連總強(qiáng) 陳啟發(fā) 王燕 賽清云 肖偉 劉彥斌 田永華 俞兆曦 吳旭東

摘要：[目的]為解決蘭州鲇（Siluruslanzhouensis）產(chǎn)業(yè)發(fā)展中面臨的仔稚魚培育餌料制約問題，開展微囊飼料對(duì)蘭州鲇仔稚魚馴食轉(zhuǎn)化、生長發(fā)育和酶活性的影響研究。[方法]首先將馴養(yǎng)培育蘭州鲇稚魚分為微囊飼料組（WW）、微囊飼料+水絲蚓組（WL）及水絲蚓（Limnodrilus）組（LL）3個(gè)處理組，進(jìn)行為期30d的馴養(yǎng)培育稚魚試驗(yàn)，通過記錄稚魚死亡數(shù)量、測(cè)量體重、體長等生長指標(biāo)，探討微囊飼料對(duì)蘭州鲇稚魚存活、生長的影響;以此為基礎(chǔ)開展為期115d微囊飼料（ww）與肉糜（RR）2個(gè)處理組馴養(yǎng)蘭州鲇幼魚試驗(yàn)，通過測(cè)定試驗(yàn)幼魚體重、體長等生長指標(biāo)，以及消化系統(tǒng)不同組織中脂肪酶、淀粉酶及胃蛋白酶活性，探討微囊飼料對(duì)蘭州鲇幼魚生長、代謝的影響。[結(jié)果]（1）微囊飼料培育蘭州鲇稚魚，馴食轉(zhuǎn)化率不及水絲蚓，但成活率最高，達(dá)（94.3±0.9）%，且與其余兩組差異顯著（P<0.05），微囊飼料+水絲蚓組（WL）仔鲇體重增長最快（P<0.05）;水絲蚓組（LL）組仔鲇體重特定生長率（SGR）和絕對(duì)生長率（AGR）均顯著低于微囊飼料組（ww）組和微囊飼料+水絲蚓組（WL）組。（2）微囊飼料培育蘭州鲇幼魚，可顯著促進(jìn)生長，且組間差異顯著（P<0.05）;除中腸、后腸和胃組織中胃蛋白酶活性組間差異不顯著外，投喂微囊飼料組的其他組織中的脂肪酶、淀粉酶及胃蛋白酶活性均顯著高于投喂魚糜組的（P<0.05）。[結(jié)論]微囊飼料可促進(jìn)蘭州鲇稚幼魚生長發(fā)育，且規(guī)格較為整齊。因此，微囊飼料在蘭州鲇養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展中具有重要的應(yīng)用價(jià)值，進(jìn)一步研究并推廣將對(duì)蘭州鲇養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展發(fā)揮重要支撐作用。

關(guān)鍵詞：蘭州鲇，稚魚，幼魚，微囊飼料，生長

中圖分類號(hào)：S968文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-0384（2020）03-0254-06

