陳榮華，趙敏，康惠玲，李勤光

[摘要] 目的 比較兩種全自動核酸檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果，探討國產(chǎn)乙肝核酸定量檢測的檢測性能。 方法 使用兩種系統(tǒng)對相同血漿及血清樣本的檢測結(jié)果，進行系統(tǒng)間一致性和相關性研究。結(jié)果 國產(chǎn)檢測系統(tǒng)與進口檢測系統(tǒng)羅氏相比，檢驗結(jié)果的符合率可達97%以上，決定系數(shù)在0.95以上，兩系統(tǒng)間呈顯著線性相關。 結(jié)論 國產(chǎn)乙肝核酸檢測可實現(xiàn)全自動操作，且系統(tǒng)性能可與國際水平相當。

[關鍵詞] 全自動核酸檢測系統(tǒng);檢測性能;國產(chǎn)乙肝核酸檢測;質(zhì)量控制;結(jié)果互認

[中圖分類號] R44 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-0742（2020）02（a）-0013-03

Comparison of Two Automatic Nucleic Acid Detection Systems for Hepatitis B Nucleic Acid Detection Performance

CHEN Rong-hua， ?ZHAO Min， ?KANG Hui-ling， LI Qin-guang

Mengchao Hepatobiliary Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350025 China

[Abstract] Objective To compare the detection results of two automatic nucleic acid detection systems， and to explore the quantitative detection performance of hepatitis b nucleic acid in China. Methods To study the consistency and correlation of the same plasma and serum samples by using two systems. Results Compared with the imported roche testing system， the coincidence rate of the test results reached over 97%， and the determination coefficient was above 0.95， showing a significant linear correlation between the two systems. Conclusion Domestic hepatitis b nucleic acid detection can be fully automatic operation， and the system performance can be comparable with the international level.

[Key words] Automatic nucleic acid detection system; Detection performance; Domestic hepatitis b nucleic acid test; Quality control; The results of mutual recognition

乙型肝炎是嚴重影響我國人民健康水平的公共衛(wèi)生問題，病情往往遷延反復，最終可導致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌等終未期肝病[1]?？共《局委熯m用于：ALT≥2×ULN，HBV DNA>2 000 IU/mL，或伴進展性肝纖維化的CHB患者[2]。

HBV-DNA檢測是乙肝患者常規(guī)檢測項目之一[3-4]，主要用來定量檢測患者血清或者血漿樣本內(nèi)的乙肝病毒的數(shù)量，適用于臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷，并可用于抗病毒藥物治療中療效的觀察[5-6]。對于已經(jīng)確定為乙型肝炎病毒感染的患者，在進行抗病毒治療期間，定量檢測可以隨時觀察抗病毒治療的效果，從而輔助用藥[7]。

目前臨床普遍認可使用羅氏公司的COBAS 系統(tǒng)及試劑進行乙肝核酸的定量檢測，該方法靈敏度高，線性范圍寬，且為全自動操作[8]。但該系統(tǒng)因成本較高，一般僅在大型三甲醫(yī)院使用;國內(nèi)產(chǎn)品因無法實現(xiàn)全自動操作或國產(chǎn)試劑靈敏度限制，檢測能力略低于羅氏。

珀金埃爾默公司旗下全資子公司蘇州新波生物技術有限公司開發(fā)了一款全自動核酸檢測反應體系構建系統(tǒng)Pre-NAT，可實現(xiàn)核酸提取及PCR反應體系配制的全自動操作，該系統(tǒng)可搭配多款PCR擴增儀共同使用，該文使用ABI7500擴增儀，搭配新波生產(chǎn)的乙肝核酸檢測試劑[9]，對該系統(tǒng)檢測能力與羅氏COBAS系統(tǒng)進行了比較研究，探討國產(chǎn)核酸檢測系統(tǒng)的檢測性能，現(xiàn)報道如下。

1 ?材料與方法

1.1 ?檢測系統(tǒng)

選擇羅氏檢測系統(tǒng)為參比系統(tǒng)，新波系統(tǒng)為考核系統(tǒng)，具體見表1。

表1 ? 考核系統(tǒng)與參比系統(tǒng)儀器及試劑列表

1.2 ?檢測方法

采用兩套系統(tǒng)，分別對相同乙肝核酸陽性樣本進行測試，比較新波檢測系統(tǒng)與羅氏檢測系統(tǒng)的一致性，并對定量測值進行線性回歸及相關性分析，共檢測血漿陽性樣本193例，血清樣本121例。

1.3 ?統(tǒng)計方法

利用Excel 2010進行數(shù)據(jù)匯總，并采用SAS 9.3統(tǒng)計學軟件進行分析。計數(shù)資料以[n（%）]表示，一致性比較采用Kappa檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義

