劉振凱 崔晶 理永霞 鄧勛 張星耀

(中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)新技術(shù)研究所,北京,100091)

松材線蟲(chóng)病是由松材線蟲(chóng)(Bursaphelenchusxylophilus)引起的一種極具破壞性的森林病害。該病傳播蔓延迅速，防治難度大，已成為我國(guó)最具危險(xiǎn)性的森林災(zāi)害。松材線蟲(chóng)病是一個(gè)復(fù)雜的病害系統(tǒng)，多種因素如松材線蟲(chóng)、寄主植物、媒介昆蟲(chóng)、伴生真菌和細(xì)菌、經(jīng)濟(jì)物流活動(dòng)及環(huán)境因子相互作用，導(dǎo)致其致病機(jī)理尚存爭(zhēng)議[1-2]。

蒎烯類物質(zhì)在松材線蟲(chóng)與寄主互作的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。松樹(shù)產(chǎn)生的蒎烯類次級(jí)代謝物質(zhì)可以增強(qiáng)植物對(duì)外界生物脅迫的抵抗能力[3]，提高對(duì)于一些非松樹(shù)害蟲(chóng)和病原真菌的毒殺和趨避作用[4-6]。當(dāng)松材線蟲(chóng)侵染松樹(shù)后，大量增加的揮發(fā)性蒎烯類物質(zhì)可導(dǎo)致木質(zhì)部的管胞形成空洞，使松樹(shù)因水分輸導(dǎo)受阻而枯死[7-8]。α和β-蒎烯是松樹(shù)產(chǎn)生的主要蒎烯類物質(zhì)，α和β-蒎烯在較低質(zhì)量濃度時(shí)均可抑制松材線蟲(chóng)的繁殖，而較高質(zhì)量濃度時(shí)均可促進(jìn)松材線蟲(chóng)的繁殖[3]。除蒎烯的種類和質(zhì)量濃度外，松材線蟲(chóng)侵染松樹(shù)的過(guò)程中，樹(shù)體內(nèi)α和β-蒎烯比例會(huì)發(fā)生明顯地改變。健康松樹(shù)體內(nèi)α與β-蒎烯的比例為1.0∶0.1，在受到松材線蟲(chóng)侵染枯死后，樹(shù)體內(nèi)的α與β-蒎烯的比例變?yōu)?.0∶0.8[9-10]。

松材線蟲(chóng)在侵染松樹(shù)的過(guò)程中，寄主產(chǎn)生的α和β-蒎烯質(zhì)量濃度和比例能夠?qū)λ刹木€蟲(chóng)的繁殖產(chǎn)生顯著影響。本研究按一定比例對(duì)2種蒎烯進(jìn)行混合，研究其對(duì)松材線蟲(chóng)種群繁殖的影響，并采用RNA-Seq技術(shù)對(duì)α和β-蒎烯處理下松材線蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析，明確了松材線蟲(chóng)響應(yīng)α和β-蒎烯脅迫的分子特征，并分析了與松材線蟲(chóng)蒎烯代謝相關(guān)的功能基因，為進(jìn)一步揭示松材線蟲(chóng)響應(yīng)蒎烯類物質(zhì)脅迫的機(jī)制提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

選用中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林病原整合生物學(xué)研究室保存的松材線蟲(chóng)Nxy61蟲(chóng)株，該蟲(chóng)株于浙江寧波市發(fā)病的馬尾松(Pinusmassoniana)上獲得，通過(guò)貝爾曼漏斗法分離、鏡檢、純化后灰葡萄孢(Botrytiscinerea)培養(yǎng)。試驗(yàn)采用的松材線蟲(chóng)為混合蟲(chóng)態(tài)(卵、幼蟲(chóng)及成蟲(chóng))，將50 μL線蟲(chóng)液(約100頭線蟲(chóng))接種于灰葡萄孢PDA平板，25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)7 d，收集線蟲(chóng)，加入鏈霉素(100 mg·L-1)、氯霉素(20 mg·L-1)靜置8 h，6 500 r·min-1離心3 min，去掉上清液，再用PBST緩沖液沖洗3次，收集松材線蟲(chóng)。

