核致密斑點(diǎn)型抗核抗體的臨床應(yīng)用

戴 蕾，臧福宇，朱文波，鄭齊鍶，寧明哲，陶 月

0 引 言

抗核抗體(antinuclear autoantibodies，ANA)是臨床診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)、干燥綜合征(Sj?gren′s syndrome)等自身免疫病重要的參考指標(biāo)之一[1-3]。目前利用以人喉癌上皮細(xì)胞(HEp-2)為基質(zhì)的間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)抗核抗體仍然是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的檢測(cè)抗核抗體的“金標(biāo)準(zhǔn)”[4-6]。研究人員于2014年在巴西召開的第12屆國(guó)際自身抗體及自身免疫學(xué)術(shù)會(huì)議上第一次制定了ANA熒光模型國(guó)際共識(shí)(international consensus on antinuclear antibody pattern,ICAP)，并明確提出了核致密斑點(diǎn)型(nuclear dense fine speckled，AC-2)。但目前AC-2的臨床意義仍未得到具體的闡述。本研究對(duì)我院檢出的AC-2及其臨床意義做簡(jiǎn)要探討。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集2019年1-3月在南京鼓樓醫(yī)院收治的門診或住院或體檢中心患者的抗核抗體檢測(cè)報(bào)告顯示為核致密斑點(diǎn)型的血清標(biāo)本，共計(jì)19例，其中女18例，男1例，年齡25～73歲，中位數(shù)年齡29歲。血清標(biāo)本在采集后2 h內(nèi)送至檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測(cè)。臨床診斷：不孕癥6例，肝損傷、妊娠、關(guān)節(jié)炎、體檢各2例，橋本甲狀腺炎、胃炎、發(fā)熱待查、腎功能受損、貧血各1例。

1.2 試劑抗核抗體譜(IgG)檢測(cè)試劑盒(歐蒙印跡法)、抗核抗體IgG試劑盒(間接免疫熒光法)、抗DFS-70抗體(IgG)試劑盒(歐蒙印跡法)均購(gòu)自杭州歐蒙醫(yī)學(xué)科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)均參照試劑盒說明書完成。 抗核抗體譜(IgG)和抗DFS-70抗體(IgG)試劑盒檢測(cè)完成后，將檢測(cè)膜條放置在結(jié)果判定模板中，風(fēng)干后判讀結(jié)果?？购丝贵w(間接免疫熒光法)檢測(cè)后，用EUROStar III Plus 熒光顯微鏡下(40×物鏡)觀察檢測(cè)結(jié)果,間接免疫熒光法以HEp-2和猴肝作為檢測(cè)基質(zhì)。激發(fā)濾片：488 nm，分光濾鏡：510 nm，阻擋濾鏡：520 nm。

2 結(jié) 果

2.1 抗核抗體譜(IgG)檢測(cè)結(jié)果19例標(biāo)本的抗核抗體譜(IgG)檢測(cè)結(jié)果中，無特異性抗體陽性的結(jié)果標(biāo)本為17例，占89.47%。出現(xiàn)陽性結(jié)果的標(biāo)本為2例，占10.53%，其中1例表現(xiàn)為抗多發(fā)性肌炎/硬皮病抗體(PM-Scl)陽性，另1例表現(xiàn)為抗著絲點(diǎn)蛋白B(CenpB)和抗合成酶抗體(Jo-1)陽性。見圖1。

圖1 2例抗核抗體譜陽性標(biāo)本膜條結(jié)果

2.2 抗核抗體IgG檢測(cè)結(jié)果(HEp-2 IFA)19例患者標(biāo)本HEp-2 IFA核型檢測(cè)結(jié)果均為AC-2，選取其中2例患者的抗核抗體IgG檢測(cè)結(jié)果(Hep-2 IFA)，見圖2a、圖2b。另選取一張細(xì)胞核細(xì)顆粒型(AC-4)和一張細(xì)胞核均質(zhì)型(AC-1)作比對(duì)，見圖2c、圖2d。AC-2在猴肝基質(zhì)片中無特殊熒光表現(xiàn)，見圖3a、圖3b，選取AC-4和AC-1的猴肝基質(zhì)片圖像作比對(duì)，見圖3c、圖3d。

a-b：藍(lán)色箭頭所指的分裂期細(xì)胞在中間板層上呈致密顆粒分布，橙色箭頭所指的間期細(xì)胞呈顆粒樣分布且熒光不均勻；c：藍(lán)色箭頭所指的分裂期細(xì)胞中間板層無熒光染色；d：藍(lán)色箭頭所指的分裂期細(xì)胞中間板層呈均勻玻璃樣染色，橙色箭頭所指的間期細(xì)胞均勻染色圖2 AC-2、AC-4和AC-1在HEp-2細(xì)胞基質(zhì)上的熒光表現(xiàn)

a-b：猴肝基質(zhì)上未見明顯細(xì)胞特征；c：黃色箭頭示細(xì)胞核呈顆粒樣熒光；d：黃色箭頭示猴肝細(xì)胞呈均勻塊狀熒光圖3 AC-2、AC-4和AC-1在猴肝細(xì)胞基質(zhì)上的熒光表現(xiàn)

