武文文　吳詩(shī)卉　劉春紅　包翠芬　閔連秋

中圖分類號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）11-1287-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.11.02

摘 要 目的：研究人參皂苷Rg1對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷（CIRI）模型大鼠的預(yù)防作用及機(jī)制。方法：將78只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、丁苯酞對(duì)照組（陽性對(duì)照，10 mL/kg）和人參皂苷Rg1低、中、高劑量組（10、20、40 mg/kg），每組13只。各給藥組大鼠腹腔注射相應(yīng)藥物，假手術(shù)組和模型組大鼠腹腔注射等體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)7 d。給藥結(jié)束后，除假手術(shù)組外，其余各組大鼠均采用右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞法復(fù)制局灶性CIRI模型。造模完成后，參照改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法測(cè)定大鼠腦梗死體積百分比，采用干濕重法測(cè)定大鼠腦含水量，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠血清中白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6含量，分別采用免疫組織化學(xué)法和Western blotting法測(cè)定大鼠腦組織中磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、磷酸化核因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表達(dá)情況。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能缺失評(píng)分、腦梗死體積百分比、腦含水量和血清中IL-1β、IL-6含量以及腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65陽性蛋白表達(dá)細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）;與模型組比較，各給藥組大鼠上述指標(biāo)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且人參皂苷Rg1的作用具有一定的劑量依賴性趨勢(shì);人參皂苷Rg1中、高劑量組與丁苯酞對(duì)照組比較，上述指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：人參皂苷Rg1對(duì)局灶性CIRI模型大鼠具有一定的預(yù)防作用。其機(jī)制可能與下調(diào)p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)，抑制炎癥因子IL-1β、IL-6的釋放有關(guān)。

關(guān)鍵詞 人參皂苷Rg1;磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶;磷酸化核因子-κB p65;腦缺血再灌注損傷;炎癥;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE：To study preventive effect and mechanism of ginsenoside Rg1 on focal cerebral ischemia-reperfusion injury （CIRI） model rats. METHODS：Totally 78 SD rats were randomly divided into sham operation group， model group， butylphthalide control group （positive control， 10 mL/kg）， ginsenoside Rg1 low-dose， medium-dose and high-dose groups （10， 20， 40 mg/kg）， with 13 rats in each group. Administration groups were give relevant medicine intraperitoneally， sham operation group and model group were given constant volume of normal saline intraperitoneally， once a day， for consecutive 7 d. After medication， except for the sham operation group， focal CIRI model was induced by middle cerebral artery occlusion （MCAO） method in other groups. After modeling， neurological deficit scoring was performed according to the modified neurological difict scoring standard;? TTC staining was used to detected the percentage of cerebral infarction of rats; the cerebral water content was measured by dry/wet weight method; serum contents of IL-1β and IL-6 were detected by ELISA; the protein expressions of p-p38 MAPK and p-NF-κB p65 in cerebral tissue were determined by immunohistochemistry and Western blotting assay. RESULTS： Compared with sham operation， neurological deficits score， percentage of cerebral infarction and cerebral water content， serum contents of IL-1β and IL-6， positive expression numbers of cells and protein expressions of p-p38 MAPK and p-NF-κB p65 in cerebral tissue were increased significantly in model group （P<0.05 or P<0.01）. Compared with model group， above index levels of administration groups were all decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）， and the effect of ginsenoside Rg1 had a dose-dependent trend; there was no significant difference of all above indexes between ginsenoside Rg1 middle-dose，high-dose groups and butylphthalide control group （P>0.05）. CONCLUSIONS： Ginsenoside Rg1 has a certain preventive effect on focal CIRI model rats， the mechanism of which may be associated with down-regulating the protein expression of p-p38 MAPK and p-NF-κB p65， inhibiting the release of inflammatory factors such as IL-1β and IL-6.