1.2 蒎烯處理液制備

松樹(shù)受到松材線蟲(chóng)侵染后，樹(shù)體內(nèi)α與β-蒎烯比例由1.0∶0.1變?yōu)?.0∶0.8，選擇α與β-蒎烯比例為1.0∶0.4來(lái)模擬松材線蟲(chóng)在侵染過(guò)程中樹(shù)體內(nèi)2種蒎烯的變化，按照1.0∶0.4的比例混合制備質(zhì)量濃度為4.29、17.16、25.74、42.90、128.70、214.50 g·L-1蒎烯處理液，用0.5% Triton X-100作為對(duì)照(CK)。

1.3 蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖率影響的測(cè)定

采用棉球生測(cè)法測(cè)定蒎烯在短時(shí)和長(zhǎng)時(shí)處理?xiàng)l件下對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖率的影響。短時(shí)處理，分別用6種質(zhì)量濃度的α和β-蒎烯混合液浸泡松材線蟲(chóng)48 h，收集線蟲(chóng)，然后接50 μL線蟲(chóng)液(500頭線蟲(chóng))到灰葡萄孢的PDA平板上，對(duì)照用50 μL的0.5% Triton X-100溶液浸泡處理。長(zhǎng)時(shí)處理，在長(zhǎng)滿灰葡萄孢的PDA平板中央用5 mm無(wú)菌打孔器打孔，放入無(wú)菌脫脂棉球，在棉球上加入50 μL不同質(zhì)量濃度的蒎烯，同時(shí)往菌絲上加入50 μL的松材線蟲(chóng)液(500頭線蟲(chóng))，對(duì)照加入50 μL的0.5% Triton X-100溶液。2種處理及對(duì)照均在25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)7 d，然后分離和收集松材線蟲(chóng)，統(tǒng)計(jì)松材線蟲(chóng)成蟲(chóng)、幼蟲(chóng)和卵的數(shù)量，每種處理重復(fù)5次。

1.4 蒎烯脅迫對(duì)松材線蟲(chóng)影響的基因檢測(cè)

松材線蟲(chóng)的蒎烯處理：采用1.1的方法制備松材線蟲(chóng)，根據(jù)生理測(cè)定的結(jié)果選用質(zhì)量濃度為17.16 g·L-1的蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)浸泡48 h，收集線蟲(chóng)，將用PBST緩沖液沖洗后的線蟲(chóng)分裝至去RNA酶的1.5 mL離心管中，每管約2萬(wàn)頭，12 000 r·min-1離心3 min去上清，液氮處理后置于-80 ℃保存?zhèn)溆茫貜?fù)3次，以0.5% Triton X-100浸泡處理作為對(duì)照。

松材線蟲(chóng)總RNA的提取及檢測(cè)：采用Trizol試劑法提取蒎烯處理后松材線蟲(chóng)的總RNA，通過(guò)分光光度儀(NanoDrop 1000)檢測(cè)RNA的濃度和純度，1%瓊脂糖電泳檢測(cè)RNA的完整性和質(zhì)量，RNA樣品合格后置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

cDNA文庫(kù)構(gòu)建和上機(jī)測(cè)序：用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，然后加入碎片化緩沖液將mRNA打斷成短片段，以mRNA目的片段為模板，用六堿基隨機(jī)引物合成cDNA第1鏈，再加入緩沖液、dNTPs和DNA聚合酶I合成cDNA第2鏈，采用核酸純化試劑盒(AMPureXP)純化雙鏈cDNA。純化的雙鏈cDNA先進(jìn)行末端修復(fù)、加A尾并連接測(cè)序接頭，然后再用磁珠(AMPureXP)進(jìn)行片段大小選擇，通過(guò)PCR富集得到最終的cDNA文庫(kù)。cDNA文庫(kù)的構(gòu)建與測(cè)序及后續(xù)的數(shù)據(jù)分析由北京諾禾致源生物信息科技有限公司協(xié)助完成。

