074.

[26] 王馨, 王芳, 路允良, 等. 光照強(qiáng)度對(duì)三疣梭子蟹呼吸代謝的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2014, 38(2): 237-243. Wang Xin, Wang Fang, Lu Yunliang, et al. Effects of light intensity on the respiratory metabolism of swimming crab ()[J]. Journal of Fisheries of China, 2014, 38(2): 237-243.

[27] Tilgner H, Lesicki A. Kinetic changes of lactate dehy-drogenase in hepatopancreas and abdominal muscle of the crayfishraf. (crustacea: deca-poda) after eyestalk removal[J]. Comparative Biochemi-stry & Physiology Part B Comparative Biochemistry, 1976, 54(1): 111-115.

[28] 段亞飛, 董宏標(biāo), 王蕓, 等. 干露脅迫對(duì)日本囊對(duì)蝦呼吸代謝酶活性和RNA/DNA比值的影響[J]. 海洋漁業(yè), 2016, 38(1): 42-50. Duan Yafei, Dong Hongbiao, Wang Yun, et al. Respiratory metabolic enzyme activities and RNA/DNA ratio ofafter desiccation[J]. Marine Fisheries, 2016, 38(1): 42-50.

[29] 姜娜, 王芳, 路允良, 等. 干露對(duì)三疣梭子蟹抗氧化和應(yīng)激能力的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2014, 38(12): 1996- 2004. Jiang Na, Wang Fang, Lu Yunliang, et al. Effects of air-exposure stress on antioxidant capacity and stress response of swimming crab ()[J]. Journal of Fisheries of China, 2014, 38(12): 1996-2004.

[30] 李東東, 聶鴻濤, 劉國(guó)龍, 等. 鹽度和干露對(duì)大竹蟶呼吸代謝相關(guān)酶的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2019, 38(1): 55-60. Li Dongdong, Nie Hongtao, Liu Guolong, et al. Effects of salinity and air exposure on activities of respiratory metabolism-related enzymes in grand jackknife clam[J]. Fisheries Science, 2019, 38(1): 55-60.

[31] 連春盎. 干露脅迫對(duì)脊尾白蝦呼吸代謝相關(guān)酶和低氧誘導(dǎo)因子的影響[D]. 上海: 上海海洋大學(xué), 2016. Lian Chunang. Effects of dry exposure on the respiratory metabolism-related enzymes and HIF-1 of[D]. Shanghai Ocean University, 2016.

[32] 李允, 齊曼·尤努斯, 努爾麥麥提·艾麥提, 等. 鉀處理對(duì)杜梨幼苗膜脂過(guò)氧化及其保護(hù)酶類的影響[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué), 2018, 24(6): 1-4. LI Yun, Qiman Y, Nurmamati A, et al. Effect of potassium peroxide and protective enzymes of membrane lipid of[J]. Tianjin Agricultural Sciences, 2018, 24(6): 1-4.

[33] 王小莉, 張雪娟, 張欣, 等. 不同菌種對(duì)中華稻蝗抗氧化酶活性的影響[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2019, 47(4): 665-667. Wang Xiaoli, Zhang Xuejuan, Zhang Xin, et al. Effects of different strains on the activities of antioxidant enzymes in[J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences, 2019, 47(4): 665-667.

[34] 高煥, 閻斌倫, 陳百堯, 等. 干露溫度對(duì)三疣梭子蟹非特異免疫指標(biāo)的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2013, 32(5): 280-283. Gao Huan, Yan Binlun, Chen Baiyao, et al. The effects of desiccation temperature on non-specific immune indices in swimming crab[J]. Fisheries Science, 2013, 32(5): 280-283.

Effects desiccation on respiratory metabolism and antio-xi-dant enzyme activities of clam

DUAN Hai-bao, MAO Shuang, DU Nan, ZHANG Min, GE Hong-xing, WEI Min, MENG Xue-ping, DONG Zhi-guo

(Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology, Jiangsu Ocean University, Lianyungang 222005, China)

The effect of air-exposure on water loss rate, survival rate and the enzyme activity of the respiratory metabolism-related enzyme and antioxidant-related enzymes ofwas studied. The result showed that the water loss rate ofincreased significantly with the increase of air-exposure time, and the water loss of clams increased under high temperature. There was no death at 3℃ and 10℃ during 48 hours, however, after more than 24 hours,began to die at 20℃, and the mortality rate was 3.33% and 5.33% at 24 hours and 48 hours respectively. The activities of the respiratory metabolism-related enzyme decreased significantly (<0.05) with the increase of air-exposure time, and the activities of the respiratory metabolism-related enzyme at 10℃ was higher than that of clams at 3℃ and 20℃. The activities of antioxidant-related enzymes decreased significantly (<0.05) with the increase of air-exposure time, and the activities of antioxidant-related enzymes were significantly lower than those in the control group (<0.05) in 48 h at different temperatures. In conclusion, thehas self-regulation ability under the stress of air-exposure, however, the physiological state ofwill be affected when the air-exposure time exceeds its tolerance limit.

; temperature; desiccation; respiratory metabolism; antioxidation

Jul. 30, 2019

S968.31

A

1000-3096(2020)03-0042-08

10.11759/hykx20190730001

2019-07-30;

2019-08-27

國(guó)家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-49); 江蘇省高等學(xué)校自然科學(xué)研究重大項(xiàng)目(18KJA240001); 江蘇省漁業(yè)科技類項(xiàng)目(Y2018-27); 江蘇省研究生科研與實(shí)踐創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No. SJCX18_0933, No.SJCX190979)

[Modern Agro-industry Technology Research System, No. CARS-49, the Natural Science Foundation of the Jiangsu Higher Education Institutions of China, No. 18KJA240001; Jiangsu Fisheries Science and Technology Project, Y2018-27; the Postgraduate Research & Practice Innovation Program of Jiangsu Province, No.SJCX190979, No. SJCX180933]

段海寶(1994-), 男, 河北張家口人, 碩士研究生, 研究方向?yàn)樗a(chǎn)養(yǎng)殖, E-mail: duanhaibao@126.com; 董志國(guó),通信作者, 教授, 研究方向: 水產(chǎn)資源與養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)等, E-mail: dzg7712@163.com

(本文編輯: 康亦兼)