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      基于特征圖譜的金銀花與山銀花(灰氈毛忍冬)質(zhì)量表征比較研究

      2020-06-08 06:39:56黃玉娟舒一崧孔靜李思潼范圓圓孫仁弟黃廣偉高園園劉路路陳思玉李文靜郭小趁姜艷艷石任兵
      環(huán)球中醫(yī)藥 2020年4期
      關鍵詞:草苷銀花木犀

      黃玉娟 舒一崧 孔靜 李思潼 范圓圓 孫仁弟 黃廣偉 高園園 劉路路 陳思玉 李文靜 郭小趁 姜艷艷 石任兵

      金銀花為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花,山銀花為忍冬科植物灰氈毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.、紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.、華南忍冬LoniceraconfusaDC.或黃褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsu et S. C. Cheng的干燥花蕾或初開的花[1]?!吨腥A人民共和國藥典》2015年版記載的山銀花與金銀花在性味歸經(jīng)、功能主治與用法用量等方面皆一致,二者均具有清熱解毒、疏風散熱的功效,均可用于癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發(fā)熱[1]。在質(zhì)量標準中,《中華人民共和國藥典》2015年版以含綠原酸(酚酸類)不得少于1.5%和木犀草苷(黃酮類)不得少于0.05%作為金銀花的質(zhì)量控制指標,以含綠原酸不得少于2.0%及灰氈毛忍冬皂苷乙(三萜類)和川續(xù)斷皂苷乙(三萜類)的總量不得少于5.0%作為山銀花的質(zhì)量控制指標[1]。

      近年來有文獻報道,金銀花與山銀花的指紋圖譜相似度很高,二者的整體化學成分性質(zhì)及構成比存在相似性[2]??梢?,基于藥物體系導向,發(fā)掘其藥學架構化學成分組成的共性與特性為其藥物質(zhì)量精準評價的關鍵[3-6]。然而,尚未見二者藥學質(zhì)量表征的特性報道。因此,本研究基于特征圖譜質(zhì)量表征與中藥質(zhì)量評價模式[7-19],采用HPLC-DAD法建立金銀花和山銀花特征圖譜質(zhì)量表征方法,并對不同批號不同產(chǎn)地的金銀花和山銀花飲片進行質(zhì)量表征,對二者藥學質(zhì)量進行比較分析,以揭示二者藥學質(zhì)量表征共性與特性,為金銀花與山銀花藥材飲片的質(zhì)量評價和控制提供科學依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1 藥材

      15批金銀花飲片、10批山銀花飲片,具體信息見表1。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學中藥鑒定系劉春生教授鑒定金銀花均為為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或初開的花;山銀花均為忍冬科植物灰氈毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz的干燥花蕾或初開的花。飲片標本現(xiàn)存于北京中醫(yī)藥大學中藥學院中藥化學系。

      1.2 試劑與儀器

      1.2.1 試劑 綠原酸對照品(成都普菲德生物技術有限公司,批號:131201,純度≥98%);新綠原酸對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:P27A6F2713,純度≥98%);異綠原酸A對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:Y24N8Y49009,純度≥98%);異綠原酸B對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:P25J6F1793,純度≥98%);異綠原酸C對照品(方程生物科技有限公司,批號:120920,純度≥98%);隱綠原酸對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:Y12O8H45678,純度≥98%);咖啡酸對照品(方程生物科技有限公司,批號:121002,純度≥98%);獐芽菜苦苷對照品(武漢天植生物技術有限公司, 批號: CFN99818, 純度≥98%);斷氧化馬錢子苷對照品(武漢天植生物技術有限公司, 批號:CFS201803,純度≥98%);當藥苷對照品(武漢天植生物技術有限公司,批號:CFS201802,純度≥98%);木犀草苷對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:Y05D8H49919,純度≥98%);灰氈毛忍冬皂苷乙對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:C07F9Q54520,純度≥98%);川續(xù)斷皂苷乙對照品(上海源葉生物科技有限公司,批號:C21A6Q2577,純度≥98%);娃哈哈純凈水;乙腈、甲醇均為色譜純;其余試劑均為分析純(均購于北京化工廠);去離子水等。