0 引言

[研究意義]蘭州鲇（Silurus lanzhouensis Chen）俗稱黃河鯰，隸屬于鲇形目（Siluriformes）、鲇科（Siluridea）、鲇屬（Silurus），為黃河中上游特有的大型經(jīng)濟(jì)魚類，被評(píng)為“黃河水生生物名片”，肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美，素有“蘭州鲇魚活人參”之美稱，使之成為很有養(yǎng)殖前景的魚類。但近年來由于水利設(shè)施工程建設(shè)、過度捕撈及棲息地水域環(huán)境變化等因素，導(dǎo)致蘭州鲇種群數(shù)量急劇下降，被列入《中國物種紅色名錄》且評(píng)估等級(jí)為瀕危物種。（前人研究進(jìn)展）為保護(hù)黃河土著魚類資源，寧夏回族自治區(qū)水產(chǎn)研究所先后申請(qǐng)建立了蘭州鲇國家級(jí)水產(chǎn)種質(zhì)資源保護(hù)區(qū)，率先攻克了蘭州鲇野生馴養(yǎng)、人工繁育技術(shù)難題，形成年繁育大規(guī)格苗種500萬尾的能力。在分子遺傳學(xué)研究[461的基礎(chǔ)上，篩選建立了蘭州鲇F₁-F₃代優(yōu)良新品系。在飼料營養(yǎng)方面，僅見賽清云等有關(guān)蘭州鲇幼魚對(duì)飼料蛋白和能量的需要量的初步研究。肉食性魚類開口餌料一直是苗種規(guī)模化培育成敗的關(guān)鍵。隨著包衣加工技術(shù)發(fā)展，微囊飼料的研制與應(yīng)用成為目前國內(nèi)外肉食性魚類開口餌料研究領(lǐng)域的重點(diǎn)和熱點(diǎn)，主要集中在應(yīng)用飼料原料的微囊包被添加效果，以及包被微囊開口飼料對(duì)仔稚魚培育期馴化轉(zhuǎn)食效果、生長發(fā)育、繁殖性能、體成分組成、消化酶活性、腸道健康評(píng)價(jià)、基因表達(dá)差異等方面研究，以上報(bào)道為相關(guān)魚類早期培育營養(yǎng)需求研究和馴化轉(zhuǎn)食開口餌料的配置提供了重要技術(shù)支撐。但目前，蘭州鲇稚魚培育階段仍主要依賴于水絲蚓（Limnodrilus）等生物餌料，而生物餌料的供需時(shí)點(diǎn)不易同步、攜帶病原隱患、擠占資源、增加費(fèi)用等弊端，成為蘭州鲇家系選育及今后產(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖發(fā)展中苗種培育面臨的主要瓶頸。（本研究切入點(diǎn)）適用于蘭州鲇稚幼魚的微膠囊飼料開發(fā)及其飼喂效果研究是當(dāng)前蘭州鲇人工培育需要攻克的首要難題。（擬解決的關(guān)鍵問題）為檢驗(yàn)蘭州鲇專用微膠囊飼料馴養(yǎng)培育蘭州鲇稚幼魚的效果，探索蘭州鲇微膠囊飼料適宜的營養(yǎng)、理化參數(shù)，加快蘭州鲇稚幼魚培育的系列飼料配置與應(yīng)用，結(jié)合蘭州鲇分子標(biāo)記輔助家系選育，開展蘭州鲇專用微膠囊飼料飼喂、馴養(yǎng)培育仔稚、幼魚試驗(yàn)，以促進(jìn)蘭州鲇養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康綠色發(fā)展。

1材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)魚來自寧夏水產(chǎn)研究所科研實(shí)驗(yàn)示范基地采用家系選育技術(shù)篩選建立的蘭州鲇（Siluruslanzhouensis）F₂代品系，其中：2014年出膜后5d選擇20140806號(hào)家系開展仔稚魚微囊飼料馴養(yǎng)培育試驗(yàn)。試驗(yàn)初期家系平均體長為（o 646±0.063）cm.2017年出膜后28d選擇20170501號(hào)家系開展稚幼魚微囊飼料馴養(yǎng)培育，試驗(yàn)初期家系平均體長為（7.53±0.86）cm.

微囊配合飼料由福建省水產(chǎn)飼料研究會(huì)和福建省淡水水產(chǎn)研究所提供。飼料組成成分為：粗蛋白質(zhì)44.5%，粗脂肪為7.52%，水分11.8%，灰分18.3%;蛋氨酸（Met）1.16%，賴氨酸（Lys）3.92%。微囊飼料樣本容重約為670～650g·L^-1，用激光粒度分布儀在超聲震蕩條件下，測(cè)定其粒度，浸泡海水歷時(shí)120min，粒徑減小率12.5%。樣本粒徑分布累積的中位徑D₅₀為25.0731.6um.微囊飼料形貌見圖1，SEM圖像顯示顆粒外表囊壁聚束狀。天然餌料為水絲蚓（Limnodrilus），經(jīng)微流水暫養(yǎng)、漂洗、吐臟并經(jīng)5%食鹽消毒15min后投喂。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1稚魚馴養(yǎng)培育 2014年6月28日至8月1日，分別設(shè)置微囊飼料組（WW）、水絲蚓（Limnodrilus）組（LL）及微囊飼料混加水絲蚓組（WL，微囊飼料與線蟲按重量比1：1攪拌均勻輕輕粘成小團(tuán)狀）3個(gè)處理組，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，開展微囊飼料馴養(yǎng)培育仔稚魚效果研究。試驗(yàn)魚飼養(yǎng)在直徑120cm、水深30cm養(yǎng)殖試驗(yàn)生態(tài)水族缸，每箱放養(yǎng)仔魚200尾，控制水溫（28.0±1.1）℃，pH（8.3±0.4），NH₃-N（o.2±o.1）mgL·1，NO₂-N（0.02～0.001）mg·L^-1，DO（5.48±0.45）mg·L^-1。每天9：00、16：00各投喂1次，每次投喂量以2h內(nèi)吃完為宜，根據(jù)攝食狀況及時(shí)調(diào)整投喂量，記錄稚魚死亡情況，每3d清理1次殘餌糞便。試驗(yàn)期第15d投喂2h后根據(jù)魚體飽食情況觀察記錄未采食稚魚尾數(shù)，分別于試驗(yàn)期第15d、第30d測(cè)定稚魚體長、體重。

