禽蛋產(chǎn)品沙門氏菌生化型和血清型分析

馬麗萍，張素艷，蔣 健

(余姚市朗霞街道辦事處， 浙江 余姚 315480)

沙門氏菌是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病病原菌之一，目前全世界已發(fā)現(xiàn)約2500種血清型。在世界各地的細(xì)菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的中毒事件和病例數(shù)列為榜首。沙門氏菌源于家畜、家禽及糞便之中，常污染的食品為豬肉、雞肉、牛肉、鴨肉、香腸、火腿及熏肉制品和雞蛋等。其眾多的血清型中鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌等是常見的污染菌，它們是引起人類沙門氏菌食物中毒的主要致病菌，已對食品安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。傳統(tǒng)的生化和血清分型方法目前仍然是流行病學(xué)調(diào)查中對食源性疾病病原菌鑒定分析的基礎(chǔ)手段。為了解人們生活必需的畜禽產(chǎn)品中沙門氏菌的污染狀況，于2015-2016年系統(tǒng)地開展了某地零售禽蛋產(chǎn)品中沙門氏菌監(jiān)測，監(jiān)測了4大類(鵪鶉蛋，鴨蛋，雞蛋，鵝蛋)，并對沙門氏菌分離株進(jìn)行血清型和生化型分析研究，以揭示沙門氏菌分布狀況，流行病學(xué)特征以及菌株之間的同源性，為食源性疾病爆發(fā)的預(yù)防和控制提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1樣品 于2015年7月至2016年6月分別從某市各大超市、批發(fā)市場購買食品樣品209份(鵪鶉蛋58份，鴨蛋32份，雞蛋101份，鵝蛋18份)，置于2～8 ℃采樣箱中盡快送實(shí)驗室檢驗。

1.2培養(yǎng)基和試劑 沙門氏菌檢驗所需培養(yǎng)基(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)，沙門氏菌診斷血清(寧波天潤生物藥業(yè)有限公司)，API 20E生化鑒定試劑條及其配套試劑(法國梅里埃公司)。

1.3檢驗方法

1.3.1分離培養(yǎng)和生化鑒定 食品中沙門氏菌檢驗依據(jù)GB4789.4-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗》方法進(jìn)行，疑似菌落經(jīng)三糖鐵生化實(shí)驗和A-F O多價血清凝集實(shí)驗初篩，符合者進(jìn)行API 20E生化試劑條鑒定。

1.3.2血清診斷 對分離的沙門氏菌用玻片凝集法進(jìn)行血清分型。首先檢查沙門氏菌O抗原，與A-F群多價血清凝集的分別用O2、O4、O7、O8、O9、O10、O11因子血清分群，與A-F群多價血清不凝集者，則用OMA-OMG沙門氏菌多價血清凝集，再進(jìn)行分群，最后以H血清鑒定其鞭毛抗原，參照沙門氏菌屬診斷抗原表，并根據(jù)生化反應(yīng)特征，做出菌型診斷。

2 結(jié)果

2.1畜禽產(chǎn)品中沙門氏菌污染情況 209份樣本中，共檢出沙門氏菌陽性42份，總檢出率為20.10%。不同禽蛋產(chǎn)品中沙門氏菌的污染情況詳見表1，不同采樣地點(diǎn)沙門氏菌陽性檢出情況見表2。

雞蛋的蛋殼上殘留的污漬中，攜帶部分沙門氏菌，相鄰的雞蛋基本都有一定影響。本次實(shí)驗中，所有禽蛋類陽性樣品，未測出沙門氏菌腸毒素。

表2 不同采樣地點(diǎn)沙門氏菌陽性檢出情況

2.2畜禽產(chǎn)品中沙門氏菌分離株血清分型結(jié)果 42個陽性樣品中檢出的46株沙門氏菌，分為15個血清型。

2.3畜禽產(chǎn)品中沙門氏菌API 20E鑒定生化譜與血清型對應(yīng)關(guān)系 46株菌株經(jīng)API 20E鑒定，根據(jù)生化反應(yīng)的不同，分為7種不同生化譜的沙門氏菌API生化型，主要的2種為API Ⅰ型(6704752)和API Ⅱ型(6704552)，分別占檢出菌株的52.17%和34.78%，這兩種主要API生化型的區(qū)別僅在于肌醇(INO)的陰陽性不同。由此可以看出沙門氏菌的生化特性比較穩(wěn)定，以肌醇陰陽性不同為特征，可以將7種不同的沙門氏菌生化譜歸為兩大類。肌醇為陽性的包括5種：最主要的是API I型(6704752)，以及API Ⅲ型(6604752)鳥氨酸脫羧酶(ODC)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅳ型(6704742)鼠李糖(RHA)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅴ型(6704712)蜜二糖(MEL)陰性的沙門氏菌菌株，API Ⅵ型(6704352)山梨醇(SOR)陰性的沙門氏菌菌株。肌醇為陰性的包括2種：最主要的API Ⅱ型(6704552)和API Ⅶ型(2704552)賴氨酸脫羧酶(LDC)陰性的沙門氏菌菌株。

3 討論

食物傳播是人類感染沙門氏菌的主要途徑，肉類(尤其是畜禽肉)等很多食品都與沙門氏菌疾病有關(guān)。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，禽蛋產(chǎn)品受到沙門氏菌污染的情況比較嚴(yán)重，209份食品中，沙門氏菌陽性樣品數(shù)為42份，其中制作蛋糕的雞蛋中檢出20份，總檢出率為9.57%。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，農(nóng)村市場零售禽蛋被沙門氏菌污染現(xiàn)象較大型超市和城市集貿(mào)市場普遍。這與目前禽蛋銷售逐漸走向集團(tuán)化，超市、城市集貿(mào)市場和農(nóng)貿(mào)市場的產(chǎn)品來自相同上級批發(fā)商，產(chǎn)品質(zhì)量上基本無多大差異，只是超市和集貿(mào)市場均是集團(tuán)管理，對銷售和貯藏的衛(wèi)生條件較好，因而減少了致病菌的交叉污染。因此，加強(qiáng)禽蛋生產(chǎn)集團(tuán)的運(yùn)輸和銷售管理，是降低和控制食源性致病菌污染的關(guān)鍵。

在我國，引起食物中毒最常見的血清型主要是鼠傷寒沙門氏菌、德爾卑沙門氏菌和腸炎沙門氏菌等。本研究表明，某地禽蛋污染沙門氏菌血清型以德爾卑(21.74%)、鼠傷寒(10.87%)、腸炎(8.7%)、茨昂威(8.7%)、印第安納(8.7%)、韋太夫雷登(8.7%)為主。

本研究應(yīng)用API 20E生化試劑條對分離菌株進(jìn)行了鑒定，鑒定出7種不同生化譜的沙門氏菌API生化型。研究發(fā)現(xiàn)，不同血清型沙門氏菌菌株的生化反應(yīng)具有相似性，差別不大，其主要的變化在于肌醇(INO)、鳥氨酸脫羧酶(ODC)、鼠李糖(RHA)、蜜二糖(MEL)、山梨醇(SOR)、拉氨酸脫羧酶(LDC)的反應(yīng)，這與其他學(xué)者的研究結(jié)果也一致。對沙門氏菌分離菌株進(jìn)行生化型和血清型研究分析，是沙門氏菌監(jiān)測的首要任務(wù)，是流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)，對當(dāng)?shù)厍莸吧抽T氏菌監(jiān)測和防治工作具有重要的理論和實(shí)踐意義。