文│郭明佳 王智波(山東省龍口市畜牧獸醫(yī)站)
我國(guó)是養(yǎng)兔大國(guó),兔養(yǎng)殖量居全球首位。但由于養(yǎng)殖技術(shù)水平較低,且大多數(shù)為農(nóng)戶散養(yǎng),養(yǎng)殖密度高,衛(wèi)生環(huán)境差,各種疫病時(shí)常暴發(fā),對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。兔出血性敗血癥作為一種常見(jiàn)的兔病毒性傳染病,雖然已經(jīng)有了成熟的商品化疫苗,但該病在我國(guó)的主要兔養(yǎng)殖地區(qū)仍然呈現(xiàn)出地方流行性。
1.流行病學(xué)。兔出血性敗血癥是由兔巴氏桿菌所引起的一種多型性、散發(fā)性的地方性傳染病,該病可以引起9周齡到6月齡的不同年齡段的兔死亡,感染對(duì)象沒(méi)有年齡特異性。其病原巴氏桿菌是一種條件性致病菌,可以長(zhǎng)期潛伏于健康動(dòng)物體內(nèi),當(dāng)動(dòng)物免疫力下降時(shí)可引起動(dòng)物發(fā)病并死亡。巴氏桿菌可以感染包括牛、雞、兔和豬在內(nèi)的多種畜禽,并且呈散發(fā)性的分布在全球100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)。該病可以通過(guò)發(fā)病兔的消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)傳播到健康動(dòng)物,發(fā)病兔及其排泄物是其最主要的傳染源,吸血節(jié)肢動(dòng)物也可充當(dāng)有效的傳播媒介,且該病無(wú)季節(jié)特異性,全年皆可發(fā)病,但氣候驟然變化是該病主要誘因,因此該病主要發(fā)生于冷熱變化交替劇烈的潮濕多雨季節(jié)。
2.臨床癥狀。由于不同個(gè)體、衛(wèi)生環(huán)境及病原致病性的不同,該病潛伏期長(zhǎng)短不定,較為常見(jiàn)的是數(shù)小時(shí)到5天不等。根據(jù)發(fā)病部位的不同,該病可以分為鼻炎型、流行性肺炎型、敗血癥型、子宮積膿型、睪丸炎型、中耳炎型及結(jié)膜炎型等多種不同類型,其中鼻炎型最為常見(jiàn),主要表現(xiàn)為病兔外鼻孔被毛潮濕并纏結(jié)、打噴嚏、咳嗽,流出漿液性分泌物,呼吸困難?;急茄仔屯貌“Y延長(zhǎng)可以轉(zhuǎn)換為肺炎性,肺炎性兔常表現(xiàn)為食欲廢絕、精神不振、體溫增高,偶爾會(huì)表現(xiàn)出腹瀉和關(guān)節(jié)腫大。出血性敗血癥型兔病程較短,死亡較早因此無(wú)明顯臨床癥狀。中耳炎型病兔常表現(xiàn)出斜頸現(xiàn)象。結(jié)膜炎型病兔常見(jiàn)流淚,結(jié)膜充血、紅腫,眼內(nèi)有分泌物。生殖系統(tǒng)型病兔一般表現(xiàn)為子宮肌炎、子宮積膿、陰道炎和睪丸炎等。
3.病理學(xué)特征。病程較短的患病兔剖檢僅能觀察到輕微的病理學(xué)特征,但病程較長(zhǎng)的患病兔病理變化以敗血性為主。鼻炎型病毒的鼻腔和副鼻竇內(nèi)分泌有大量的膿性、黏性分泌物,鼻黏膜紅腫糜爛,發(fā)病嚴(yán)重病兔會(huì)出現(xiàn)鼻漏現(xiàn)象。肺炎型病兔肺臟水腫、出血充血、硬化甚至萎縮并形成結(jié)節(jié),胸腔中含有大量黃色膿性分泌物。敗血癥型病兔表現(xiàn)全身性的病理變化,包括黏膜腫脹出血,心臟內(nèi)外膜有大量的出血點(diǎn),肝臟腫大變脆并有許多白色壞死灶,脾臟和淋巴結(jié)等免疫器官腫大出血。中耳炎型病兔鼓膜和鼓室內(nèi)壁變紅,有時(shí)鼓室破裂,膿性滲出物流入外耳道,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)化膿性腦膜炎病變。對(duì)膿腫型病兔的剖解結(jié)果發(fā)現(xiàn)膿腫現(xiàn)象可能發(fā)生在全身各處。有子宮炎的母兔陰道有膿性分泌物,公兔的睪丸炎表現(xiàn)為一側(cè)或兩側(cè)睪丸出現(xiàn)腫大現(xiàn)象。