      表1 金銀花與山銀花飲片信息表

      1.2.2 儀器 e2695型高效液相色譜儀,含Empower Pro軟件系統(tǒng)和2998型光電二極管矩陣檢測器(美國沃特世公司);SARTORIUS-BS124S型電子分析天平、BT124S型1/1萬電子分析天平和BT25S型1/10萬電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(上海振捷實驗設備);HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司);Buchi Rotavapor R-220旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琦有限公司);876-2A型真空干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司);ZNHW型智能恒溫電熱套(鄭州恒巖儀器有限公司);電子計時器;蒸發(fā)皿;漏斗;玻璃棒;圓底燒瓶等。

      1.3 溶液制備

      1.3.1 對照品溶液制備 分別精密稱取新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、隱綠原酸、綠原酸、木犀草苷、獐芽菜苦苷、當藥苷、斷氧化馬錢子苷、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續(xù)斷皂苷乙對照品,以50%甲醇溶解配制成混合對照品溶液(新綠原酸0.31 mg/mL、當藥苷0.48 mg/mL、異綠原酸A 5.08 mg/mL、異綠原酸B 0.30 mg/mL、異綠原酸C 0.90 mg/mL、隱綠原酸0.12 mg/mL、綠原酸4.83 mg/mL、斷氧化馬錢子苷2.73 mg/mL、獐芽菜苦苷2.89 mg/mL、木犀草苷0.19 mg/mL、灰氈毛忍冬皂苷乙5.42 mg/mL、川續(xù)斷皂苷乙3.58 mg/mL)。0.45μm微孔濾膜過,備用。

      1.3.2 供試品溶液制備 精確稱取金銀花和山銀花樣品粉末(過四號篩)0.1 g,置于具塞錐形瓶中。精密加入50%甲醇10 mL,稱定重量,超聲處理(功率300 W,頻率40 kHz)60 min。放冷再稱定重量,50%甲醇補足減失的重量,經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過,濾液作為供試品溶液。

      1.4 色譜條件

      色譜柱:Waters XBridge C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:水(C)-乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脫:0~20 min,10%→20%A;20~20.1 min,20%→22% A;20.1~40 min,22%→30%A;40~50 min,30%→35%A;50~60 min,35%→100%A。檢測波長:211 nm,流速:1.0 mL/min,柱溫:30 ℃,進樣量:20 μL。混合對照品溶液色譜圖,見圖1。

      1.5 方法學考察

      特征圖譜方法學考察和代表性成分含量測定方法學考察表明方法良好,符合實驗要求[1]。

      2 結(jié)果

      2.1 金銀花質(zhì)的表征及其關聯(lián)分析

      2.1.1 金銀花質(zhì)的表征 取J1~J15金銀花飲片,按“1.3.2”項方法制備供試品溶液,每批平行制備3份,按“1.4”項色譜條件進樣分析。根據(jù)15批金銀花的HPLC色譜圖建立金銀花特征圖譜,同時標記30個特征峰,結(jié)果見圖2。

      注:1新綠原酸;2獐芽菜苦苷;3當藥苷;4隱綠原酸;5綠原酸;6斷氧化馬錢子苷;7木犀草苷;8異綠原酸B;9異綠原酸A;10異綠原C;11川續(xù)斷皂苷乙;12灰氈毛忍冬皂苷乙圖1 混合對照品溶液色譜圖

      圖2 15批金銀花飲片特征圖譜

      2.1.2 金銀花質(zhì)的表征關聯(lián)分析 30個特征峰中共有環(huán)烯醚萜類16個、酚酸類8個、黃酮類4個、三萜皂苷類2個,各特征峰保留時間及相對保留時間見表2。通過與對照品比對,在特征峰中指認出11個代表性成分,環(huán)烯醚萜類3個、酚酸類6個、黃酮類1個、三萜皂苷類1個。其中,特征峰6為新綠原酸、特征峰7為獐芽菜苦苷、特征峰9為當藥苷、特征峰10為隱綠原酸、特征峰11為綠原酸、特征峰12為斷氧化馬錢子苷、特征峰22為木犀草苷、特征峰26為異綠原酸B、特征峰28為異綠原酸A、特征峰29為異綠原酸C、特征峰30為灰氈毛忍冬皂苷乙。

