白細(xì)胞介素-26在乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭患者中表達(dá)及臨床意義

汪 靜，王 琴，楊 凱，張 浩，黃程榮，謝 然，管世鶴

慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是一種嚴(yán)重的急性肝功能失代償，其特征是肝細(xì)胞過度免疫反應(yīng)引起的大量肝細(xì)胞死亡，導(dǎo)致膽紅素升高和凝血功能紊亂，伴有感染、肝性腦病、肝腎綜合征和上消化道出血等并發(fā)癥。在我國(guó)引起肝衰竭的主要病因是肝炎病毒，尤其是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)，其次是藥物和肝毒性物質(zhì)(如乙醇、化學(xué)制劑等)[1]，是肝臟疾病中死亡的主要原因之一，其特點(diǎn)是進(jìn)展快速，治療困難，死亡率高[2]。

白細(xì)胞介素-26(IL-26)是一種含有171個(gè)氨基酸的蛋白，屬于IL-10家族的細(xì)胞因子[3]。它主要來源于T細(xì)胞，尤其是Th17細(xì)胞[4]。Th17細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞的促炎癥細(xì)胞亞群，它可產(chǎn)生幾種促炎細(xì)胞因子如IL-17，IL-22和TNF-α激活先天免疫細(xì)胞的抗菌活性，驅(qū)動(dòng)致病性免疫反應(yīng)[5]。研究[6]表明，慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)患者中Th17細(xì)胞表達(dá)水平隨著CHB的病情進(jìn)展而逐步升高。且乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-associated acute-on-chronic liver failure，HBV-ACLF)患者Th17細(xì)胞表達(dá)明顯高于肝衰竭前患者[7]，IL-26為宿主防御的潛在參與者，是慢性炎癥的致病因素[8]。也有研究[9]發(fā)現(xiàn)IL-26高水平的肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率比較高，生存期比較低。然而IL-26在HBV-ACLF中的作用從未被研究過。因此血清中IL-26水平可能在HBV-ACLF中發(fā)生改變，成為HBV-ACLF的一個(gè)有用的生物標(biāo)志物。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源選取2018年1月～2019年4月，在安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院確診為HBV-ACLE的患者53例，男45例，女8例，年齡25～86(47.36±13.04)歲；CHB患者53例，男41例，女12例，年齡25～61(37.58±9.64)歲；健康對(duì)照18例，男13例，女5例，年齡18～68(48.83±13.96)歲為研究對(duì)象。HBV感染被定義為至少6個(gè)月可檢測(cè)到的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBV DNA。HBV-ACLF定義為在HBV感染慢性肝病基礎(chǔ)上,患者黃疸迅速加深[血清總膽紅素(total bilirubin,TBIL)≥10×正常值上限或每日上升≥17.1 μmol/L]，凝血酶原活性(prothrombin activity,PTA)≤40%或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率(international normalized ratio,INR)≥1.5,并伴有腹水和(或)腦病性黃疸[2]。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：與其他肝炎病毒和/或人類免疫缺陷病毒共感染的患者，藥物性肝炎和酒精性肝病患者，甲狀腺功能亢進(jìn)患者，妊娠患者和肝細(xì)胞癌患者。

