劉丹花 高青

【摘要】目的 為更好地測定蘭索拉唑制劑中主藥及有關(guān)物質(zhì)含量，可采用RP-HPLC法。方法 ShimpackC18（5μm，250 mm×4.6 mm）為色譜柱、甲醇-水-三乙胺-磷酸為流動相、UV 284 nm為檢測波長、1 mL·min- 1流速。結(jié)果 在16～320 μg·mL- 1（r= 0.9999）內(nèi)蘭索拉唑所取得線性關(guān)系較為良好;蘭索拉唑制劑（注射劑）與蘭索拉唑腸溶片藥物的平均回收率與RSD指標(biāo)參數(shù)分別為100.0%與1.08%、99.71%與1.03%。結(jié)論 RP-HPLC法的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在操作簡單、快速、準(zhǔn)確、具有良好重現(xiàn)性，在注射用蘭索拉唑和腸溶片中有關(guān)物質(zhì)與主藥含量的測定與分離中具有很高的應(yīng)用價值，值得進(jìn)行大力推廣與應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】RP-HPLC測定;蘭索拉唑制劑;主藥;有關(guān)物質(zhì);含量

【中圖分類號】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.5..02

蘭索拉唑是第二個質(zhì)子泵抑制類抗?jié)兯幬铮?992年正式投放于法國市場，國內(nèi)劑型主要有兩種，即膠囊劑、片劑，規(guī)格同樣有兩種即15、30 mg，注射用已經(jīng)獲得FDA批準(zhǔn)，但是國內(nèi)市場上尚未進(jìn)行銷售[1]。為確保國內(nèi)臨床用藥的需求得到充分滿足，現(xiàn)對注射用與蘭索拉唑腸溶片進(jìn)行了研究，為更好地控制其治療可使用蘭索拉唑含量測定高效液相色譜法，這種是一種操作簡單、準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好的方法，能夠更好地分離、測定相關(guān)檢測對象物質(zhì)組成、主藥的具體含量值。

1 儀器和試藥

儀器：本次試驗(yàn)使用的設(shè)備包括高效液相色譜儀、紫外檢測器及工作站。

試藥：準(zhǔn)備蘭索拉唑?qū)φ掌放c該藥物的注射劑、口服腸溶片，準(zhǔn)備的甲醇包括色譜醇、分析醇。

2 方法與結(jié)果

2.1? 色譜條件和行為

（1）色譜柱：Shim-packC18;（2）流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸，1.0 ml/min-1;（3）檢測波長：284 nm;（4）進(jìn)樣量20 uL。理論塔板數(shù)應(yīng)大于1500，具體計算時需要嚴(yán)格按照蘭索拉唑峰。

2.2? 制備對照品、供試品溶液

（1）在棕色量瓶50ml放置精密稱取的40 mg對照品，溶解時可以加入甲醇，稀釋至刻度，充分搖勻后備用[2]。

（2）取5瓶注射用蘭索拉唑、10片去腸溶衣的蘭索拉唑腸溶片，將內(nèi)容物傾出以后研細(xì)，進(jìn)行準(zhǔn)確的稱量，在25 mL棕色量瓶中放置，溶解時加入流動相并稀釋到刻度，充分搖勻后取精密量2 mL，同樣在25 mL棕色量瓶中放置，組委供試品1、2溶液備用;另外，關(guān)于不含主藥空白輔料的制備可分別根據(jù)注射用與腸溶片處方比例、制備工藝進(jìn)行制備，關(guān)于空白供試品1、2溶液的制作可嚴(yán)格按照“供試品”項(xiàng)下方法。

2.3? 考察線性關(guān)系

對照品溶液分別精密程度0.5 mL、2.0 mL、、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、10.0 mL，在25 mL棕色量瓶中分別放置，稀釋到刻度，搖勻后便可得到相應(yīng)系列溶度;然后分別注入液相色譜儀20 uL，以此將色譜圖詳細(xì)記錄下來，關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線地繪制分別取濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)。經(jīng)結(jié)果可知，濃度與色譜峰面積在16～320 ug·mL-1內(nèi)的線性關(guān)系滿足相關(guān)要求

2.4? 精密度試驗(yàn)

從蘭索拉唑?qū)φ掌分?，取出一部分溶液進(jìn)行進(jìn)樣處理（重復(fù)），溶液取出量控制為20 uL，之后進(jìn)行峰面積積分制測定時，要求嚴(yán)格根據(jù)上述色譜條件，精密度較好的條件為RSD=0.90%（n=6）[3]。

2.5? 重復(fù)性試驗(yàn)

