跨省調(diào)運(yùn)活禽H7N9 亞型流感抗體監(jiān)測(cè)與分析

田亞娜，劉廣喜，謝 梅，李建強(qiáng)，張培訓(xùn)

（1.衡水市冀州區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 053200；2.保定冀中藥業(yè)有限公司 071000）

2013 年初，我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人感染H7N9 流感病例，隨后在活禽市場(chǎng)發(fā)現(xiàn)禽間H7N9 流感病毒感染。2017 年初，部分省份發(fā)現(xiàn)家禽高致病性H7N9 流感變異毒株，并引發(fā)多起家禽疫情。 同時(shí)， 人感染H7N9 病例驟增，2017 年1～6 月份全國(guó)人感染H7N9流感病例635 例， 死亡224 例。 為做好H7N9 流感防控工作，2017 年4 月份農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）發(fā)布第2516 號(hào)公告，對(duì)跨省調(diào)運(yùn)活禽前要進(jìn)行H7N9 檢測(cè)， 血清學(xué)陽(yáng)性的不得出具動(dòng)物檢疫合格證明。2017 年秋季以來(lái)，按照原農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）的要求，我省對(duì)家禽全面實(shí)施H7N9 流感免疫。2018 年12 月份，河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳印發(fā) 《河北省家禽H7N9 流感防治指導(dǎo)意見(jiàn)（2018-2020 年）》 的通知， 通知要求， 對(duì)跨省調(diào)運(yùn)活禽要進(jìn)行H7N9 流感免疫抗體檢測(cè)，免疫抗體合格率達(dá)到70%以上，方可出具動(dòng)物檢疫合格證明；對(duì)跨省調(diào)運(yùn)生長(zhǎng)周期小于50 天的肉雞肉鴨的，應(yīng)提供H7N9 流感免疫檔案。 2017 年4 月下旬以來(lái)，我區(qū)按照上級(jí)文件精神開(kāi)展了H7N9 流感血清學(xué)檢測(cè)。 2017 年4月份到2018 年12 月份檢測(cè)未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗的商品肉雞12 個(gè)場(chǎng)75 批（每批30 份，以下相同）2250 份血清、商品肉鵝3 個(gè)場(chǎng)4 批次120 份血清，血凝抑制效價(jià)均小于4log2,全部為陰性；2019 年7～12 月份檢測(cè)4 批次青年蛋雞120 份血清，血凝抑制效價(jià)在6～10log2，免疫抗體合格率均為100%；2019 年9～11 月份檢測(cè)末次免疫H7N9 亞型禽流感疫苗3～6 月后的淘汰蛋雞5 批150 份血清，血凝抑制效價(jià)在7～10log2，免疫抗體合格率均為100%。 現(xiàn)將各類(lèi)型禽免疫及抗體檢測(cè)情況報(bào)告如下。

1 被采樣禽免疫與采樣情況

1.1 2017 年4 月份到2018 年12 月份未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗禽血清采樣情況。

1.1.1 商品肉雞免疫與采樣情況：被采樣12 個(gè)商品肉雞場(chǎng)，7 個(gè)場(chǎng)網(wǎng)上平養(yǎng)，5 個(gè)場(chǎng)立體籠養(yǎng)，均未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗，40～42 日齡出欄前7～10d 抽血采樣， 共采商品肉雞12 個(gè)場(chǎng)75 批2250 份血清。

1.1.2 商品肉鵝免疫與采樣情況：被采樣3 個(gè)鵝場(chǎng)均樹(shù)林下地面平養(yǎng)， 未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗，70 日齡出欄前7d 左右抽樣檢測(cè)，共采4 批次120 份血清。

1.2 免疫H7N9 亞型禽流感疫苗禽的免疫與采樣情況

1.2.1 跨省調(diào)運(yùn)青年蛋雞免疫情況與采樣情況：2019 年7 月到2019 年12 月，對(duì)冀州區(qū)3 個(gè)雞場(chǎng)的4 批青年蛋雞進(jìn)行H7N9亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)，4 批雞的免疫與采樣情況見(jiàn)下表1。

1.3 淘汰蛋雞免疫與采樣情況：2019 年10 月至11 月，對(duì)冀州區(qū)5 個(gè)雞場(chǎng)的5 批淘汰雞進(jìn)行H7N9 亞型禽流感抗體檢測(cè)，5批雞的免疫與采樣情況見(jiàn)表2。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 檢測(cè)方法：高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗(yàn)。

表1 青年蛋雞免疫與采樣情況表（每次每批30 份血清）

表2 淘汰蛋雞免疫與采樣情況表（每次每批30 份血清）

2.2 檢測(cè)儀器：離心機(jī)、96 孔90°V 型血凝板、5～50μl 多道移液器、5-50μl 單道移液器、微量振蕩器、生化培養(yǎng)箱等。

2.3 檢測(cè)試劑

2.3.1 禽流感病毒H7 亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原: 哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)， 共用3 批， 批號(hào)分別是：2017004、2017006、2018003。2017 年3 月份至2018 年12 月用于檢測(cè)未免疫商品肉雞和商品肉鵝血清。

2.3.2 禽流感病毒H7 亞型（Re-2 株）血凝抑制試驗(yàn)抗原：哈爾濱國(guó)生生物科技股份公司生產(chǎn)，批號(hào)：20190415。 2019 年7月份至2019 年12 月份用于檢測(cè)免疫過(guò)重組禽流感病毒H7N9H7Re-2 株滅活疫苗的雞血清。