表1 不同分組之間檢測(cè)指標(biāo)分析結(jié)果

P1：HBV-ACLF患者與健康對(duì)照相比較；P2：HBV-ACLF患者與CHB患者相比較；P3：CHB患者與健康對(duì)照相比較

1.2 儀器與方法STA Evolution型自動(dòng)血凝分析儀以及原裝配套試劑(法國(guó)Stago公司)檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(prothrombin time，PT)，活化部分凝血活酶時(shí)間(activated partial thromboplastin time，APTT)，INR，PTA。血清白蛋白(albumin，ALB)，血清鈉(Na+)，血清肌酐(creatinine，CREA)，TBIL，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)，血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)檢測(cè)使用貝克曼AU-5800全自動(dòng)生化分析儀，試劑為貝克曼原裝配套試劑(美國(guó)Beckman Coulter公司)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)(white blood cell count，WBC)，中性粒細(xì)胞百分比(neutrophilic granulocyte percentage，NEU%)，血小板計(jì)數(shù)(platelet count，PLT)，血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)檢測(cè)使用SYSMEXE-2100及其配套的檢測(cè)試劑盒和質(zhì)控品(美國(guó)Applied Biosystems 公司)。血清IL-26檢測(cè)使用人IL-26酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(武漢華美生物公司)定量測(cè)定，樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線值在450 nm處用microplate reader(美國(guó)BioTek公司)測(cè)量。

2 結(jié)果

2.1 一般資料本研究共納入124例研究對(duì)象，53例 HBV-ACLF患者(HBV-ACLF組)，53例CHB患者(CHB組)和18例健康對(duì)照組(HC組)。 基線特征和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)見表1。ACLF患者的TBIL、ALT、AST、CREA、PT、INR、APTT、WBC、NEU%、PDW高于CHB和健康對(duì)照，而PTA、PLT和ALB水平則低于CHB和健康對(duì)照者。

2.2 HBV-ACLF患者不同分組IL-26水平比較根據(jù)檢測(cè)結(jié)果顯示HBV-ACLF患者的IL-26水平(1 250.88±542.55) pg/ml明顯高于CHB和健康對(duì)照患者(695.54±528.27) pg/ml和(126.28±42.82) pg/ml，P<0.0001。見圖1A。根據(jù)臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度，對(duì)納入研究的53例HBV-ACLF患者分為早期、中期和晚期3組，分期標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)肝衰竭與人工肝學(xué)組《肝衰竭防治指南》(2018年版)結(jié)果顯示隨著病情程度加重，IL-26表達(dá)水平逐漸升高。見圖1B。

2.3 HBV-ACLF患者IL-26水平與其他相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析對(duì)HBV-ACLF患者的IL-26水平與其他指標(biāo)結(jié)果進(jìn)行Pearson和Spearman相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)IL-26水平與CREA(rs=0.309，P=0.027)，APTT(rs=0.375，P=0.006)正相關(guān)，此外，還發(fā)現(xiàn)IL-26與MELD(r=0.371，P=0.007)和MELD-Na評(píng)分(r=0.305，P=0.028)之間也是顯著正相關(guān)，見圖2。

圖1 不同分組IL-26表達(dá)水平

A：與HC組和CHB組比較：****P<0.000 1；B：HBV-ACLF患者不同分期IL-26表達(dá)水平

2.4 HBV-ACLF預(yù)后相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素在單因素和多因素Logistic回歸分析中發(fā)現(xiàn)，單因素分析HBV-ACLF患者預(yù)后中，TBIL(P=0.003)、INR(P=0.011)、CREA(P=0.011)、APTT(P=0.006)、PT(P=0.011)、IL-26(P=0.000)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；多因素分析中，TBIL(P=0.036)和IL-26(P=0.012)是HBV-ACLF患者90 d死亡率獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。見表2。

2.5 IL-26對(duì)HBV-ACLF預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值通過繪制IL-26、MELD評(píng)分、MELD聯(lián)合IL-26模型的ROC曲線 ，見圖3 , 結(jié)果顯示：MELD聯(lián)合IL-26模型(AUC：0.933，95%CI：0.829～0.983)高于IL-26值(AUC：0.846，95%CI：0.720～0.930)、MELD評(píng)分(AUC：0.851，95%CI：0.727～0.934)的曲線下面積。MELD聯(lián)合IL-26模型[AUC：(0.933±0.033)]與MELD評(píng)分[AUC：(0.851±0.051)]相比Z=2.275，P<0.05，說明MELD聯(lián)合IL-26模型對(duì)預(yù)測(cè)HBV-ACLF患者預(yù)后更具有意義。本研究中，通過ROC曲線分析得出IL-26的最佳臨界值為1 019.68 pg/ml。生存曲線顯示，與IL-26≤1 019.68 pg/ml比較，基線IL-26>1 019.68 pg/ml的HBV-ACLF患者90 d死亡率更高(P<0.000 1，見圖4)。

