侯思哲 王雪峰

摘要：目的 ?分析喉鱗狀細胞癌組織中E3泛素連接酶CBLL1的表達及其臨床意義。方法 ?選取2017年9月～2019年7月我院60例喉鱗狀細胞癌石蠟組織切片及對應30例癌旁石蠟組織切片，采用免疫熒光法檢測喉癌組織及癌旁組織中CBLL1蛋白的表達，比較喉癌組織和癌旁組織、不同性別、年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度及腫瘤分型患者中CBLL1蛋白的表達;另選取10例冰凍喉癌組織及對應癌旁組織，應用實時定量PCR方法檢測CBLL1蛋白中mRNA的表達。結(jié)果 ?喉癌組織中CBLL1的表達高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;不同年齡、性別、腫瘤分型及組織分化程度的患者喉癌組織中CBLL1蛋白表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者喉癌組織中CBLL1蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;喉癌組織中CBLL1蛋白mRNA的相對表達量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論 ?喉癌組織中CBLL1蛋白表達異常與喉鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展、侵潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其可能作為喉癌未來治療的新靶點。

關(guān)鍵詞：E3泛素連接酶CBLL1;喉鱗狀細胞癌;免疫熒光;RT-PCR

中圖分類號：R739.65 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.05.002

文章編號：1006-1959（2020）05-0005-04

Abstract：Objective ?To analyze the expression of E3 ubiquitin ligase CBLL1 in laryngeal squamous cell carcinoma and its clinical significance. Methods ?From September 2017 to July 2019， 60 paraffin sections of laryngeal squamous cell carcinoma in our hospital and 30 paraffin sections adjacent to cancer were selected to detect the expression of CBLL1 protein in laryngeal cancer tissue and adjacent tissues by immunofluorescence. Compare the expression of CBLL1 protein in laryngeal cancer tissues and adjacent tissues， different genders， ages， clinical stages， lymph node metastasis， tissue differentiation， and tumor typing; another 10 frozen throat tissues and corresponding adjacent tissues were selected and applied in real time quantitative PCR was used to detect mRNA expression in CBLL1 protein.Results ?The expression of CBLL1 in laryngeal cancer tissues was higher than that in adjacent tissues，the difference was statistically significant （P<0.05）. Comparison of CBLL1 protein expression in laryngeal cancer tissues of patients with different age， gender， tumor classification and degree of tissue differentiation， there was no significant difference （P>0.05）; The expression of CBLL1 protein in laryngeal cancer tissues of patients with different clinical stages and lymph node metastasis was statistically significant （P<0.05）; the relative expression of CBLL1 protein mRNA in laryngeal cancer tissues was higher than that in adjacent tissues，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion ?The abnormal expression of CBLL1 protein in laryngeal cancer tissues is closely related to the occurrence， development， invasion and metastasis of laryngeal squamous cell carcinoma， which may be a new target for the future treatment of laryngeal cancer.

2.3喉癌組織及癌旁組織中CBLL1 mRNA的相對表達量比較 ?10例喉癌組織及對應癌旁正常組織實時熒光PCR分析顯示，癌旁組織中CBLL1的mRNA相對表達量為（1.0000±0.0000），低于喉癌組織中的（1.7335±0.2899），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見圖2。

3討論

泛素化作為一種重要的蛋白翻譯后修飾，參與了包括細胞周期調(diào)控、細胞凋亡、DNA修復、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、自噬作用等多個重要胞內(nèi)反應，對于細胞更新胞內(nèi)蛋白、清除衰老蛋白、維持胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要意義[4]。泛素連接酶E3能夠特異性識別底物，是泛素- 蛋白酶體系中最重要的組成部分，約600多個不同的泛素連接酶在人體中調(diào)節(jié)多種靶蛋白[5]。CBLL1是E3泛素連接酶一種，被確定為第一個E-鈣粘蛋白穩(wěn)定性的翻譯后調(diào)節(jié)子[6]。既往研究表明，CBLL1在多種腫瘤中起作用，如CBLL1在結(jié)腸癌組織中高表達，并參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展;在胃癌組織中表達上調(diào)，CBLL1過表達促進MDCK細胞生長[7];在非小細胞肺癌中CBLL1呈高表達，并促進細胞增殖和侵襲[8]。本研究以CBLL1為研究對象，觀察其在喉鱗狀細胞癌組織中的表達情況。