      表2 金銀花特征圖譜中特征峰關聯(lián)化學成分類型、保留時間及相對保留時間

      續(xù)表

      2.2 金銀花量的表征及其關聯(lián)分析

      2.2.1 基于代表性成分峰面積及含量的量的表征 分別精密稱取J1~J15金銀花樣品,按“1.3.2”項方法制備供試品溶液,每批樣品平行制備3份,按“1.4”項色譜條件進樣分析,測定圖譜中新綠原酸、獐芽菜苦苷、當藥苷、隱綠原酸、綠原酸、斷氧化馬錢子苷、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C和灰氈毛忍冬皂苷乙的峰面積,加和各類代表性成分峰面積得到總環(huán)烯醚萜、總酚酸峰面積,結(jié)果見表3。計算各代表性成分含量,加和各類代表性成分含量得到總環(huán)烯醚萜、總酚酸的含量,結(jié)果見表4。

      2.2.2 基于代表性成分含量表征的關聯(lián)分析 通過SPSS20.0 Pearson相關性分析,對代表性成分新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、總酚酸(以新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C表征)、獐芽菜苦苷、當藥苷、斷氧化馬錢子苷、總環(huán)烯醚萜(以獐芽菜苦苷、當藥苷、斷氧化馬錢子苷表征)、木犀草苷、灰氈毛忍冬皂苷乙和總成分(以11種代表性成分含量加和表征)的含量進行相關性分析。結(jié)果顯示,綠原酸和總成分的含量呈現(xiàn)顯著正相關,綠原酸相關系數(shù)為0.584,因此可用綠原酸作為基準成分表征金銀花中總成分。綠原酸和異綠原酸A與總酚酸的含量呈現(xiàn)顯著正相關,綠原酸的相關系數(shù)為0.937,異綠原酸A的相關系數(shù)為0.571,因此可用綠原酸作為指標性成分表征金銀花中酚酸類成分。獐芽菜苦苷與總環(huán)烯醚萜的含量呈現(xiàn)顯著正相關,獐芽菜苦苷相關系數(shù)為0.778,因此可用獐芽菜苦苷作為指標性成分表征金銀花的環(huán)烯醚萜類成分。代表性成分中黃酮類和三萜皂苷類成分分別為木犀草苷和灰氈毛忍冬皂苷乙,因此可用木犀草苷作為指標性成分表征金銀花的黃酮類成分,灰氈毛忍冬皂苷乙作為指標性成分表征金銀花的三萜皂苷類成分。

      2.2.3 基于代表性成分峰面積及含量的相對比值表征的關聯(lián)分析 以金銀花中的代表性成分綠原酸為基準成分,以15批金銀花綠原酸含量和峰面積的均值為基準值,計算各批次代表性成分的相對含量、峰面積及類型成分含量和峰面積的相對比值并作圖,得圖3、圖4。并進行質(zhì)量表征關聯(lián)分析。由圖3、圖4可知,15批金銀花類型成分相對含量的均值大小關系為:總環(huán)烯醚萜>總酚酸,其波動性為:總環(huán)烯醚萜(RSD:8.74%)>總酚酸(RSD:7.16%)。指標性成分相對含量的均值大小關系為:綠原酸>獐芽菜苦苷>灰氈毛忍冬皂苷乙>木犀草苷,其波動性為:獐芽菜苦苷(RSD:19.59%)>綠原酸(RSD:11.61%)>灰氈毛忍冬皂苷乙(RSD:9.05%)>木犀草苷(5.13倍)。代表性成分相對含量的均值大小關系為:綠原酸>斷氧化馬錢子苷>當藥苷>獐芽菜苦苷>灰氈毛忍冬皂苷乙>異綠原酸A>異綠原酸C>新綠原酸>異綠原酸B>隱綠原酸>木犀草苷,其中,金銀花特質(zhì)成分當藥苷相對含量、相對峰面積由高至低排序為J4、J12、J15、J14、J1、J8、J6、J9、J13、J10、J3、J11、J2、J7、J5?;诮疸y花代表性成分相對含量、相對峰面積進行考量,批號J4、J5、J6、J8、J9、J10較高。綜合代表性成分和特質(zhì)成分相對含量、相對峰面積進行考量,批號J4、J6、J8、J9較高。