差異表達(dá)基因的篩選及分析：首先用edgeR工具包對(duì)各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù)歸一化，再利用DEGSeq工具包對(duì)蒎烯處理下的差異表達(dá)基因進(jìn)行計(jì)算和分析，以P<0.05和|log2(差異倍數(shù))|≥1作為差異基因表達(dá)的界定標(biāo)準(zhǔn)，并將差異基因分為上調(diào)和下調(diào)表達(dá)兩類。用GOseq R工具包進(jìn)行差異表達(dá)基因的GO富集分析(P<0.05)，用KOBAS軟件進(jìn)行差異表達(dá)基因的KEGG富集分析(P<0.05)。

差異表達(dá)基因的實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證：采用RNA微量提取試劑盒(Rneasy Micro Kit)提取松材線蟲(chóng)蒎烯處理組和對(duì)照組總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Primescript RT reagent Kit with gDNA Eraser)將松材線蟲(chóng)的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(TB GreenTMFast qPCR Mix)，在羅氏LC480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，以肌動(dòng)蛋白基因作為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCT法計(jì)算各差異基因的相對(duì)表達(dá)量[11]，每個(gè)處理重復(fù)3次。利用Sigma在線工具OligoArchitectTM(http://www.oligoarchitect.com)設(shè)計(jì)RT-PCR引物，引物見(jiàn)表1。

表1 Real-time PCR所用引物

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0和Excel 2013對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，使用SPSS的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行單因素方差分析(P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖率的影響

由表2可見(jiàn)，短時(shí)處理?xiàng)l件下，隨著蒎烯質(zhì)量濃度的升高，松材線蟲(chóng)的繁殖率呈現(xiàn)由低到高的變化規(guī)律。當(dāng)蒎烯質(zhì)量濃度相對(duì)較低時(shí)(4.29、17.16、25.74 g·L-1)，松材線蟲(chóng)的繁殖率明顯低于對(duì)照，表明低質(zhì)量濃度蒎烯能夠抑制松材線蟲(chóng)繁殖，其中質(zhì)量濃度為17.16 g·L-1時(shí)抑制效果最為明顯，種群數(shù)量?jī)H為3 667頭；當(dāng)蒎烯質(zhì)量濃度升高時(shí)(42.90、128.70 g·L-1)，松材線蟲(chóng)的繁殖率明顯高于對(duì)照，表明高質(zhì)量濃度蒎烯能夠促進(jìn)松材線蟲(chóng)繁殖，其中在質(zhì)量濃度為42.90 g·L-1時(shí)促進(jìn)作用最明顯；當(dāng)質(zhì)量濃度繼續(xù)升高時(shí)，蒎烯則抑制松材線蟲(chóng)繁殖。長(zhǎng)時(shí)處理?xiàng)l件下，松材線蟲(chóng)的繁殖率呈現(xiàn)先下降再上升的趨勢(shì)。與短時(shí)處理相比，當(dāng)蒎烯質(zhì)量濃度為4.29 g·L-1時(shí)能夠促進(jìn)松材線蟲(chóng)的繁殖(P<0.05)，當(dāng)質(zhì)量濃度為17.16、25.74 g·L-1時(shí)對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖率無(wú)顯著影響，當(dāng)蒎烯質(zhì)量濃度升高時(shí)(42.90、128.70 g·L-1)，則可促進(jìn)松材線蟲(chóng)繁殖(P<0.05)。α和β-蒎烯共同作用下對(duì)松材線蟲(chóng)的繁殖率測(cè)定結(jié)果表明，2種蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)的繁殖率具有明顯的調(diào)節(jié)作用，17.16 g·L-1的短時(shí)處理對(duì)松材線蟲(chóng)的繁殖抑制效果最明顯。

表2 α和β-蒎烯混合液對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖率的影響

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n=3。同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示處理間的差異顯著性(P<0.05)。