在同一批注射用、腸溶片中進(jìn)行精密的稱取，關(guān)于溶液的制備需要嚴(yán)格按照供試品1、2方法，按照對照品同樣的方法進(jìn)行操作，20 uL進(jìn)樣，認(rèn)真記錄色譜圖，其含量的計算需采用外標(biāo)法，注射用藥物、口服用腸溶片兩種藥物的RSD分別為0.83%、0.90%，結(jié)合該結(jié)果說明該試驗(yàn)效果好。

2.6? 輔料干擾試驗(yàn)

待試驗(yàn)條件最終確定以后，各取20 uL空白供試品1、2溶液，為記錄色譜圖可將液相色譜儀注入。研究發(fā)現(xiàn)，對于蘭索拉唑峰輔料不會產(chǎn)生干擾作用，主峰和雜之峰之間具有良好的分離度。

2.7? 最低檢測限

試驗(yàn)條件確定后，在測定最低檢測限進(jìn)時可根據(jù)信噪比（S/N=3）進(jìn)行，結(jié)果可知：在50 ng·mL-1濃度、20ul進(jìn)樣條件下，其峰信號是噪音的3倍，即最低檢測限=1 ng。

2.8? 回收率試驗(yàn)

稱取10瓶處方量輔料，在研體缽中放置、搖勻后研細(xì)，然后取10瓶處方量的80%、100%、120%，加入，制作濃度不同的模擬樣品，即低、中、高，上述細(xì)粉取適量，放置在25 mL棕色量瓶中，通過加入適量甲醇并振蕩的方式來溶解主藥，稀釋到刻度后搖勻，作為供試品溶液;另外，在研缽中放置腸溶片10片處方量輔料，以下同注射用回收率試驗(yàn)制備。取上述兩種溶液進(jìn)樣各20 uL，關(guān)于項(xiàng)下條件的測定需嚴(yán)格根據(jù)含量進(jìn)行，對回收率進(jìn)行計算，以此注射用的平均回收率為100.0%、RSD為1.08%，腸溶片尾99.63%、1.03%[4]。

2.9? 測定樣品含量

對照溶液和供試品1、2溶液各取20 uL，注入液相色譜儀，將色譜圖記錄下來，關(guān)于其含量的計算可采用外標(biāo)法，結(jié)果如下表1。

2.10? 檢測相關(guān)物質(zhì)

精密稱取適量的注射用、腸溶片，在25 mL棕色量瓶中放置，稀釋溶解到刻度、溶解，當(dāng)作供應(yīng)品溶液;分別取1 mL，在100 mL棕色量瓶中放置參照量瓶刻度值進(jìn)行溶液稀釋處理，待該項(xiàng)工作結(jié)束后可輕輕搖勻量瓶，于對照溶液中取出適量溶液，取出量控制為20 uL，使用液相色譜儀對這些溶液作以處理，在設(shè)備靈敏度符合檢查要求的情況下進(jìn)行相關(guān)物質(zhì)檢查，要求主成分峰峰高參考滿量程標(biāo)準(zhǔn)，為其20%、不超過25%，然后各稱取20 uL在液相色譜儀中注入，將色譜圖到保留主成分峰的3倍記錄下來。如果色譜圖中存在雜質(zhì)峰，則需要對各雜質(zhì)峰面積進(jìn)行科學(xué)的量取，對有關(guān)物質(zhì)量進(jìn)行科學(xué)的計算，如上表1。

3 討 論

為有效分離蘭索拉唑和輔料，可通過HPLC建立的方式，二者之間的分離度不得小于1.5，具有較高的色譜柱效[5]。本品與色譜峰面積具有良好線性關(guān)系的濃度范圍為16～320 ug·mL-1，經(jīng)含量測定所取得回收率較高，且重現(xiàn)性良好，輔料和有關(guān)物質(zhì)均不會對其產(chǎn)生干擾，在臨床上所具有的可靠性、準(zhǔn)確性與靈敏度較高，有助于提高相關(guān)制劑質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1] 李嬌娜，李? ?丹，趙春杰.RP-HPLC法測定人血漿中蘭索拉唑腸溶片血藥濃度[J].藥物分析雜志，2009，29（03）：395-398.

[2] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[3] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017 version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[4] 劉小均，羅軍波，李培海，等.RP-HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸多奈哌齊口腔崩解片中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國藥房，2015，26（12）：1702-1706.

[5] 余永華，馬敏康，楊仲杰，等.加校正因子的主成分自身對照法測定培哚普利片中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2017，34（10）：1427-1431.