      2.3 山銀花質(zhì)的表征及其關聯(lián)分析

      2.3.1 山銀花質(zhì)的表征 取S1~S10山銀花飲片,按“1.3.2”項下方法制備供試品溶液,每批平行制備3份,按“1.4”項下色譜條件進行進樣分析。根據(jù)10批山銀花的HPLC色譜圖,得到山銀花特征圖譜。結(jié)果見圖5。由圖5可知,其他9批山銀花飲片均含有與基準飲片(S3)相同的特征峰,共30個。

      表3 金銀花代表性成分峰面積和含量(n=3)

      注: /表示成分未檢出。

      圖3 15批金銀花代表性成分及類型成分含量相對比值

      圖4 15批金銀花代表性成分及類型成分峰面積相對比值圖

      圖5 10批山銀花飲片特征圖譜

      2.3.2 山銀花質(zhì)的表征關聯(lián)分析 30個特征峰中共有環(huán)烯醚萜類6個、酚酸類11個、黃酮類5個、三萜皂苷類8個,各特征峰保留時間及相對保留時間,結(jié)果見表4。通過與對照品比對,在特征峰中指認出11個代表性成分,環(huán)烯醚萜類3個、酚酸類6個、黃酮類1個、三萜皂苷類1個。其中,特征峰2為新綠原酸、特征峰3為獐芽菜苦苷、特征峰5為隱綠原酸、特征峰6為綠原酸、特征峰7為斷氧化馬錢子苷、特征峰16為木犀草苷、特征峰18為異綠原酸B、特征峰19為異綠原酸A、特征峰20為異綠原酸C、特征峰26為川續(xù)斷皂苷乙、特征峰27為灰氈毛忍冬皂苷乙。

      表4 山銀花特征圖譜中特征峰關聯(lián)化學成分類型、保留時間及相對保留時間

      2.4 山銀花量的表征及其關聯(lián)分析

      2.4.1 基于代表性成分峰面積及含量的量的表征 分別精密稱取S1~S10山銀花樣品,按“1.3.2”項下方法制備供試品溶液,每批樣品平行制備3份,按“1.4”項下色譜條件進行進樣分析,測定圖譜中新綠原酸、獐芽菜苦苷、隱綠原酸、綠原酸、斷氧化馬錢子苷、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙的峰面積,加和各類代表性成分峰面積得到總環(huán)烯醚萜、總酚酸和總?cè)圃碥辗迕娣e,結(jié)果見表5。

      2.4.2 基于代表性成分含量表征的關聯(lián)分析 通過SPSS20.0 Pearson相關性分析,對代表性成分新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、總酚酸(以新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C表征)、獐芽菜苦苷、斷氧化馬錢子苷、總環(huán)烯醚萜(以獐芽菜苦苷和斷氧化馬錢子苷表征)、川續(xù)斷皂苷乙、灰氈毛忍冬皂苷乙、總?cè)圃碥?以川續(xù)斷皂苷乙和灰氈毛忍冬皂苷乙表征)、木犀草苷和總成分(以11種代表性成分含量加和表征)的含量分別進行相關性分析。結(jié)果顯示,綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和總成分的含量呈現(xiàn)顯著正相關,相關系數(shù)分別為0.682、0.677,因此可用綠原酸作為基準成分表征山銀花總成分。異綠原酸A、綠原酸與總酚酸的含量呈現(xiàn)顯著正相關,異綠原酸A的相關系數(shù)為0.853,綠原酸的相關系數(shù)為0.631,因此可用異綠原酸A作為指標性成分來表征山銀花酚酸類成分。獐芽菜苦苷和斷氧化馬錢子苷均與總環(huán)烯醚萜的含量呈現(xiàn)顯著正相關,相關系數(shù)分別為0.725和0.824,因此可用斷氧化馬錢子苷作為指標性成分表征山銀花環(huán)烯醚萜類成分。代表性成分中黃酮類成分為木犀草苷,因此可用木犀草苷作為指標性成分表征山銀花黃酮類成分?;覛置潭碥找遗c總?cè)圃碥盏暮砍尸F(xiàn)顯著正相關,相關系數(shù)為0.965,因此可用灰氈毛忍冬皂苷乙作為指標性成分表征山銀花三萜皂苷類成分。