2.2 差異表達(dá)基因

低質(zhì)量濃度(17.16 g·L-1)的α和β-蒎烯處理共獲得146條差異表達(dá)基因，其中上調(diào)表達(dá)116條，下調(diào)表達(dá)30條，上調(diào)表達(dá)的前20個(gè)差異基因功能主要包括：氧化還原酶活性、類固醇激素受體蛋白、轉(zhuǎn)錄受體蛋白、水解酶、酯酶及酸性磷酸酶活性，而下調(diào)表達(dá)的前15個(gè)差異基因功能主要包括：氧化還原酶活性、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白、乙醇脫氫酶活性、雙加氧酶、精氨酸激酶等(表3)。上調(diào)表達(dá)基因中，氧化還原活性基因主要以解毒基因?yàn)橹鳎?xì)胞色素酶P450基因家族(CYP450)、葡萄糖醛酸脫氫酶家族(UGT)以及短鏈脫氫酶基因家族(SDR)。

表3 蒎烯誘導(dǎo)后松材線蟲(chóng)主要差異表達(dá)基因

續(xù)(表3)

2.3 差異表達(dá)基因的GO功能分類

通過(guò)比對(duì)松材線蟲(chóng)基因組對(duì)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果進(jìn)行GO功能分類富集分析(P≤0.05)，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因主要富集在兩類生物學(xué)過(guò)程，即生物過(guò)程和分子功能。其中生物學(xué)過(guò)程主要包括：氧化還原作用(GO:0055114)、脂類代謝(GO:0030258)、代謝過(guò)程(GO:0008152)、單體生物代謝過(guò)程(GO:0044710)等；分子功能主要包括：氧化還原酶活性(GO:0016491)、催化活性(GO:0003824)、輔助因子結(jié)合(GO:0048037)、血紅素結(jié)合(GO:0020037)、吡咯結(jié)合(GO:0046906)、黃素單核甘酸結(jié)合(GO:0010181)、鐵離子結(jié)合(GO:0005506)等，其中細(xì)胞色素P450是一種血紅素結(jié)合蛋白，而血紅素結(jié)合(GO:0020037)和鐵離子結(jié)合(GO:0005506)等GO的顯著富集，說(shuō)明在松材線蟲(chóng)響應(yīng)蒎烯的過(guò)程中表面氧化還原作用是主要的生物學(xué)過(guò)程，氧化還原酶是主要的功能蛋白，CYP450是一類重要的參與松材線蟲(chóng)應(yīng)對(duì)蒎烯脅迫、具有氧化還原作用的氧化還原酶。

對(duì)GO富集分類的基因統(tǒng)計(jì)表明，基因以上調(diào)表達(dá)為主，富集基因較多的生物學(xué)過(guò)程，包括代謝過(guò)程上調(diào)表達(dá)62條，下調(diào)表達(dá)16條；單體代謝上調(diào)表達(dá)55條，下調(diào)表達(dá)16條；氧化還原過(guò)程上調(diào)表達(dá)29條，下調(diào)表達(dá)7條；其他的生物學(xué)過(guò)程包括脂類代謝、碳水化合物代謝等也以上調(diào)表達(dá)為主。富集基因較多的分子功能包括分子過(guò)程上調(diào)表達(dá)81條，下調(diào)表達(dá)23條；催化活性上調(diào)表達(dá)67條，下調(diào)表達(dá)15條；氧化還原酶活性上調(diào)表達(dá)30條，下調(diào)表達(dá)6條；同樣以上調(diào)表達(dá)為主(表4)。

