基于紫外烘曬的陳皮化柑橘總黃酮含量測定

肖珊美，楊曉東，刁銀軍，周瑋琳

(金華職業(yè)技術學院，浙江 金華 321017)

陳皮為中醫(yī)臨床常用理氣藥，來源于蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮[1-2]。柑橘是世界第一大果樹品種，種植面積和產(chǎn)量在世界百果中均居首位[3]。浙江省是我國柑橘主產(chǎn)地之一[4]，溫州蜜橘與茶枝柑、大紅袍、福橘并列，被2015年版《中國藥典》收錄為4種制作陳皮的柑橘原材料之一[5]。柑橘具有潤肺、止咳、化痰、健脾、順氣、止渴的藥效[6]。柑橘富含黃酮類化合物，不同品種的種類和分布有所不同[7-8]。本研究將溫州蜜橘全果在短波紫外線照射下，后經(jīng)45～55 ℃低溫緩慢干燥，促使表皮陳皮化，制作成“全果陳皮化柑橘”，并測定其中總黃酮的含量，旨在為柑橘的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

UV1900雙光束紫外可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)，全天候紫外烘曬干燥箱(自制)，JY-YF-1000搖擺式高速中藥材粉碎機(浙江省瑞安市東源醫(yī)療設備機械廠)，F(xiàn)A114A電子分析天平(上海豪晟科學儀器有限公司)，LT502C電子秤(常熟市天量儀器有限責任公司)，KQ-500TSE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 主要材料

溫州蜜橘采自衢州市柯城區(qū)草香園農(nóng)產(chǎn)品專業(yè)合作社柑橘種植基地，經(jīng)自制的全天候紫外烘曬干燥箱烘干，再用搖擺式高速中藥材粉碎機粉碎。蘆丁對照品購自中國藥品生物制品鑒定所，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 對照品制備

稱取蘆丁標準品0.015 9 g，用甲醇溶解，定容于50 mL容量瓶中，制備濃度為0.318 mg·mL-1的蘆丁對照品溶液。

1.3.2 樣品制備

稱取陳皮化柑橘粉末0.801 5 g，加入甲醇60 mL，超聲提取60 min后過濾，用適量甲醇清洗殘渣并過濾，收集濾液，用甲醇定容至100 mL。

1.3.3 硝酸鋁顯色法

吸取適量蘆丁對照品及樣品提取液于10 mL容量瓶中，加3 mL二次蒸餾水和5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻后放置5 min，加10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻后放置5 min，加5%氫氧化鈉2.5 mL，混勻放置10 min后用二次蒸餾水定容至10 mL。

1.3.4 總黃酮標準曲線制備

精密吸取蘆丁對照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，加入3 mL二次蒸餾水，5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻后放置5 min，加入10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻后放置5 min，加入5%氫氧化鈉2.5 mL，混勻放置10 min后用二次蒸餾水定容至刻度，配制的蘆丁對照品溶液濃度分別為0、0.006 4、0.012 7、0.019 1、0.025 4、0.031 8 mg·mL-1。使用紫外分光光度計檢測對照品溶液的吸光度，以樣品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

1.3.5 精密度試驗

分別取3份0.5 mL樣品溶液于10 mL容量瓶中，按1.3.3硝酸鋁顯色法處理后，測定吸光度，重復測定3次，進行精密度試驗。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗

取樣品溶液1份，按1.3.3硝酸鋁顯色法處理之后，分別測定顯色0.5、1、1.5、2、3 h后的吸光度，進行穩(wěn)定性試驗。

1.3.7 加標回收試驗

分別取3份0.5 mL樣品溶液于10 mL容量瓶，按1.3.3硝酸鋁顯色法處理之后，分別加入0.20、0.40、0.60 mL蘆丁標準溶液混合，二次蒸餾水定容至刻度，測定其吸光度，根據(jù)標準曲線計算總黃酮含量，計算加標回收率。

1.3.8 樣品總黃酮含量測定

取樣品溶液3份，按1.3.3節(jié)硝酸鋁顯色法處理之后，測定吸光度，由標準曲線獲得總黃酮含量。

2 結果與分析

2.1 對照品和樣品光譜掃描結果

按照硝酸鋁顯色法處理之后，將對照品溶液和樣品溶液在240～740 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，圖1可見，對照品和樣品光譜圖相似程度較高，在檢測范圍內(nèi)有多個明顯的波峰，峰形陡峭且緊密相連。樣品溶液在510 nm處有波峰，對照品溶液在相應波長處無特征峰[8]，因此以510 nm作為檢測波長。

圖1 對照品和樣品的掃描結果

2.2 蘆丁標準曲線

以蘆丁標準品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為y=12.767x-0.003 7，r=0.999 8，表明蘆丁標準品含量在0～0.04 mg·mL-1與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.3 精密度

精密度試驗結果表明，在510 nm下3次檢測吸光度為0.305、0.305、0.303，相對標準偏差為0.4%，說明精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性試驗結果表明，顯色0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h時，樣品檢測的吸光度基本保持穩(wěn)定，依次為0.308、0.309、0.305、0.302、0.297，顯色3 h的吸光度下降。相對標準偏差為1.6%

2.5 加標回收率

表1結果表明，本試驗中加標回收率為98.1%，相對標準偏差為0.5%，說明采用硝酸鋁顯色，紫外可見分光光度法測定陳皮化柑橘總黃酮含量的準確度較高。

表1 加標回收率的試驗結果

2.6 樣品中總黃酮含量

表2結果表明，本批次陳皮化柑橘總黃酮平均含量為61.05 mg·g-1，相對標準偏差為0.3%。

表2 陳皮化柑橘的總黃酮含量

3 討論

采用硝酸銀顯色，可見分光光度法檢測，以510 nm為檢測波長，蘆丁為對照品測定陳皮化柑橘中總黃酮的含量，總黃酮含量為61.05 mg·g-1，高于川陳皮中總黃酮含量[9]，表明紫外烘曬的陳皮化柑橘中含有豐富的黃酮類化合物，具有進一步開發(fā)應用的價值[10]。

全天候紫外烘曬干燥箱的特點為短波紫外線滅菌、低溫烘干，制備的陳皮化柑橘不易腐爛，易操控，陳皮化效果遠高于傳統(tǒng)陳皮制作方法。利用柑橘成熟果實制作陳皮化柑橘，開發(fā)柑橘藥食兩用的果茶新品，既提升產(chǎn)品價值，增加果農(nóng)收益，又符合我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展這一項長遠戰(zhàn)略方針。