1.2.2幼魚培育2017年6月7日至10月2日，設(shè)置肉糜組（RR）和微囊飼料組（WW），開展為期115d微囊化飼料培育蘭州鲇幼魚效果研究，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)重復(fù)。微囊飼料加少量水捏為團(tuán)狀，肉糜來源于寧夏水產(chǎn)研究所科研基地自養(yǎng)的去皮、骨、內(nèi)臟后攪碎的鰱。試驗(yàn)魚飼養(yǎng)在150cm×150cm×150cm養(yǎng)殖網(wǎng)箱，選擇規(guī)格較為整齊的同一家系仔魚1200尾，隨機(jī)按每箱200尾分配至6個(gè)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱。每天9：00、16：00各投喂1次，每次投喂量以2h內(nèi)吃完為宜，根據(jù)攝食狀況及時(shí)調(diào)整投喂量。試驗(yàn)期末每個(gè)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱隨機(jī)測(cè)量10尾試驗(yàn)魚生長指標(biāo)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱隨機(jī)采集3尾魚進(jìn)行酶活性測(cè)定。

1.2.3幼魚消化酶活性測(cè)定測(cè)定前取樣分離后，稱取蘭州鲇幼魚前腸、中腸、后腸、胰臟、胃組織各1g，加入9mL的生理鹽水，冰水浴條件下進(jìn)行勻漿，制成10%左右的勻漿液后，通過3500～4000r·min^-1、4℃下離心10min，取上清液進(jìn)行測(cè)定。脂肪酶、淀粉酶及胃蛋白酶活性分別采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)過程、計(jì)算方法按照試劑盒使用說明進(jìn)行。

1.3指標(biāo)計(jì)算方法

蘭州鲇稚魚馴化轉(zhuǎn)食情況用馴化轉(zhuǎn)食率（A，%）、成活率（s，%）、肥滿度（CF，%）表示，稚魚群體整齊度用體長變異系數(shù)（CV，%）表示，生長效應(yīng)指標(biāo)用稚魚體重特定生長率（SGR，%·d^-1）和絕對(duì)生長率（AGR，g·d^-1）表示，各指標(biāo)的計(jì)算公式如下：

式中：N_i為馴化轉(zhuǎn)食15d時(shí)飽食魚尾數(shù);N_a為馴化轉(zhuǎn)食15d時(shí)全部測(cè)試魚尾數(shù);N_o為初始魚尾數(shù);N_t為終末魚尾數(shù);W_b為每尾魚終末體重，g;L為每尾魚終末體長，cm;S為標(biāo)準(zhǔn)差;X為平均值;Wo為試驗(yàn)魚初始均體質(zhì)量，g;我_{t]為試驗(yàn)魚終末均體質(zhì)量，g;t為飼養(yǎng)天數(shù)，d.}

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，稚魚馴化轉(zhuǎn)食數(shù)據(jù)采用Duncan多重比較進(jìn)行顯著性分析（P<0.05）;微囊飼料培育幼魚數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1稚魚馴化轉(zhuǎn)食

歷時(shí)30d試驗(yàn)，各處理組蘭州鲇仔稚魚馴食轉(zhuǎn)化情況見表1.第15天馴食轉(zhuǎn)化率以LL試驗(yàn)組最高，且與其余兩組差異顯著（P<0.05）。試驗(yàn)期末稚魚成活率以WW試驗(yàn)組最高，達(dá)到94.3%，與其余兩組間差異顯著（P<0.05）。雖然各處理組間肥滿度差異不顯著（P>0.05），但以WW組為最高（0.87g·cm^-3）。試驗(yàn)期末LL、WL及WW試驗(yàn)組稚魚體長變異系數(shù)分別為10.02%、8.43%和5.67%。以上結(jié)果表明微囊飼料組培育的稚魚成活率最高且規(guī)格最均勻。