2.4 KEGG代謝途徑富集通路

通過(guò)KEGG富集對(duì)蒎烯處理后的差異表達(dá)基因進(jìn)一步分析，在富集最顯著的20條代謝通路中，外源物質(zhì)的P450代謝通路和藥物代謝通路的富集程度最大，二者均與有毒物質(zhì)的代謝有關(guān)；其他代謝通路包括近端小管碳酸鹽回收，通過(guò)碳酸根離子的釋放和回收來(lái)調(diào)節(jié)體腔內(nèi)pH平衡，保證松材線蟲(chóng)體液平衡；維生素B6的代謝、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的降解通路；氯化烷烴等外源性物質(zhì)的降解和代謝通路；以及酪氨酸代謝、脂肪酸代謝、過(guò)氧化物酶體通路等(圖1)。為應(yīng)對(duì)蒎烯脅迫，除了以氧化還原為主的外源物質(zhì)代謝外，松材線蟲(chóng)還通過(guò)氨基酸代謝和碳水化合物代謝等其他途徑進(jìn)行應(yīng)對(duì)，包括生長(zhǎng)調(diào)控、表皮蛋白變化等，消除蒎烯對(duì)自身的危害。

表4 蒎烯處理松材線蟲(chóng)差異表達(dá)基因的GO功能分析

2.5 差異表達(dá)基因的實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證

通過(guò)功能分析，選擇差異表達(dá)數(shù)量豐富且在GO分類和KEGG代謝通路中均顯著富集的12個(gè)差異基因，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物(表1)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR分析，驗(yàn)證12個(gè)差異基因在松材線蟲(chóng)中的表達(dá)情況，其中CYP-33C1、CYP-33C4、CYP-33C2、CYP-33C9、UGT-48、DHS-2、DHS-27為上調(diào)表達(dá)基因，gsnl-1、F13H6.3、TBC1D5、ZK550.6、HSD17B13為下調(diào)表達(dá)基因，定量PCR的分析結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的結(jié)果一致(表5)。

表5 α和β-蒎烯處理下松材線蟲(chóng)基因的相對(duì)表達(dá)量

注：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n=3。

3 結(jié)論與討論

松材線蟲(chóng)病作為我國(guó)最具危險(xiǎn)性的森林病害，已對(duì)我國(guó)的松林生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴(yán)重的危害。在松材線蟲(chóng)侵染致病過(guò)程中，松樹(shù)蒎烯類次級(jí)代謝物質(zhì)在松材線蟲(chóng)致病與寄主防御過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。

松材線蟲(chóng)侵染松樹(shù)后，松樹(shù)代謝產(chǎn)生的主要蒎烯類物質(zhì)為α-蒎烯、β-蒎烯和長(zhǎng)葉烯[12]，在不同的侵染階段松樹(shù)體內(nèi)α和β-蒎烯比例會(huì)發(fā)生明顯地改變。寄主產(chǎn)生的α和β-蒎烯均可對(duì)松材線蟲(chóng)種群繁殖產(chǎn)生不同程度的影響[13]，其中α和β-蒎烯在較低質(zhì)量濃度時(shí)可抑制松材線蟲(chóng)的繁殖，而較高質(zhì)量濃度時(shí)可促進(jìn)松材線蟲(chóng)的繁殖[3]。本研究對(duì)α和β-蒎烯混合后對(duì)松材線蟲(chóng)繁殖影響的研究表明，混合后的蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)種群繁殖同樣存在顯著的影響，與α和β-蒎烯單獨(dú)處理相比[3]，α和β-蒎烯混合處理對(duì)松材線蟲(chóng)種群繁殖的影響更明顯。α和β-蒎烯68.80 g·L-1單獨(dú)處理松材線蟲(chóng)時(shí)會(huì)抑制其繁殖[3]，但α和β-蒎烯混合處理質(zhì)量濃度為17.16 g·L-1時(shí)則可明顯抑制松材線蟲(chóng)的繁殖。α和β-蒎烯275.20 g·L-1單獨(dú)處理松材線蟲(chóng)時(shí)可促進(jìn)其繁殖率[3]，α和β-蒎烯混合處理促進(jìn)松材線蟲(chóng)繁殖的質(zhì)量濃度要遠(yuǎn)低于單獨(dú)處理，分別為短時(shí)處理的42.90 g·L-1和長(zhǎng)時(shí)處理的4.29 g·L-1。松樹(shù)蒎烯特別是高質(zhì)量濃度單萜類物質(zhì)的積累是松樹(shù)響應(yīng)生物脅迫的主要防御反應(yīng)[14-15]，而高質(zhì)量濃度蒎烯處理能顯著增加松材線蟲(chóng)種群的繁殖，說(shuō)明在松材線蟲(chóng)體內(nèi)含有大量表達(dá)解毒作用和繁殖相關(guān)的基因應(yīng)對(duì)蒎烯脅迫，從而保障松材線蟲(chóng)在松樹(shù)體內(nèi)成功定殖并使其種群持續(xù)增長(zhǎng)，最終導(dǎo)致松樹(shù)萎蔫死亡[8，16-18]。

