王向輝

長春市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春 130000

近年來，分子生物學(xué)檢測技術(shù)迅猛發(fā)展，已經(jīng)滲透到了醫(yī)學(xué)檢驗的各個角落[1]，其中熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用較為廣闊，動物疫病檢測領(lǐng)域也借助其快速、靈敏和特異的優(yōu)勢，大大地提高了動物疫病檢測的準(zhǔn)確率，為常見動物疫病的診斷提供了強有力的技術(shù)支持和保證。核酸提取作為熒光定量PCR檢測前期的一項普通操作，起著不可忽視的作用。本文將對比核酸提取儀和手動核酸提取法的優(yōu)劣勢，為動物疫病檢測提供借鑒和參考。

1 核酸提取儀

核酸提取儀，是通過預(yù)設(shè)的電腦程序來自動化完成核酸提取任務(wù)的儀器。核酸提取儀分兩類：一類是較大型的，自動化程度較高，稱為自動液體工作站；另一類是體積較小的自動核酸提取儀，可以配合商品化試劑自動完成核酸提取過程。

大型自動液體工作站設(shè)備和耗材價格昂貴，維護成本高，能夠一次提取大量檢測樣品，但是真正應(yīng)用較少；而小型自動核酸提取儀具有運行成本低、體積小和操作簡單等特點，受到很多實驗室的歡迎，得到了廣泛的應(yīng)用。無論大型還是小型核酸提取儀，只需前期簡單操作并按照預(yù)設(shè)的電腦程序下達指令，減少了操作者的提取過程，縮小了人工操作引起的誤差，具有客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化特點。但對于檢測數(shù)量極少的樣品，顯然成本稍高，并且每個樣品的核酸含量不同，電腦程序?qū)λ写龣z樣品的純化體積均已固定，不能適時機動地調(diào)節(jié)純化體積。

2 手動核酸提取法

手動核酸提取法同樣借助于商品化的試劑盒，操作者利用實驗室常規(guī)儀器并參照說明書操作步驟便可進行核酸提取。

如果待檢樣品數(shù)量較少，從提取成本上考慮，手動核酸提取法表現(xiàn)出低成本的優(yōu)勢，并且對于一般的實驗室設(shè)備要求不高。針對不同含量的樣品，可以機動性的調(diào)節(jié)純化體積[2]。但是手動核酸提取法操作過程中對于操作者的經(jīng)驗有一定要求，因為每個人的操作習(xí)慣與熟練程度不同，不確定性較大，直接決定了提取到的核酸濃度和提取核酸需要的時間，進而可能影響到后續(xù)檢測樣品的準(zhǔn)確率與時效，以常見手動核酸提取法為例，操作過程中不可避免需要經(jīng)歷液體的棄去、離心管的反復(fù)開蓋、移液器的公用等幾個循環(huán)過程，因此極易產(chǎn)生交叉污染。

3 小結(jié)

提取到高質(zhì)量的核酸是確保準(zhǔn)確檢測的重要前提，目前大多數(shù)動物疫病檢測實驗室使用的核酸樣品是由手動核酸提取法獲得的，受成本因素影響，通過核酸提取儀進行核酸提取的實驗室占少數(shù)，由于核酸提取過程中不同樣品核酸含量有差異，導(dǎo)致提取到的核酸濃度也不同，要保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確，做到不漏檢，提取的樣品核酸含量必須達標(biāo)，所以提取前要對樣品的信息進行詳細了解，可以針對不同的樣品靈活選擇不同的提取方式。無論采用核酸提取儀還是手動核酸提取法，操作人員的因素對于檢驗結(jié)果都有一定影響，因此平時對于實驗室技術(shù)人員要加強理論和實際操作培訓(xùn)，增強實驗室核酸污染的認(rèn)識，嚴(yán)格規(guī)范試驗操作，逐步提高使用的熟練程度。生產(chǎn)核酸提取儀的廠家都能生產(chǎn)與機器配套使用的試劑盒，不同品牌的試劑盒提取步驟大致相同，提取時間和提取效率相差不大。而市場上生產(chǎn)手動核酸提取試劑盒的廠家眾多，手動核酸提取法使用的每一種試劑盒的提取步驟和提取效率也千差萬別，所以手動核酸提取法在提取核酸時也盡量選取操作步驟簡便、提取效率高的商品化試劑盒。綜上，全自動核酸提取儀與手動核酸提取法均有各自的優(yōu)劣勢，沒有一種提取方法能夠適合任何實驗室，實驗室更應(yīng)該本著自己的實際情況進行綜合考慮，以最優(yōu)的核酸提取方式，獲得符合檢測要求的核酸，更好的適用于動物疫病檢測。