      2.4.3 基于代表性成分含量及峰面積相對比值表征的關聯(lián)分析 以山銀花中的代表性成分綠原酸為基準成分,以10批山銀花綠原酸含量和峰面積的均值為基準值,計算各批次代表性成分的相對含量、峰面積及類型成分含量和峰面積的相對比值,并作圖,結(jié)果見圖6、7,進行質(zhì)量表征關聯(lián)分析。由結(jié)果可知,10批山銀花類型成分相對含量的均值大小關系為:總酚酸>總?cè)圃碥?總環(huán)烯醚萜,其波動性為:總環(huán)烯醚萜(RSD:8.08%)>總?cè)圃碥?RSD:6.37%)>總酚酸(RSD:3.31%)。指標性成分相對含量的均值大小關系為:異綠原酸A>灰氈毛忍冬皂苷乙>斷氧化馬錢子苷>木犀草苷,其波動性為:斷氧化馬錢子苷(RSD:19.21%)>灰氈毛忍冬皂苷乙(RSD:11.09%)>木犀草苷(RSD:6.31%)>異綠原酸A(RSD:4.49%)。10批山銀花代表性成分含量均值由高至低依次為:異綠原酸A>灰氈毛忍冬皂苷乙>綠原酸>川續(xù)斷皂苷乙>獐芽菜苦苷>斷氧化馬錢子苷>異綠原酸C>新綠原酸>異綠原酸B>隱綠原酸>木犀草苷,其中,山銀花特質(zhì)成分川續(xù)斷皂苷乙相對含量、相對峰面積由高至低排序為S4、S1、S2、S9、S7、S6、S8、S5、S10、S3?;谏姐y花代表性成分相對含量、相對峰面積進行考量,批號S4、S5、S6、S9、S10較高。綜合代表性成分和特質(zhì)成分相對含量、相對峰面積進行考量,批號S4、S9較高。

      表5 山銀花代表性成分峰面積和含量(n=3)

      注:/表示成分未檢出。

      圖6 10批山銀花代表性成分及類型成分含量相對比值圖

      圖7 10批山銀花代表性成分及類型成分峰面積相對比值圖

      2.5 金銀花與山銀花的質(zhì)量表征比較

      2.5.1 基于共有特征峰峰面積比較 對金銀花與山銀花共有特征峰峰面積均值及其相對標準偏差進行分析,金銀花和山銀花具有15個共有峰,其中共有峰1、3、7、8、9、10為環(huán)烯醚萜類特征峰,共有峰2、5、6、12、13、14為酚酸類特征峰,共有峰4、11為黃酮類特征峰,共有峰15為三萜皂苷類特征峰。共有峰4峰面積在金銀花中波動范圍最大,共有峰8峰面積在山銀花中波動范圍最大。金銀花中共有峰7、9峰面積大于山銀花,山銀花中共有峰1、2、3、4、5、6、8、10、1、12、13、14、15峰面積大于金銀花。