KEYWORDS? ?Ginsenoside Rg1; p-p38 MAPK; p-NF-κB p65; Cerebral ischemia-reperfusion injury; Inflammation; Rats

缺血性腦卒中具有高復(fù)發(fā)率、高致殘率和高致死率的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類健康。目前，對(duì)于該病的治療原則主要為溶解血栓、恢復(fù)血液供應(yīng)，但血液再通時(shí)經(jīng)常會(huì)導(dǎo)致腦缺血再灌注損傷（Cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）[1]。減輕再灌注損傷已成為缺血性腦血管疾病治療的重要環(huán)節(jié)。研究顯示，炎癥是CIRI的主要原因之一[2-3]。從抑制炎癥反應(yīng)方面探討藥物是否對(duì)CIRI有防治作用已成為目前研究的熱點(diǎn)。人參皂苷Rg1為傳統(tǒng)中藥人參的主要活性成分之一，以往研究證實(shí)，人參皂苷Rg1能夠改善缺血再灌注損傷癥狀，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與抗細(xì)胞凋亡、抗氧化作用有關(guān)[4-5]。目前，也有文獻(xiàn)證實(shí)，人參皂苷Rg1可通過抑制炎癥反應(yīng)發(fā)揮對(duì)中腦黑質(zhì)多馬胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用[6-7]。但是關(guān)于人參皂苷Rg1對(duì)CIRI中的炎癥反應(yīng)是否有抑制作用，目前還不甚清楚。p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）/核因子-κB（NF-κB）是目前較為經(jīng)典的炎癥通路，可以調(diào)控多種炎癥因子的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[8]。鑒于此，本研究擬通過研究人參皂苷Rg1對(duì)局灶性CIRI模型大鼠炎癥反應(yīng)的影響，并通過p38 MAPK/NF-κB通路探索其作用機(jī)制，為治療缺血性腦卒中疾病的新藥開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

DNM-9602G型酶標(biāo)分析儀（廣州滬瑞明儀器公司）;PowerPac 3000型電泳儀、Trans-BlotSDcell型半干轉(zhuǎn)印儀（美國(guó)Bio-Rad公司）;Vibra Cell Vcx105型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（美國(guó)Sonics公司）;CM1900型冰凍切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）;YZ20P6型手術(shù)顯微鏡（蘇州六六視覺科技股份有限公司）;Primo Start型熒光顯微鏡（德國(guó)Zeiss公司）;Matrx VIP 3000型動(dòng)物麻醉機(jī)（美國(guó)Midmark公司）。

1.2 藥品與試劑

人參皂苷Rg1對(duì)照品（吉林大學(xué)有機(jī)化學(xué)教研室，批號(hào)：201810，純度：>95%）;丁苯酞注射液（石藥集團(tuán)恩必普制藥有限公司，批號(hào)：618180813，規(guī)格：每100 mL中含丁苯酞25 mg、氯化鈉0.9 g）;兔抗磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）多克隆抗體、兔抗磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）多克隆抗體、兔抗磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（英國(guó)Abcam公司）;異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的免疫球蛋白G（IgG）二抗（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）;白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)試劑盒（美國(guó)R&D公司，批號(hào)：均為201901）;二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測(cè)定試劑盒（北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：93H001100）;增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光顯影劑（ECL，上海碧云天生物技術(shù)有限公司）;2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色劑（美國(guó)Sigma公司）;4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色劑（美國(guó)Genview公司）;其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 動(dòng)物

健康清潔級(jí)SD大鼠78只，雄性，體質(zhì)量（280±50） g，由錦州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（遼）2017-0003。飼養(yǎng)環(huán)境溫度為20～25 ℃、相對(duì)濕度為50%～60%，飲用水為無菌純凈水。本研究已通過錦州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核（批件編號(hào)：2018014） 。實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)動(dòng)物的處置符合科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的要求。

2 方法

2.1 分組、給藥與造模

將78只SD大鼠采用抽簽法隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、丁苯酞對(duì)照組（陽性對(duì)照，10 mL/kg）[9]和人參皂苷Rg1低、中、高劑量組（10、20、40 mg/kg）[10-11]，每組13只。各給藥組大鼠腹腔注射相應(yīng)藥物，假手術(shù)組和模型組大鼠腹腔注射等體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)7 d。給藥結(jié)束后，除假手術(shù)組外，其余各組大鼠均采用右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞法（MCAO）[12]復(fù)制局灶性CIRI模型：異氟烷氣體麻醉大鼠后，沿頸旁正中切口，分離頸部動(dòng)脈，分別找到頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），用動(dòng)脈夾夾閉ICA;在ECA剪一切口，插入線栓，沿著ICA走向在ICA內(nèi)緩慢推進(jìn)直至感覺有少許阻力為止（從ECA與ICA分叉處起始插入約22 mm，此時(shí)已插至大腦前動(dòng)脈端，阻斷了大腦中動(dòng)脈血流）;栓塞2 h后拔出線栓，再灌注24 h。假手術(shù)組大鼠不插入線栓，其他操作步驟相同。