3 討論

ACLF是一種伴有多器官功能障礙的慢性肝病嚴(yán)重惡化的綜合征[1]，短期死亡率在28 d時(shí)可達(dá)到30%～50%，在90 d時(shí)達(dá)到50%～80%。除肝移植外，ACLF患者在晚期沒有有效的治療策略，然而，早期確定的ACLF患者在接受適當(dāng)?shù)闹委熀缶哂锌赡嫘訹10]。因此ACLF患者需及早被診斷，并為潛在的高風(fēng)險(xiǎn)患者給予及時(shí)治療，同時(shí)對(duì)這些患者進(jìn)行更密切的監(jiān)測(cè)和干預(yù)，以預(yù)防發(fā)展為死亡。

表2 HBV-ACLF預(yù)后相關(guān)因子分析

圖2 血清IL-26表達(dá)水平與各檢測(cè)指標(biāo)相關(guān)性分析

圖3 IL-26、MELD評(píng)分和MELD-IL-26模型的ROC曲線

過度全身性炎癥反應(yīng)是ACLF發(fā)生的關(guān)鍵。已有研究[11]發(fā)現(xiàn)，ACLF不良預(yù)后與加劇的全身炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。IL-26是一種新型的炎癥因子，IL-26參與多種慢性炎性疾病的致病機(jī)制，包括慢性丙型肝炎[12]以及膿毒血癥[13]等，本研究發(fā)現(xiàn)HBV-ACLF患者IL-26水平明顯高于CHB患者以及健康對(duì)照，且隨著病情程度的加重，其表達(dá)也是逐漸升高。在與其他指標(biāo)相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)血清IL-26水平與CREA(r=0.309，P=0.027)和APTT(rs=0.375，P=0.006)相關(guān)，這有可能是因?yàn)锳CLF患者腎損傷與全身炎癥相似，而有研究[14]表明IL-26可通過IL-10R2/IL-20R1異二聚體受體在上皮細(xì)胞上傳遞信號(hào)，導(dǎo)致IL-6、IL-1b、IL-8等促炎細(xì)胞因子的分泌，且肝臟是合成大部分凝血因子和抗凝因子的物質(zhì)，肝衰竭患者存在明顯的凝血功能障礙。同時(shí)IL-26也具有和抗菌肽AMP相似的抗菌作用[15]，由于ACLF患者中常發(fā)生細(xì)菌感染，這也可能導(dǎo)致HBV-ACLF患者IL-26的表達(dá)遠(yuǎn)高于CHB患者的原因。

圖4 按IL-26分層HBV-ACLF患者3個(gè)月生存概率曲線

在本研究中，Logistic多因素分析中發(fā)現(xiàn)TBIL(P=0.036)和IL-26(P=0.012)與HBV-ACLF短期預(yù)后相關(guān)，目前臨床上主要通過反映肝功能指標(biāo)組成的評(píng)分系統(tǒng)來判斷HBV-ACLF患者的預(yù)后, 常用的有MELD評(píng)分、MELD-Na評(píng)分，本研究也可看出IL-26與MELD、MELD-Na評(píng)分正相關(guān)(r=0.371，r=0.305)，且IL-26聯(lián)合MELD建立預(yù)后模型(AUC：0.933)相較于單個(gè)指標(biāo)更具有靈敏度和準(zhǔn)確度。血清IL-26水平的>1 019.68 pg/ml對(duì)預(yù)測(cè)HBV-ACLF患者90 d死亡率具有可靠的預(yù)后準(zhǔn)確性。

綜上所述，IL-26表達(dá)在HBV-ACLF患者中明顯升高且與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，對(duì)診斷HBV-ACLF及監(jiān)測(cè)其病情與療效具有重要臨床意義和應(yīng)用價(jià)值。