通過(guò)對(duì)受蒎烯抑制后松材線蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組的分析，得到多條與松材線蟲(chóng)應(yīng)對(duì)蒎烯脅迫相關(guān)的基因，蒎烯處理后松材線蟲(chóng)的差異基因以上調(diào)表達(dá)為主，主要包括細(xì)胞色素酶P450基因家族、葡萄糖醛酸脫氫酶家族和短鏈脫氫酶基因家族以及其他氧化還原酶和激素受體，其中細(xì)胞色素酶P450基因家族(CYP450)和葡萄糖醛酸脫氫酶家族在GO分類和KEGG代謝通路中都顯著富集。CYP450代謝途徑是生物體降解有毒物質(zhì)的重要代謝途徑，推測(cè)細(xì)胞色素酶P450基因家族和葡萄糖醛酸脫氫酶家族有可能是松材線蟲(chóng)在侵染松樹(shù)的過(guò)程中響應(yīng)蒎烯脅迫的關(guān)鍵基因，并且起到了防御和解除蒎烯脅迫的作用[19]。除了CYP450等解毒基因外，NADH氧化酶和水解酶同樣在松材線蟲(chóng)響應(yīng)蒎烯脅迫時(shí)發(fā)揮了重要作用。此外，在上調(diào)表達(dá)基因中的修補(bǔ)相關(guān)蛋白PTCHD3和PTCHD9可以調(diào)控蛻皮周期、表皮蛋白以及正向調(diào)控多細(xì)胞組織的生長(zhǎng)，說(shuō)明松材線蟲(chóng)的生長(zhǎng)調(diào)控蛋白在蒎烯處理下也表現(xiàn)出一定的響應(yīng)且對(duì)蒎烯的脅迫產(chǎn)生了防御。核受體亞家族Ⅱ?qū)儆陬惞檀技に厥荏w蛋白具有轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能，對(duì)松材線蟲(chóng)適應(yīng)脅迫同樣發(fā)揮了重要作用。

本研究在α和β-蒎烯對(duì)松材線蟲(chóng)的繁殖影響結(jié)果的基礎(chǔ)上，對(duì)受蒎烯抑制后松材線蟲(chóng)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析。蒎烯質(zhì)量濃度會(huì)對(duì)松材線蟲(chóng)的種群繁殖產(chǎn)生顯著影響，并且松材線蟲(chóng)對(duì)α和β-蒎烯共同作用的反應(yīng)更敏感。細(xì)胞色素酶P450基因家族和葡萄糖醛酸脫氫酶家族可能在松材線蟲(chóng)響應(yīng)蒎烯脅迫的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，松材線蟲(chóng)通過(guò)體內(nèi)的解毒基因(CYP450)對(duì)蒎烯進(jìn)行氧化還原修飾、在離子和小分子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白協(xié)助下對(duì)蒎烯進(jìn)行降解，同時(shí)部分上調(diào)表皮蛋白合成基因也參與該過(guò)程。本研究闡釋了松材線蟲(chóng)在蒎烯脅迫下生理和分子水平上的變化，為進(jìn)一步揭示松材線蟲(chóng)應(yīng)對(duì)蒎烯脅迫的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。