2.2 大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分

造模結(jié)束并待大鼠蘇醒后，每組隨機(jī)取5只大鼠，參照改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[13]對(duì)其進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分越高則表明神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。

2.3 大鼠腦梗死情況檢測(cè)

采用TTC染色法檢測(cè)。每組隨機(jī)取4只大鼠，斷頭取腦組織，置于冰上腦模內(nèi)，沿冠狀切面以腦腹側(cè)視交叉為中點(diǎn)切第1片，連續(xù)切5片，每片厚約2 mm。將切片置于1%TTC染色液中，在37 ℃染色20 min左右，以10%福爾馬林固定后拍照，并采用Image J 1.36b軟件計(jì)算大鼠腦梗死體積占對(duì)側(cè)半球體積的百分比（即腦梗死體積百分比）。

2.4 大鼠腦含水量檢測(cè)

采用腦組織干濕重法[14]檢測(cè)。每組隨機(jī)取3只大鼠，斷頭取腦后稱定濕質(zhì)量，之后將腦組織在烘箱中（105 ℃）干燥72 h，再次稱定質(zhì)量。計(jì)算腦含水量[腦含水量（%）=（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量×100%]，以此反映腦水腫情況。

2.5 大鼠血清中IL-1β、IL-6含量檢測(cè)

采用ELISA法檢測(cè)。每組隨機(jī)取3只大鼠，10%水合氯醛麻醉后，將其于仰臥位行心臟取血（取血后放回用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)），血樣以1 500 r/min離心20～30 min，取上清液，于-20 ℃保存，備測(cè)。按照ELISA試劑盒說明書方法操作，檢測(cè)血清中IL-1β、IL-6含量。

2.6 大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)情況檢測(cè)

2.6.1 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè) 每組隨機(jī)取3只大鼠，10%水合氯醛麻醉后，通過心臟經(jīng)4%多聚甲醛-戊二醛混合液灌流固定，斷頭取腦組織，以蔗糖沉糖后行10 μm冰凍切片。切片采用牛血清白蛋白封閉1 h，滴加p-p38 MAPK（稀釋比例為1 ∶ 100）、p-NF-κB p65（稀釋比例為1 ∶ 200）一抗工作液，于4 ℃孵育過夜;次日取出，恢復(fù)至室溫后，以磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗3次，每次5 min;滴加二抗工作液（稀釋比例為1 ∶ 200），于37 ℃下孵育30 min，PBS漂洗3次，每次5 min;加入DAPI染色劑復(fù)染細(xì)胞核，在 37 ℃下孵育5 min后，PBS漂洗3次，每次5 min。以熒光淬滅劑封片，在熒光顯微鏡下觀察并拍照（目標(biāo)蛋白的陽性表達(dá)呈黃綠色熒光;細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，用以定位細(xì)胞位置）。每只大鼠選取5張切片，在高倍鏡（×400）下計(jì)數(shù)陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)，取平均值。