      2.5.2 基于代表性成分含量比較 對代表性成分的含量均值及其相對標準偏差進行分析,金銀花和山銀花共有10個代表性成分。當藥苷為金銀花特質(zhì)成分,川續(xù)斷皂苷乙為山銀花特質(zhì)成分。金銀花中獐芽菜苦苷含量波動范圍最大,山銀花中斷氧化馬錢子苷波動范圍最大。金銀花中斷氧化馬錢子苷和木犀草苷的含量高于山銀花,山銀花中新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、獐芽菜苦苷、灰氈毛忍冬皂苷乙的含量高于金銀花。因此,金銀花與山銀花藥學質(zhì)量的共性為:二者特征圖譜中存在15個共有特征峰,共有峰中環(huán)烯醚萜類6個、酚酸類6個、黃酮類2個、三萜皂苷類1個。其中二者共有代表性成分有10個,分別為新綠原酸、獐芽菜苦苷、隱綠原酸、綠原酸、斷氧化馬錢子苷、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、灰氈毛忍冬皂苷乙,有5個共有代表性成分含量高低排序一致,即異綠原酸C>新綠原酸>異綠原酸B>隱綠原酸>木犀草苷。二者具有相同的的黃酮類和三萜皂苷類化合物的正相關代表性成分,分別為木犀草苷和灰氈毛忍冬皂苷乙。藥學質(zhì)量的特性為:金銀花具有15個特有峰,其中環(huán)烯醚萜類10個,酚酸類2個、黃酮類2個、三萜皂苷類1個。環(huán)烯醚萜類、酚酸類化合物的正相關代表性成分分別為獐芽菜苦苷、綠原酸,當藥苷為金銀花特質(zhì)成分。金銀花中共有代表性成分含量關系為:綠原酸>斷氧化馬錢子苷>異綠原酸A>獐芽菜苦苷>灰氈毛忍冬皂苷乙。其代表性成分含量關系為:綠原酸>獐芽菜苦苷>灰氈毛忍冬皂苷乙>木犀草苷。山銀花具有15個特有峰,其中環(huán)烯醚萜類10個,酚酸類2個、黃酮類2個、三萜皂苷類1個。環(huán)烯醚萜類、酚酸類化合物的正相關代表性成分分別為斷氧化馬錢子苷、異綠原酸A,川續(xù)斷皂苷乙為山銀花特質(zhì)成分。山銀花中共有代表性成分含量關系為:異綠原酸A>灰氈毛忍冬皂苷乙>綠原酸>獐芽菜苦苷>斷氧化馬錢子苷。代表性成分含量關系為:異綠原酸A>斷氧化馬錢子苷>灰氈毛忍冬皂苷乙>木犀草苷。

      3 討論

      在本研究考察提取方法時分別考察提取溶劑(甲醇、乙醇、50%甲醇水溶液、50%乙醇水溶液),提取方法(超聲、回流),提取倍量(8倍、10倍、12倍),提取時間(30min、60min、90min),以色譜峰個數(shù)和含量為指標,最終確定了金銀花和山銀花飲片處理方法為:50%甲醇10倍量超聲提取60min制備供試品溶液。

      在優(yōu)選色譜條件時使用DAD檢測器在190~400 nm全波長掃描光譜圖,通過比較色譜峰數(shù)量、基線平穩(wěn)程度、色譜峰面積、含量測定成分與相鄰色譜峰的分離度等因素,確定211 nm為最佳測定波長;分別考察以乙腈作為有機相,0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.6%磷酸水溶液作為水相,不同組合之后得到的色譜圖,以分離度和分析時間為指標,最后確定以乙腈~0.4%磷酸水溶液梯度洗脫最合適。在自然藥學觀的理論指導下[4-6],本研究使用HPLC-DAD技術,對金銀花與山銀花藥物體系之藥學架構模式進行表征,建立了特征圖譜質(zhì)量表征關聯(lián)分析方法,同時建立了對金銀花和山銀花中共12個代表性成分的含量測定方法。結(jié)果表明所建立的金銀花和山銀花特征圖譜質(zhì)量表征方法可準確地表征金銀花與山銀花的藥學質(zhì)量,并通過質(zhì)量表征結(jié)果,分析了金銀花和山銀花的藥學質(zhì)與量的共性和特性,為金銀花和山銀花的質(zhì)量評價與控制提供了新方法,也為二者在臨床上的合理利用提供了科學依據(jù)。

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