益母縮宮顆粒對(duì)藥物不全流產(chǎn)大鼠子宮勻漿NO、NOS的影響

吳敏　何青蘭　李虹秀　李品英　黃正迎　楊婷　毛惠

【摘要】目的 通過(guò)研究益母縮宮顆粒對(duì)藥物不全流產(chǎn)大鼠子宮勻漿中NO含量、NOS活力的影響以探究本藥對(duì)模型大鼠的作用機(jī)制。方法 通過(guò)灌服米非司酮+米索前列醇造成藥物不全流產(chǎn)大鼠模型，造模成功后分別灌服不同劑量實(shí)驗(yàn)藥物及對(duì)照藥物，然后檢測(cè)各組大鼠子宮勻漿中NO含量及NOS活力。結(jié)果 與模型組相比，益母縮宮顆粒高劑量組、新生化顆粒組大鼠子宮組織勻漿中NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;新生化顆粒組及益母縮宮顆粒各組NOS活力與模型組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。結(jié)論 ①高劑量益母縮宮顆粒能降低模型大鼠子宮勻漿中NO含量，效果與新生化顆粒相當(dāng)。

【關(guān)鍵詞】益母縮宮顆粒;藥物不全流產(chǎn);子宮勻漿;NO含量

【中圖分類號(hào)】R714.21 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2020.7..02

全世界每年大約有8500萬(wàn)例非意愿妊娠，其中50%以流產(chǎn)告終[1]。近年來(lái)，由于米非司酮聯(lián)聯(lián)合索前列醇終止早孕具有成功率高、使用方便、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)而成為藥物流產(chǎn)的常用方法。但藥流后常有藥流不完全而導(dǎo)致陰道流血時(shí)間長(zhǎng)和陰道流血量多的并發(fā)癥。我院院內(nèi)制劑益母縮宮顆粒由《傅青主女科》生化湯化裁而來(lái)，由益母草、川芎、枳殼、當(dāng)歸、炮姜、桃仁、生蒲黃組成，具有活血化瘀、促進(jìn)宮縮的作用，前期研究證實(shí)其能有效減少藥物流產(chǎn)后陰道流血時(shí)間，有促進(jìn)惡露排出及輔助子宮復(fù)舊的作用[2][3]，但其對(duì)藥物流產(chǎn)后子宮的作用機(jī)制尚未完全明確，本實(shí)驗(yàn)按照王曉東[4]所述實(shí)驗(yàn)方法造成藥物不全流產(chǎn)大鼠模型，檢測(cè)大鼠子宮勻漿中NO含量及NOS活力尋找本藥對(duì)于模型大鼠子宮可能的作用機(jī)制，為該藥的臨床應(yīng)用提供依據(jù)，也為本藥的進(jìn)一步研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)別SD大鼠，雌性60只，雄性30只，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào) SCXK（川）2015-030。雌性大鼠體重210～240 g，雄性大鼠體重250～280 g，飼養(yǎng)于西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SYXK（川）2018-065。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

益母縮宮顆粒，10 g/袋，西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)20181005，大鼠給藥量為低劑量組3.125 g/（kg.d），中劑量組6.25 g/（kg.d），高劑量組12.5 g/（kg.d）。

新生化顆粒，9 g/袋，江蘇仁壽藥業(yè)有限公司，批號(hào)181211，大鼠服藥劑量為2.813 g/（kg.d）。

米非司酮，內(nèi)含米非司酮25 mg/片，華潤(rùn)紫竹藥業(yè)有限公司，批號(hào)431904011，大鼠給藥量為8.3 mg/kg。

米索前列醇，內(nèi)含米索前列醇0.2 mg/片，華潤(rùn)紫竹藥業(yè)有限公司，批號(hào)43190302，大鼠灌胃量為0.1 mg/kg。

水合氯醛，100 g/瓶，天津大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)20181201，使用時(shí)用生理鹽水配制成10% 溶液。

所有灌胃藥物均根據(jù)人鼠劑量比換算成大鼠灌胃劑量，成人體重按60 kg計(jì)算。

1.3 實(shí)驗(yàn)所需試劑及儀器

實(shí)驗(yàn)試劑：總蛋白（TP）測(cè)試盒，A045-2-1;一氧化氮（NO）測(cè)試盒，A012-1-2;總一氧化氮合成酶（NOS）測(cè)試盒，A014-2-2，均由南京建成生物工程研究所提供。

實(shí)驗(yàn)儀器：恒溫電子水浴鍋，型號(hào)DZKW-4，北京中興偉業(yè)儀器有限公司;酶標(biāo)儀，型號(hào)SpectraMAX Plus384，美谷分子儀器有限公司;722可見分光光度計(jì)，UV752N紫外可見分光光度計(jì)，上海佑科儀器儀表有限公司;優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)，型號(hào)UPH-Ⅱ-10T，成都超純科技有限公司;手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器，型號(hào)SYQ-DSX-280B，上海申安醫(yī)療器械廠。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模

按照王曉東[4]所述實(shí)驗(yàn)方法造模，將雌雄大鼠于每日下午18：00按2：1合籠，次晨08：00檢查雌鼠陰道，查見陰栓或者陰道分泌物涂片于鏡下查見精子則視為該雌鼠受孕d1，未受孕雌鼠于下午18：00繼續(xù)合籠，連續(xù)合籠一周。

將受孕雌鼠取8只作為空白組分籠喂養(yǎng)，其余受孕雌鼠受孕d7統(tǒng)一造模，受孕d7日晨08：00灌胃米非司酮混懸液0.83 mg/ml，下午18：00灌胃米索前列醇混懸液0.01 mg/ml，空白組大鼠灌胃動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飲用水，灌胃濃度均為1 ml/100g。灌胃米索前列醇后于雌鼠陰道內(nèi)置入定量棉球1枚，次晨檢查大鼠陰道內(nèi)棉球，查見血跡認(rèn)定為造模成功。將造模成功大鼠分為益母縮宮顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組及新生化顆粒組。

各組大鼠均于受孕d8灌胃藥物，實(shí)驗(yàn)組分別灌胃高、中、低濃度益母縮宮顆粒，對(duì)照組灌胃新生化顆粒，模型組及空白組大鼠灌服動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飲用水。連續(xù)灌胃7天，每天1次。

2.2 動(dòng)物標(biāo)本的采集

各組大鼠于開始灌胃第8天用水合氯醛按0.35 ml/100 g劑量腹腔注射麻醉大鼠，麻妥后將大鼠固定于臺(tái)上，腹部正中行縱切口，逐層開腹，鈍性分離周圍組織，找到子宮，用眼科剪分離子宮，下自宮頸口，上自子宮末端，離斷子宮，置于天平上進(jìn)行稱重，稱重后將子宮組織置于-80℃冰箱里保存以備制備組織勻漿。

2.3 子宮勻漿中NO含量及NOS活力的檢測(cè)方法

取出子宮組織，梯度溫度解凍，稱取組織塊0.1 g～0.2 g在冰生理鹽水中漂洗除去多余血液及雜質(zhì)，用濾紙拭干組織，稱重，然后放入5 mL的EP管內(nèi)。量取0.9%生理鹽水，按組織質(zhì)量與生理鹽水體積m：v比為1：9的比例加入生理鹽水，然后剪碎組織，用勻漿機(jī)研磨，制成10%組織勻漿。將制備好的組織勻漿用離心機(jī)以3500 r/min轉(zhuǎn)速離心10分鐘，然后留取上清液以備檢測(cè)。按硝酸酶還原法檢測(cè)上清液中NO含量及NOS活力，按照指示盒說(shuō)明進(jìn)行操作。