2.6.2 采用Western blotting法檢測(cè) 每組取剩余3只大鼠，10%水合氯醛麻醉，通過心臟經(jīng)生理鹽水灌流后斷頭取腦，于腦模上冠狀切取部分腦組織，加入RIPA裂解液，超聲粉碎，在4 ℃下以12 000 r/min離心25 min，取上清液，采用BCA法測(cè)定蛋白含量后，制成含蛋白2.5? ? ? ?g/mL的組織提取液。取20 ?L組織提取液行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠電泳，然后在300 mA、25 ℃條件下轉(zhuǎn)移80 min至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上;將膜置于含1%牛血清白蛋白封閉液中，搖床上振搖1.5 h進(jìn)行封閉;然后分別加入p-p38 MAPK（稀釋比例為1 ∶ 1 000）、p-NF-κB p65（稀釋比例為1 ∶ 2 000）和GAPDH（稀釋比例為1 ∶ 5 000）抗體，于4 ℃孵育過夜;以TBST清洗3次，加入相應(yīng)的二抗（稀釋比例均為1 ∶ 2 000），室溫下振搖1.5 h;再次用TBST清洗3次后，以ECL進(jìn)行發(fā)光顯色，采用Image J 1.36b軟件測(cè)定條帶吸光度。以GAPDH為內(nèi)參，根據(jù)目的蛋白條帶與內(nèi)參蛋白條帶吸光度的比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，當(dāng)方差齊性時(shí)組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，當(dāng)方差不齊時(shí)組間兩兩比較采用Tamhanes T2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分結(jié)果

與假手術(shù)組比較，模型組和各給藥組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與人參皂苷Rg1低劑量組比較，人參皂苷Rg1高劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分顯著降低（P<0.05）。與丁苯酞對(duì)照組比較，人參皂苷Rg1各劑量組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分結(jié)果見表1。

3.2 大鼠腦梗死體積百分比測(cè)定結(jié)果

除假手術(shù)組大鼠腦組織呈均勻紅色、無梗死灶外，其余各組大鼠均有深淺不同的白色梗死灶，其中以模型組最為明顯。與假手術(shù)組比較，模型組和各給藥組大鼠的腦梗死體積百分比均有不同程度的升高，且除人參皂苷Rg1高劑量組外的其余各組大鼠差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦梗死體積百分比均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;與人參皂苷Rg1低劑量組比較，人參皂苷Rg1高劑量組大鼠腦梗死體積百分比顯著降低（P<0.01）。與丁苯酞對(duì)照組比較，人參皂苷Rg1各劑量組大鼠腦梗死體積百分比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠腦組織TTC染色結(jié)果見圖1，腦梗死體積百分比測(cè)定結(jié)果見表1。

3.3 大鼠腦含水量測(cè)定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，模型組和各給藥組大鼠腦含水量均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦含水量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;人參皂苷Rg1不同劑量組間比較以及人參皂苷Rg1各劑量組與丁苯酞對(duì)照組比較，大鼠腦含水量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠腦含水量測(cè)定結(jié)果見表1。

3.4 血清中IL-1β、IL-6含量測(cè)定結(jié)果

與假手術(shù)組比較，除人參皂苷Rg1中、高劑量組大鼠血清中IL-6含量外，其余各組的IL-1β、IL-6含量均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠血清中IL-1β、IL-6含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。人參皂苷Rg1不同劑量組間比較以及人參皂苷Rg1各劑量組與丁苯酞對(duì)照組比較，大鼠血清中IL-1β含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但人參皂苷Rg1中、高劑量組和丁苯酞對(duì)照組大鼠血清中IL-6含量顯著低于人參皂苷Rg1低劑量組（P<0.05）。各組大鼠血清中IL-1β、IL-6含量測(cè)定結(jié)果見表2。

3.5 大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)情況測(cè)定結(jié)果

3.5.1 免疫組織化學(xué)法測(cè)定結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組和各給藥組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均顯著增加（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均顯著減少（P<0.05或P<0.01）。與人參皂苷Rg1低劑量組比較，人參皂苷Rg1中、高劑量組和丁苯酞對(duì)照組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均顯著減少（P<0.05或P<0.01），且人參皂苷Rg1中、高劑量組和丁苯酞對(duì)照組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)的免疫熒光染色顯微圖見圖2（圖中，“Merge”表示染色的疊加圖），陽性表達(dá)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果見表3。

3.5.2 Western blotting法測(cè)定結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型組和人參皂苷Rg1低劑量組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平以及人參皂苷Rg1中劑量組和丁苯酞對(duì)照組大鼠腦組織中p-p38 MAPK蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。人參皂苷Rg1不同劑量組間比較以及人參皂苷Rg1各劑量組與丁苯酞對(duì)照組比較，大鼠腦組織中p-p38 MAPK蛋白表達(dá)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但人參皂苷Rg1中、高劑量組和丁苯酞對(duì)照組大鼠腦組織中p-NF-κB p65蛋白表達(dá)水平均顯著低于人參皂苷Rg1低劑量組（P<0.05）。各組大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)電泳圖見圖3，蛋白表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果見表4。