2.2稚魚生長發(fā)育

經(jīng)過30d飼養(yǎng)，不同處理對(duì)蘭州鲇稚魚不同時(shí)段生長的影響見圖2、3.在3種餌料馴化培育過程，第15d各試驗(yàn)組稚魚體長組間差異不顯著（戶>0.05），至第30d時(shí)WL試驗(yàn)組體長顯著高于其余2組，表明不同的餌料配比對(duì)稚魚前期生長有一定的影響。圖3顯示，各試驗(yàn)組間稚魚體重增長也均存在一定差異，其中第30d的WL試驗(yàn)組較ww試驗(yàn)組、LL試驗(yàn)組分別高出0.12、0.48g，且LL試驗(yàn)組顯著低于WL、WW試驗(yàn)組（P<0.05）。試驗(yàn)期LL試驗(yàn)組稚魚體重特定生長率（SGR）和絕對(duì)生長率（AGR）均顯著低于WL、ww試驗(yàn)組（表2）;同時(shí)ww組與WL組均體重差值縮減為0.12g，表明微囊飼料在試驗(yàn)后期對(duì)稚魚體重的增長效果顯著。

2.3 幼魚生長發(fā)育

通過在池塘養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱開展為期115d微囊飼料與魚糜培育蘭州鲇幼魚生長差異對(duì)比研究，結(jié)果如表3所示，投喂微囊飼料組的試驗(yàn)魚生長較魚糜組的快，其中投喂微囊飼料組的體重較魚糜組的增加了0.82倍（P<0.05）、全長增加了0.37倍（P<0.05）、體高增加了0.30倍（P<0.05）。

2.4幼魚消化酶活性

通過為期115d肉糜與微囊飼料培育同一家系，進(jìn)行每個(gè)試驗(yàn)組蘭州鲇消化系統(tǒng)酶活性測(cè)定，結(jié)果表明（表4），投喂微囊飼料組蘭州鲇胰臟、胃、前腸、中腸和后腸組織中的脂肪酶與淀粉酶活性均顯著高于魚糜組的（P<0.05）。不同處理組胃蛋白酶活性除微囊飼料組的前腸、胰臟中的顯著高于魚糜組的外（P<0.05），其余組織中不同餌料組的組間差異不顯著（P>0.05）。

3 討論與結(jié)論

在蘭州鲇仔稚幼魚營養(yǎng)需求研究方面，目前相關(guān)研究報(bào)道仍較為有限。賽清云等用均勻試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法中U₆（6⁴）表進(jìn)行4因素6水平試驗(yàn)，研究了蘭州鲇幼魚飼料粗蛋白質(zhì)適宜需要量，得出蘭州鲇幼魚對(duì)飼料中粗蛋白質(zhì)的需要量為41.87%～42.96%，對(duì)蛋氨酸、賴氨酸的需要量分別為1.12%～1.25%和2.8%。本次試驗(yàn)采用的微囊飼料含粗蛋白質(zhì)為44.5%，賴氨酸（Lys）3.92%，蛋氨酸（Met）1.16%，略高于賽清云等研究得出適宜需要量的數(shù)值，微囊飼料的蛋氨酸和賴氨酸占蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)模式分別是Met/pro=2.606，Lys/pro=8.808，這與姜巨峰等報(bào)道鲇（Silurus asotus）對(duì)10種必需氨基酸的需要量模式比值（Met/pro=2.20～2.71;Lys/pro=7.77～9.91）較為相近，較好地滿足了肉食性蘭州鲇稚魚階段的營養(yǎng)需求。這些主要營養(yǎng)素，搭配微囊飼料的粒徑、浸水2h的粒徑減小率（12.5%）和容重等表征參數(shù)，發(fā)現(xiàn)微囊飼料組（WW組）稚魚成活率最高，仔稚群體CV值最小、規(guī)格均勻，第30d稚鲇體重與微囊飼料+水絲蚓組（WL組）的差距縮減、呈現(xiàn)出生長后勁等3種喂養(yǎng)效果的主因素。同時(shí)，研究表明，微囊飼料+水絲蚓組（WL組）稚魚體重特定生長率（SGR）和絕對(duì)生長率（AGR）均顯著高于微囊飼料組和水絲蚓組，推測(cè)由于微囊飼料+/k絲蚓組（WL組）獲得微囊飼料的主要營養(yǎng)素互補(bǔ)增強(qiáng)，更好地滿足了肉食性蘭州鲇稚魚階段的營養(yǎng)需求的結(jié)果。據(jù)此，微囊飼料的營養(yǎng)指標(biāo)和理化參數(shù)可為蘭州鲇仔稚幼魚培育所需飼料系列配置提供參考。