1.病原分離培養(yǎng)。對(duì)未發(fā)病的但有潛在患病風(fēng)險(xiǎn)的兔群可以采集鼻腔及分泌物,而發(fā)病兔可以采集心、肝、脾等實(shí)質(zhì)臟器,將采集的樣品處理后接種于麥康凱和腦心浸出液(BHI)培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)24小時(shí),麥康凱培養(yǎng)基可抑制其他細(xì)菌生長(zhǎng),BHI培養(yǎng)基上可觀察灰白色的露珠樣單個(gè)菌落,對(duì)單個(gè)菌落進(jìn)行純化后進(jìn)行染色鏡檢和生化鑒定。
2.血清學(xué)檢測(cè)。臨床上可以采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、間接血凝實(shí)驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等多種血清學(xué)方法對(duì)該病進(jìn)行檢測(cè)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雖操作簡(jiǎn)單且特異性好,但存在靈敏度較差且反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)等問(wèn)題。間接血凝試驗(yàn)與瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)相似都具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),但由于血凝抗原的穩(wěn)定性較差,因此需要頻繁制備。使用純化的多殺性巴氏桿菌抗原蛋白作為抗原建立的間接ELISA檢測(cè)方法同樣可以對(duì)該病進(jìn)行檢測(cè),且有報(bào)道認(rèn)為間接ELISA檢測(cè)的靈敏度顯著高于其他兩種方法。
3.分子生物學(xué)檢測(cè)。隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展,DNA雜交及PCR等分子生物學(xué)方法也被廣泛地用于病原生物的檢測(cè),分子生物學(xué)方法與傳統(tǒng)方法相比具有所需時(shí)間較短、靈敏度較高的優(yōu)點(diǎn),但對(duì)技術(shù)和平臺(tái)要求較高。細(xì)菌基因組的16S rRNA由于其種內(nèi)保守中間特異,是分子生物學(xué)檢測(cè)的重要靶標(biāo)分子,同時(shí)不同種細(xì)菌又具有其特異性的鑒定基因,如多殺性巴氏桿菌的KMT1基因,由于該基因的種特異性可以作為鑒定多殺性巴氏桿菌的特異性靶標(biāo)。
1.滅活疫苗。多殺性巴氏桿菌全菌滅活苗是目前最為常見(jiàn)的預(yù)防兔出血性敗血癥的商品化疫苗,其通常是選擇地方流行株傳代培養(yǎng)滅活后加入適當(dāng)?shù)臏缁顒┻M(jìn)行滅活,同時(shí)添加適當(dāng)?shù)拿庖咦魟┮蕴岣咚拿庖咴?。但由于全菌滅活苗不能很好地激起機(jī)體產(chǎn)生交叉保護(hù)因子,因此其僅能對(duì)同種血清型的毒株提高保護(hù)力,且由于滅活疫苗制備的工藝問(wèn)題,多殺性巴氏桿菌的某些抗原蛋白可能會(huì)發(fā)生缺失從而降低該疫苗的免疫保護(hù)力。目前常用的滅活疫苗除了多殺性巴氏桿菌單價(jià)滅活疫苗以外,還有多殺性巴氏桿菌—魏氏梭菌二價(jià)滅活苗及多殺性巴氏桿菌—魏氏梭菌—兔病毒性出血癥病毒三價(jià)滅活疫苗。