2.3 抗DFS-70 抗體(IgG)檢測(cè)結(jié)果19例患者標(biāo)本中，抗DFS-70 抗體(IgG)檢測(cè)結(jié)果均為陽性。見圖4。

圖4 抗DFS-70 抗體(IgG)檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

抗核抗體AC-2，即核致密斑點(diǎn)，在ICAP的抗核抗體熒光模型命名和分類樹中，歸屬于抗核抗體細(xì)胞核型中的斑點(diǎn)型，其在IIF法檢測(cè)ANA的初期并未引起重視。隨著對(duì)ANA研究的不斷深入，研究人員發(fā)現(xiàn)并明確了這種和均質(zhì)型及粗、細(xì)斑點(diǎn)型相似但存在差異的熒光模型。并在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)了特定的自身抗體抗DFS70抗體，這進(jìn)一步明確了核致密斑點(diǎn)型是一種獨(dú)立的熒光模型。

致密斑點(diǎn)型的典型形態(tài)特征為：間期細(xì)胞核呈現(xiàn)大小不一、熒光強(qiáng)弱不同、分布不均勻的熒光斑點(diǎn)。這些熒光斑點(diǎn)在間期細(xì)胞的某些地方分布密集，而在其它地方則分布疏松。細(xì)胞分裂中期，細(xì)胞中央板塊區(qū)則呈現(xiàn)強(qiáng)發(fā)光的斑點(diǎn)，并且呈粗顆粒狀[7-8]。值得注意的是，致密斑點(diǎn)型的間期形態(tài)容易與粗顆粒斑點(diǎn)型混淆，因?yàn)閮烧咴陂g期細(xì)胞內(nèi)均有廣泛分布的顆粒熒光。同時(shí)，致密斑點(diǎn)型的分裂中期形態(tài)還易與均質(zhì)型混淆，因?yàn)閮烧呔憩F(xiàn)出分裂期細(xì)胞染色體發(fā)出強(qiáng)的濃縮熒光。由于以上的熒光模型特征，致密斑點(diǎn)型同均質(zhì)型、粗顆粒斑點(diǎn)型，尤其是兩者混合的熒光模型不易分辨、容易混淆。

同時(shí)，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，我們對(duì)核致密斑點(diǎn)型的熒光特征做如下補(bǔ)充：①間期細(xì)胞中顆粒分布相對(duì)均勻，但發(fā)光強(qiáng)度不均勻；②間期細(xì)胞核充滿顆粒且有清晰邊界；③核仁呈顆粒熒光，但是不會(huì)出現(xiàn)空洞；④猴肝片上不呈現(xiàn)熒光等。并且，ICAP官網(wǎng)中提供了四張圖譜，其中的三張圖譜的試劑盒來源為美國(guó)INOVA公司。本實(shí)驗(yàn)室的ANA IgG抗體(IIF法)試劑盒來源為德國(guó)歐蒙公司，且有猴肝細(xì)胞基質(zhì)片協(xié)助判斷，為實(shí)驗(yàn)室工作人員學(xué)習(xí)AC-2的特征提供了參考。

在發(fā)現(xiàn)和命名AC-2致密斑點(diǎn)型后，研究人員開始嘗試明確致密斑點(diǎn)型ANA與自身免疫病的相關(guān)性，并探討該熒光模型與其他自身免疫病血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性[9-11]。目前，有國(guó)外報(bào)道存在AC-2核型ANA的人群不易患自身免疫病，其5年內(nèi)自身免疫病的發(fā)病率低于其他ANA陽性的人群[12-15]。在本研究中，19例AC-2核型的患者，有6例均因不孕癥而就診。因此我們提出假說，AC-2核型與不孕不育有一定相關(guān)性。但受制于本研究的樣本數(shù)過少，此猜測(cè)尚需更多樣本量及臨床數(shù)據(jù)支持。目前，對(duì)于該熒光模型的臨床意義還未達(dá)成廣泛的共識(shí)。

綜上可以看出，致密斑點(diǎn)型的形態(tài)學(xué)不典型，在ICAP中，該核型雖然被規(guī)定為一級(jí)必報(bào)核型，但不同于均質(zhì)型、粗顆粒斑點(diǎn)型以及細(xì)顆粒斑點(diǎn)型等常見熒光模型，致密斑點(diǎn)型對(duì)于檢驗(yàn)人員的經(jīng)驗(yàn)有著更高要求。實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)加強(qiáng)讀片的訓(xùn)練，為臨床提供準(zhǔn)確及時(shí)的報(bào)告。