E-鈣粘蛋白是經(jīng)典的鈣粘蛋白，主要介導同種細胞間的黏附反應，是維持上皮細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性和極性的重要蛋白。研究表明E-鈣粘蛋白的缺失與喉癌預后不良相關(guān)[9]，E3泛素連接酶CBLL1與E-鈣粘蛋白結(jié)合，再將酪氨酸激酶v-src酪氨酸磷酸化的E-cadherin進一步泛素化，將其降解，從而調(diào)節(jié)癌細胞的侵襲及轉(zhuǎn)移。由于CBLL1介導E-cadherin復合體的泛素化和內(nèi)吞作用，CBLL1在上皮細胞中的表達增強E-cadherin的內(nèi)吞作用，從而調(diào)節(jié)細胞與細胞粘附作用[10]。Figueroa A等[7]研究表明，CBLL1以E-鈣粘蛋白下調(diào)獨立的方式調(diào)節(jié)細胞增殖。Gong EY等[11]研究表明，CBLL1可以作為乳腺癌細胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，提示其在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。這些發(fā)現(xiàn)均表明CBLL1在E-鈣粘著蛋白依賴性和非依賴性腫瘤發(fā)生中的作用。本研究結(jié)果顯示，CBLL1在喉鱗狀細胞癌中表達高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。說明CBLL1可能參與了喉癌的發(fā)生，另外CBLL1在Ⅲ～Ⅳ期喉癌組織中表達高于Ⅰ～Ⅱ期，說明隨著腫瘤的發(fā)展，CBLL1的表達逐漸增高，提示CBLL1可能參與了喉癌的發(fā)展。

腫瘤細胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移至少有黏附、降解、移動三個步驟，因此細胞間黏附作用的減弱是腫瘤細胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的條件。E-鈣粘蛋白的表達下降使得細胞間黏附作用下降，腫瘤細胞更容易脫離原組織而發(fā)生轉(zhuǎn)移，表明喉癌的侵襲和轉(zhuǎn)移與E-鈣粘蛋白相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者喉癌組織中CBLL1表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。表明CBLL1可能參與了喉癌的浸潤與轉(zhuǎn)移，CBLL1在喉癌中的表達上調(diào)，可能與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。在喉癌中也可能存在CBLL1通過一系列泛素化下調(diào)E-鈣粘蛋白的表達，從而促進了喉癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，但其機制需進一步研究。病理學分級是喉癌的惡性程度的指標，分化程度越低，喉癌的惡性程度越高，但本研究結(jié)果顯示，CBLL1在不同分化程度的喉癌組織中表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），其具體機制有待進一步研究。

目前，CBLL1在癌癥和其他疾病中的重要性正逐步被認識，CBLL1在不同的生理或病理條件可以有不同的功能，因此不同的信號通路對CBLL1的影響以及研究其作為癌癥治療靶點的臨床潛在有用性同樣重要。目前，以泛素化為靶點的腫瘤治療已初有成效。比起傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物，泛素化組分抑制劑在識別底物上具有特異性，可有效減少非特異性副作用的產(chǎn)生，也可有效減少癌細胞對傳統(tǒng)抗腫瘤藥物的耐藥性[12]。本研究證實了CBLL1的表達與喉鱗狀細胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，期待后續(xù)相關(guān)研究能為該病的治療提供參考依據(jù)。

綜上所述， CBLL1在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，隨著喉鱗狀細胞癌的進展，其表達隨之增高，因此CBLL1可能作為喉癌治療的新靶點。

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收稿日期：2020-01-01;修回日期：2020-01-10

編輯/成森