2.亞單位疫苗。為了解決滅活疫苗所存在的問(wèn)題,有大量的研究人員嘗試提取或合成多殺性巴氏桿菌的特定抗原蛋白(如外膜蛋白及脂多糖等)進(jìn)而制備亞單位疫苗。亞單位疫苗僅由細(xì)菌的部分蛋白做組成,因此不具有感染能力,因此可以避免滅活疫苗滅活不完全的潛在風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)亞單位疫苗可以由不同亞型的抗原蛋白組成,從而提高疫苗對(duì)不同亞型毒株的交叉保護(hù)能力。有研究報(bào)道認(rèn)為多殺性巴氏桿菌的外膜蛋白OmpH具有良好的免疫原性,可以激活動(dòng)物機(jī)體生產(chǎn)保護(hù)性抗體,針對(duì)多殺性巴氏桿菌脂蛋白B的單克隆抗體或多克隆抗體可以有效地中和病毒粒子從而阻止病毒對(duì)靶細(xì)胞和易感動(dòng)物的攻擊。
3.減毒疫苗。減毒疫苗與滅活疫苗及亞單位疫苗相比可以提供更高的交叉保護(hù)能力,且活疫苗由于可以在免疫動(dòng)物體內(nèi)增殖并具有更好的免疫原性,因此產(chǎn)生保護(hù)性抗體的所需時(shí)間更短,保護(hù)率更好。早期研究人員主要是通過(guò)分離自然弱毒株或人工培養(yǎng)致弱強(qiáng)毒株進(jìn)而制備減毒疫苗,但是該方式制備的疫苗具有安全性差,容易毒力返強(qiáng)和會(huì)引起個(gè)別病例死亡的不足。隨著分子生物學(xué)的大力發(fā)展,有更多的研究人員采用構(gòu)建毒力基因敲除的致弱毒株,從而構(gòu)建安全性更高的減毒疫苗。
1.飼養(yǎng)管理與防控。為了有效地預(yù)防兔出血性敗血癥,除了要對(duì)兔群進(jìn)行定期免疫接種以外,同時(shí)也需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和防控措施。在飼養(yǎng)的過(guò)程中,需要注意環(huán)境的衛(wèi)生,加強(qiáng)通風(fēng),每日對(duì)排出的糞便進(jìn)行清理,保持圈舍的空氣清潔和溫度恒定,減少病原生物生存的基質(zhì)。合理的調(diào)整兔群的飼養(yǎng)密度,合理搭配飼料,確保適當(dāng)?shù)木诛暳媳壤?,保證清潔的飲用水,禁止使用發(fā)霉變質(zhì)的飼料和飲水喂養(yǎng)兔群。對(duì)圈舍和飼養(yǎng)使用的器械定期消毒,當(dāng)有兔群發(fā)病時(shí),及時(shí)將病兔和健康兔進(jìn)行隔離,同時(shí)對(duì)圈舍環(huán)境進(jìn)行徹底消毒,以防止病原的擴(kuò)大傳播。
2.藥物治療。一旦發(fā)現(xiàn)兔群感染多殺性巴氏桿菌后,需馬上將健康兔群和患病兔群進(jìn)行隔離,并對(duì)患病兔群有針對(duì)性的治療。對(duì)鼻炎型或結(jié)膜炎型病兔可以使用鏈霉素滴加至患處進(jìn)行治療;針對(duì)積膿型病兔需先將膿液排出,然后使用消毒液清洗患處并撒布消炎粉;對(duì)其他類型患病兔可肌肉注射青霉素、鏈霉素或其混合物進(jìn)行抗生素治療,同時(shí)可以在飼料中添加0.1%的諾氟沙星,從而降低病原感染其他健康兔群的概率。
綜上所述,雖然兔出血性敗血癥在我國(guó)仍然呈現(xiàn)地方性流行,但只要養(yǎng)殖場(chǎng)戶合理飼養(yǎng),對(duì)兔群進(jìn)行科學(xué)免疫,保持兔圈環(huán)境衛(wèi)生,對(duì)疑似患病兔及時(shí)隔離、診斷并治療,就可以有效的控制該疾病的爆發(fā)并減低經(jīng)濟(jì)損失。