韓亞 魯衍強(qiáng) 劉紅 馬玲玲 胡季芳

【摘 要】 目的：調(diào)查遵義地區(qū)育齡女性葉酸代謝關(guān)鍵酶5，10.亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10.methylenetetrahydrofolate reductase、MTHFR）及甲硫氨酸合成酶還原酶（Methionine Synthase Reductase、MTRR）關(guān)鍵位點(diǎn)基因多態(tài)性，獲取本地區(qū)育齡女性葉酸利用能力情況，同時為葉酸營養(yǎng)增補(bǔ)方案提供分子醫(yī)學(xué)理論依據(jù)，更好地指導(dǎo)孕期保健。方法：選取2019年3月至2019年5月在本院進(jìn)行備孕及孕期檢查的籍貫為遵義市的女性作為研究對象，共計(jì)317例。采集并提取研究對象口腔黏膜上皮脫落細(xì)胞，抽提DNA，利用熒光定量PCR方法檢測并分析受檢者M(jìn)THFR（C677T，A1298C）和MTRR（A66G）基因分型情況，并與已報導(dǎo)的其他地區(qū)女性的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果：入組對象的基因多態(tài)性分布符合遺傳平衡;遵義地區(qū)育齡女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型頻率分別為36.0%、50.5%、13.6%，MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型頻率分別為65.6%、30.9%、3.5%，MTRR 66AA、AG、GG的基因型頻率分別為53.9%、40.4%、5.7%;遵義地區(qū)育齡女性MTHFR（C677T， A1298C）位點(diǎn)基因型和等位基因頻率與以下地區(qū)育齡女性相比有顯著差異（P<0.05）：與延邊、廊坊、淄博、陽江、南寧、瓊海比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），MTRR A66G位點(diǎn)基因型頻率與延邊、瓊海相比，有顯著差異。結(jié)論：遵義地區(qū)育齡女性葉酸代謝關(guān)鍵酶基因位點(diǎn)多態(tài)性與其他地區(qū)女性有所區(qū)別，具有地域特性。

【關(guān)鍵詞】 遵義;5，10.亞甲基四氫葉酸還原酶;甲硫氨酸合成酶還原酶

Study on SNP polymorphism of key enzymes in folic acid metabolism in women of childbearing age in Zunyi area

Han Ya1， Lu Yanqiang2， Liu Hong1， Ma Lingling1， Hu Jifang*2

1.Zunyi Maternal and Child Health Hospital， Zunyi， Guizhou 563000;

2.Shanghai Zhangjiang Puhui Translational Medicine Research Institute， Shanghai 201210

[Abstract] Objective：Study about the characteristics of the key enzyme folic acid metabolism MTHFR （C677T， A1298C） and MTRR （A66G） in Han women in Zunyi city， Guizhou province， and compared with the samples from other regions that have been reported， understand the folic acid metabolism ability of the study subjects and provide some reference for guiding the local folic acid health during pregnancy.Methods： The origins of pregnancy and pregnancy examinations in our hospital from March to May 2019 were selected for the study of women in Zunyi city，with a total of 317. Genomic DNA were obtained from oral mucosa cells. Detections of MTHFR and MTRR gene polymorphisms conducted with Taqman.MGB technology. Gene type and allele frequency were compared with other ethnic minorities women have been reported before.Results： The genetic polymorphism distribution of the enrolled subjects is consistent with the genetic balance; The genotype frequencies of MTHFR 677CC，CT，and TT in Han nationality women in Zunyi city were 36.0%， 50.5%， and 13.6%， respectively. The genotype frequencies of MTHFR 1298AA， AC， and CC were 65.6%， 30.9%， and 3.5%， respectively. MTRR 66AA， AG The genotype frequencies of GG were 53.9%， 40.4%， and 5.7%， respectively. There were significant differences in MTHFR （C677T，A1298C） and MTRR A66G genotypes and allele frequencies between women in Zunyi city and other ethnic groups （P<0.05）， such as Yanbian，Langfang， Zibo， Yangjiang， Nanning， Qionghai. Conclusion： MTHFR （C677T， A1298C） and MTRR （A66G） gene type frequency in women in Zunyi city were different from others minorities， which could guide for a more individualized folic acid supplement program for different ethnic women.