2.3.3 1%紅細(xì)胞懸液

按照高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗(yàn)要求制備1%紅細(xì)胞懸液。

2.3.4 被檢血清

上述1 中12 個(gè)商品肉雞場(chǎng)75 個(gè)批次2250 份雞血清，3 個(gè)商品肉鵝場(chǎng)4 批次120 份血清，3 個(gè)青年蛋雞場(chǎng)4 個(gè)批次120 份血清，5 個(gè)淘汰蛋雞場(chǎng)150 份血清，合計(jì)2640 份雞血清。

2.3.5 PBS 液

按照高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗(yàn)要求自制pH7.2 0.01mol/LPBS 液。

3 抗體檢測(cè)結(jié)果

3.1 2017 年4 月 份 至2018 年12 月 份 檢 測(cè)75 批 次2250 份商品肉雞血清，血凝抑制效價(jià)全部＜4log2，均為陰性。

3.2 2017 年5 月份至2018 年9 月份檢測(cè)3 個(gè)鵝場(chǎng)4 批120份血清，血凝抑制效價(jià)全部＜4 log2，均為陰性。

3.3 2019 年7 月份到2019 年12 月份檢測(cè)免疫青年蛋雞4批次120 份血清。A 雞場(chǎng)2 批次60 份血清血凝抑制效價(jià)均≧10 log2， 免疫抗體合格率均為100%;B 雞場(chǎng)血凝抑制效價(jià)在6～8 log2 ，平均血凝抑制效價(jià)為7.29 log2;C 雞場(chǎng)血凝抑制效價(jià)在7～10 log2 之間，平均血凝抑制效價(jià)為7.93 log2。 B、C 兩雞場(chǎng)免疫抗體合格率均為100%。

3.4 2019 年10 月-2019 年11 月份檢測(cè)淘汰蛋雞5 批150份血清。 D 養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9 血凝抑制效價(jià)在9～10 log2，平均血凝抑制效價(jià)為9.87log2；E 養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9 血凝抑制效價(jià)在7～10 log2、平均血凝抑制效價(jià)為8.87log2；F 養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9 血凝抑制效價(jià)在9～10 log2， 平均血凝抑制效價(jià)為9.67log2；G 養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9 血凝抑制效價(jià)在8～9 log2， 平均血凝抑制效價(jià)為9.47log2 ；H 養(yǎng)雞場(chǎng)H7N9 血凝抑制效價(jià)均≥10 log2 。這5 批淘汰蛋雞的免疫抗體合格率均為100%。

4 結(jié)果分析

4.1 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 和3.2 可以看出，2017 年4 月份到2018年12 份期間， 共檢測(cè)未免疫的12 個(gè)場(chǎng)75 批次2250 份血清，3個(gè)肉鵝場(chǎng)4 批次120 份血清，血凝抑制效價(jià)均小于4log2,全部為陰性。這說(shuō)明，2017 年4 月份到2018 年12 月份期間冀州區(qū)內(nèi)商品肉雞和商品肉鵝未感染H7N9 亞型流感或冀州區(qū)內(nèi)無(wú)H7N9亞型流感流行。

4.2 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.3 可以看出，2019 年檢測(cè)的A 場(chǎng)2 批60份血清H7N9H7Re-2 血凝抑制效價(jià)都≥10log2，血凝抑制效價(jià)水平高，且比較整齊，說(shuō)明所用疫苗質(zhì)量好，加強(qiáng)免疫效果好。 僅做過(guò)一次政府采購(gòu)禽流感疫苗的B、C 兩場(chǎng)各30 份雞血清血凝抑制抗體效價(jià)分別6～8log2 和7～10log2, 免疫抗體合格率均達(dá)到100%，免疫抗體效價(jià)也較高。在此以前的高致病性禽流感免疫抗體檢測(cè)工作中，對(duì)于僅做過(guò)1 次高致病性禽流感疫苗免疫的雞，免疫21d 后抽血進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)，血凝抑制效價(jià)往往水平低，參差不齊， 沒(méi)有一次血凝抑制效價(jià)全部合格的情況， 無(wú)論是H5亞型禽流感，還是H7 亞型禽流感。

4.3 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.4 中可以看出，D、E、F、G 養(yǎng)雞場(chǎng)春天3～4月份末次免疫后至10～11 月采血做H7N9 抗體檢測(cè)，各批雞平均血凝抑制效價(jià)在8.87～9.87log2， 且免疫抗體合格率均為100%，說(shuō)明H7N9 免疫抗體水平高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)6～7 月，這與開(kāi)產(chǎn)前的基礎(chǔ)免疫效果分不開(kāi)的。H 養(yǎng)雞場(chǎng)末次免疫間隔3 個(gè)月的血凝抑制效價(jià)≧10 log2，免疫抗體水平高，還有待跟蹤檢測(cè)。

4.4 本實(shí)驗(yàn)僅檢測(cè)了3 個(gè)青年蛋雞場(chǎng)的4 批青年雞120 份血清和5 個(gè)蛋雞場(chǎng)的5 批150 份淘汰雞血清的H7N9 免疫抗體，檢測(cè)批次和檢測(cè)分?jǐn)?shù)均較少， 還有待于增加檢測(cè)批次和檢測(cè)數(shù)量，更進(jìn)一步摸清H7N9 免疫抗體的變化規(guī)律。 由于目前養(yǎng)雞生產(chǎn)的實(shí)際情況，也未能做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

4.5 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果僅能代表疫苗株的免疫抗體水平，如流行毒株和疫苗毒株不匹配， 還不能真正代表雞體對(duì)當(dāng)前流行疾病的實(shí)際免疫能力。 建議：獸醫(yī)工作者根據(jù)禽疫病流行情況及時(shí)開(kāi)展疫病檢測(cè)，為動(dòng)物疫病防控工作提供科學(xué)依據(jù)。