在肉食性魚類開口餌料篩選方面，仔魚開口餌料仍是目前制約大多數(shù)肉食性魚類產(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖的瓶頸。由于天然生物活餌能提高苗種成活率，目前肉食性仔稚魚開口餌料仍以鹵蟲、枝角類等天然生物活餌為主，但餌料培育量、質(zhì)量、供需同步及是否帶病難以保證，且培育需占用大量的土地、水等資源，培育、捕撈等耗費(fèi)大量的人力物力，難以滿足規(guī)模化苗種生產(chǎn)需求。以人工配合飼料為主用于肉食性仔稚魚人工規(guī)模化馴養(yǎng)培育，由于營養(yǎng)需求、消化機(jī)能及攝食習(xí)性等多種因素影響，仔稚魚成活率、生長速度等普遍低于天然生物活餌，且差異較為顯著。本研究試驗(yàn)期末微囊飼料組的成活率最高，且隨著培育期的延長，投喂微囊飼料試驗(yàn)組均逐漸表現(xiàn)出促進(jìn)生長的優(yōu)勢(shì)，尤其通過微囊飼料在幼魚培育階段的驗(yàn)證，其生長速度較肉糜組提高了0.3～0.8倍，酶活性大部分表現(xiàn)出不同程度地提高。由此推測(cè)，隨著蘭州鲇稚幼魚的生長發(fā)育，消化系統(tǒng)進(jìn)一步發(fā)育完善，內(nèi)消化酶分泌與代謝體系逐漸建立，最終可完全適應(yīng)攝食微囊飼料。因此，蘭州鲇仔稚幼魚消化酶系的研究將是進(jìn)一步提升微囊飼料效能的關(guān)鍵。

通過本研究對(duì)蘭州鲇稚魚馴食轉(zhuǎn)化開口餌料的對(duì)比篩選，蘭州鲇微膠囊飼料組的馴食轉(zhuǎn)化率均低于水絲蚓組和微囊料混加水絲蚓組，表明蘭州鲇仔魚對(duì)活餌料具有天然嗜食性。趙紅雪等（2010）研究表明，水溫（22.5±1.2）℃條件下，蘭州鲇仔魚3日齡開口攝食，混合營養(yǎng)期持續(xù)2d.4日齡仔魚卵黃囊吸收完畢，5日齡達(dá)到最高攝食強(qiáng)度。9日齡不能建立外源性營養(yǎng)的仔魚進(jìn)入饑餓不可逆點(diǎn)（PNR），PNR有效積溫為202.5d·℃?；旌蠣I養(yǎng)期若延遲投喂給飼，仔魚生長發(fā)育水平明顯降低。11日齡進(jìn)入稚魚期，饑餓仔魚形態(tài)發(fā)育停滯，生長指標(biāo)出現(xiàn)負(fù)增長?？蓳?jù)此推測(cè)，蘭州鲇仔魚4～6日齡是防患仔鲇死亡危險(xiǎn)的黃金時(shí)間窗口。為穩(wěn)定提升蘭州鲇微膠囊飼料育苗生產(chǎn)效益，急需提升微膠囊飼料對(duì)仔鲇的誘食效能，并在合理的放養(yǎng)密度和水質(zhì)條件中，探索4～6日齡仔鲇用微膠囊飼料馴食的給飼節(jié)律和投喂操作技巧。

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，蘭州鲇專用微膠囊飼料的營養(yǎng)指標(biāo)、粒度、容重和水中穩(wěn)定性參數(shù)基本符合蘭州鲇仔稚魚需求，可納入蘭州鲇育苗的飼料系列，將對(duì)蘭州鲇養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要的應(yīng)用價(jià)值。但目前有關(guān)蘭州鲇仔稚幼3個(gè)生長發(fā)育階段的消化生理、營養(yǎng)需求、外源消化酶添加、誘食因子篩選等大量應(yīng)用基礎(chǔ)性工作仍亟待開展。同時(shí)，在蘭州鲇育苗應(yīng)用中應(yīng)進(jìn)一步探索仔鲇馴食給飼節(jié)律和投喂操作技巧，籍以支持蘭州鲇養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康、綠色發(fā)展。