2 ?結(jié)果

2.1 ?新波檢測系統(tǒng)及羅氏檢測系統(tǒng)的符合率及一致性比較

對193例血漿樣本及121例血清樣本檢測雙方檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，符合率及Kappa一致性檢驗結(jié)果見表2、表3;新波檢測系統(tǒng)與羅氏檢測系統(tǒng)的陽性符合率在99%以上，總符合率在97%以上，說明兩個系統(tǒng)檢測一致性較高，少數(shù)不符結(jié)果均為低濃度樣本，雙方均有一定的檢出概率[10]。Kappa一致性分析結(jié)果見表4（P<0.001），表明兩方試劑檢測結(jié)果一致性良好。

表3 ? 新波系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)kappa檢驗

2.2 ?新波檢測系統(tǒng)及羅氏檢測系統(tǒng)線性回歸及相關性分析

對檢測為的血漿和血清樣本中有明確定值結(jié)果的樣本進行線性分析，以羅氏系統(tǒng)的測定數(shù)值取log10為橫坐標，新波系統(tǒng)的測定數(shù)值取log10為縱坐標，使用SAS 9.3統(tǒng)計學軟件對上述樣本檢測數(shù)據(jù)進行線性回歸及相關性分析，分析結(jié)果如下所示。

圖1為兩方系統(tǒng)對血漿樣本測值散點圖直線回歸分析，表4為回歸系數(shù)及相關系數(shù)分析結(jié)果，線性回歸系數(shù)為0.9490，決定系數(shù)r2為0.9568（P<0.0001），回歸方程有統(tǒng)計學意義，兩方系統(tǒng)測值之間有直線關系。采用Spearman相關分析方法，原始數(shù)據(jù)取以10為底的對數(shù)后進行相關性分析，相關系數(shù)為0.9622（P<0.0001），說明兩組數(shù)據(jù)具有相關關系，且相關程度較高。

圖1 ? 考核系統(tǒng)（新波）與參比系統(tǒng)（羅氏）血漿樣本測值線性回歸分析（n=153）

表4 ? 雙方系統(tǒng)檢測血漿樣本線性回歸方程系數(shù)結(jié)果

圖2為兩方系統(tǒng)對血清樣本測值散點圖直線回歸分析，表5為回歸系數(shù)及相關系數(shù)分析結(jié)果，線性回歸系數(shù)為0.9620，決定系數(shù)r2為0.9601（P<0.0001），回歸方程有統(tǒng)計學意義，兩方系統(tǒng)測值之間有直線關系。采用Spearman相關分析方法，原始數(shù)據(jù)取以10為底的對數(shù)后進行相關性分析，相關系數(shù)為 0.9666（P<0.0001），說明兩組數(shù)據(jù)具有相關關系，且相關程度較高。

圖2 ?考核系統(tǒng)（新波）與參比系統(tǒng)（羅氏）血清樣本測值線性回歸分析（n=94）

3 ?討論

一般對于乙型肝炎患者治療視為有效的指標包括HBV DNA復制受到抑制、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶下降到正常值范圍、血清HBeAg轉(zhuǎn)換成陰性等[11]。因此，血清HBV DNA的監(jiān)測對抗病毒治療方案的療效判斷有重要的意義。隨著抗病毒治療時間的延長，HBV DNA均呈逐漸下降的趨勢，但由于檢測靈敏度的缺陷，對于500 IU/mL以下的病毒核酸難以準確定量，特別是對于HBeAg陰性患者，應該選擇高敏方法檢測HBVDNA水平，靈敏度低至20 IU/mL，可更好地觀察抗病毒療效，優(yōu)化治療方案[12]。

綜上所述，兩種全自動核酸檢測系統(tǒng)在檢測乙肝核酸時具有較高的一致性和相關性。與市場普遍認可的羅氏COBAS檢測系統(tǒng)相比，蘇州新波生產(chǎn)的全自動核酸檢測系統(tǒng)的總符合率達97%以上，陽性符合率可達99%以上;對陽性樣本進行線性回歸分析，兩方系統(tǒng)測值之間有直線關系，同時相關性分析顯示兩方系統(tǒng)檢測結(jié)果相關程度較高。結(jié)果表明蘇州新波生產(chǎn)的全自動核酸檢測系統(tǒng)對血清及血漿樣本均具有優(yōu)秀的乙肝核酸定量檢測能力，說明國產(chǎn)乙肝核酸檢測系統(tǒng)不僅可實現(xiàn)全自動化操作，且檢測性能可達到國際同等水平。

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（收稿日期：2019-11-05）