4 討論

CIRI是由于血流再通所引起的級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致的對(duì)腦組織的二次損傷，其常常導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損、腦梗死和腦水腫等癥狀，嚴(yán)重者可引起偏癱、失語甚至死亡[15]。本研究結(jié)果顯示，CIRI后大鼠均出現(xiàn)了不同程度的神經(jīng)功能缺損、腦組織梗死和腦水腫癥狀，但是在給予不同劑量人參皂苷Rg1處理后，CIRI大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀和腦水腫程度均顯著減輕、腦梗死體積顯著縮小，且其作用與丁苯酞（丁苯酞為臨床常用藥，對(duì)急性腦缺血性腦卒中患者的神經(jīng)功能缺損有明顯改善作用[16]，故本文以其為陽性對(duì)照）相近，這提示人參皂苷Rg1能夠減輕缺血再灌注所造成的腦組織損傷，具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。

炎癥反應(yīng)在CIRI中扮演著重要角色，許多炎性細(xì)胞和炎性介質(zhì)均參與了炎癥反應(yīng)[17-18]。抑制炎癥反應(yīng)、減輕腦組織損傷，是腦卒中治療的重要手段之一[19-20]。IL由多種細(xì)胞產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)、體液免疫方面發(fā)揮著重要作用[21]。狄政莉等[22]發(fā)現(xiàn)，IL-1β和IL-6參與了腦缺血再灌注后炎癥損傷的病理過程。本研究結(jié)果顯示，CIRI后大鼠血清中IL-1β、IL-6含量顯著升高，而給予不同劑量人參皂苷Rg1處理可以顯著降低CIRI大鼠血清中 IL-1β、IL-6含量，且人參皂苷Rg1中、高劑量組和丁苯酞組間兩者含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。NF-κB廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，能與大量炎癥反應(yīng)基因的啟動(dòng)子結(jié)合，是一種重要的轉(zhuǎn)錄激活因子，其調(diào)控基因可以編碼細(xì)胞因子、免疫調(diào)節(jié)分子等，通過上述作用參與炎癥反應(yīng)等生物學(xué)進(jìn)程[23-24]。在腦缺血時(shí)，NF-κB被炎性因子、細(xì)胞因子、鈣超載等因素刺激而磷酸化，誘導(dǎo)細(xì)胞因子、黏附分子、炎性酶類的表達(dá)，形成炎癥反應(yīng)的惡性循環(huán)，導(dǎo)致腦組織水腫和神經(jīng)細(xì)胞的損傷[25-27]。而作為MAPK家族成員之一的p38 MAPK，在炎癥反應(yīng)及其調(diào)控中發(fā)揮了重要作用[28]：p38 MAPK受到刺激后被磷酸化，激活為特異性底物p-p38 MAPK，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控。p-p38 MAPK作為NF-κB的上游信號(hào)分子，可促使NF-κB的磷酸化，活化后的NF-κB分解為p50和p65，之后進(jìn)行核轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)炎癥基因的轉(zhuǎn)錄[29]。本研究結(jié)果顯示，CIRI后大鼠腦組織中p-p38 MAPK、p-NF-κB p65陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)顯著增加，其相應(yīng)蛋白表達(dá)水平也顯著升高;而經(jīng)人參皂苷Rg1處理后，大鼠腦組織中只有少量的陽性表達(dá)細(xì)胞，蛋白表達(dá)水平也顯著降低。

綜上所述，本研究證實(shí)了人參皂苷Rg1可通過下調(diào)p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白的表達(dá)，減輕腦梗死癥狀，從而發(fā)揮腦保護(hù)作用。然而，本研究還存有許多不足之處，如只選用單一時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行考察、未進(jìn)行時(shí)-效關(guān)系分析等。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，筆者將進(jìn)一步對(duì)此進(jìn)行完善。

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（收稿日期：2019-12-27 修回日期：2020-04-14）

（編輯：林 靜）