[Key words]Zunyi; 5，10.Methylenetetrahydrofolate reductase; Methionine synthase reductase

出生缺陷是指胚胎或胎兒在發(fā)育過程中發(fā)生的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)、功能或代謝異常。出生缺陷可由基因突變、染色體變異等遺傳因素、環(huán)境因素、遺傳.環(huán)境因素交互作用或不明原因引起[1]，衛(wèi)生部在中國出生缺陷防治報告（2012）中提及，

我國是出生缺陷高發(fā)國家，每年新增出生缺陷90萬例，總發(fā)生率約為5.6%，是流產(chǎn)、死胎、先天性殘疾等發(fā)生的主要原因，給社會和家庭都帶來了沉重的負(fù)擔(dān)[2]。葉酸在DNA合成、甲基化、生長發(fā)育和基因表達(dá)等方面發(fā)揮重要作用。5，10.亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）、甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶[3.7]，其基因的多態(tài)性會影響體內(nèi)葉酸及同型半胱氨酸水平，與出生缺陷、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等疾病的發(fā)生密切相關(guān)[8.12]。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2019年3月至2019年5月在本院就診的遵義籍貫的育齡女性為研究對象，平均年齡為（27.39±4.71）歲。均獲得受檢者知情同意。

1.2 研究方法

采用國家婦幼保健中心指定采樣拭子采集受檢者的口腔黏膜細(xì)胞，柱式質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒提取樣本DNA。Taqman.MGB探針（見表1）熒光定量PCR檢測MTHFR C677T/A1298C和MTRR A66G的位點(diǎn)多態(tài)性（single nucleotide polymorphism， SNP）。相關(guān)儀器、試劑均購于美國ABI公司。反應(yīng)結(jié)束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光。采用Hardy.Weinberg平衡分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多態(tài)性，利用分析軟件（ABI SDS 2.3）確定各個樣本的基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同地區(qū)間樣本基因型及等位基因頻率比較采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用HaploView 4.2軟件進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性的Hardy.Weinberg平衡分析。

2 結(jié)果

2.1 Hardy.Weinberg遺傳平衡分析

研究對象遵義地區(qū)育齡女性編碼MTHFR C677T， A1298C和MTRR A66G的位點(diǎn)基因多態(tài)性均符合Hardy.Weinberg遺傳平衡（χ2=1.25、0.02、0.88，P>0.05），說明針對該樣本群，由該三個位點(diǎn)遺傳分析得出的結(jié)論對下一代群體具有指導(dǎo)意義。

2.2 基因型和等位基因頻率分布比較

遵義地區(qū)育齡女性MTHFR 677CC、CT、TT的基因型頻率分別為36.0%、50.5%、13.6%，MTHFR 1298AA、AC、CC的基因型頻率分別為65.6%、30.9%、3.5%，MTRR 66AA、AG、GG的基因型頻率分別為53.9%、40.4%、5.7%，位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率與其他地區(qū)女性比較，具有地域特性。其中遵義地區(qū)育齡女性MTHFR C677T/A1298C位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率與延邊、廊坊、淄博、陽江、南寧、瓊海地區(qū)育齡女性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中風(fēng)險基因型MTHFR 677CT/677TT之和占比比較中，遵義地區(qū)育齡女性高于陽江、南寧、瓊海，低于延邊、廊坊、淄博地區(qū)女性，遵義女性MTRR A66G位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率與瓊海相比有顯著差異，MTRR A66G位點(diǎn)基因型頻率與延邊比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

遵義地區(qū)育齡女性MTHFR（C677T，A1298C）和MTRR A66G位點(diǎn)基因型頻率與等位基因頻率分布，及其與已報導(dǎo)其他地區(qū)群里樣本的比較見表2、表3。

3 討論

MTHFR和MTRR是葉酸代謝過程中的關(guān)鍵酶，大量研究表明其特定位點(diǎn)基因突變可能影響胎兒在母體的正常生長發(fā)育，增加神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、Downs綜合征等出生缺陷的發(fā)生風(fēng)險[19]。葉酸增補(bǔ)是我國目前針對出生缺陷一級預(yù)防的主要措施之一，孕婦體內(nèi)葉酸水平受飲食習(xí)慣、地域、遺傳等因素的影響，對營養(yǎng)的需求因人而異，對備孕及已懷孕的女性進(jìn)行葉酸利用能力的評估，有助于了解機(jī)體對葉酸的利用能力，制定個性化的營養(yǎng)干預(yù)方案。

育齡女性葉酸代謝關(guān)鍵酶基因位點(diǎn)在遵義、六盤水、貴陽、眉山、大理等地[20.23]無顯著差異，通過隨訪調(diào)查可知，長期以來云貴川地區(qū)飲食習(xí)慣相似，且三地通婚現(xiàn)象普遍，因此基因型分布差別不大。但與其他地區(qū)相比，遵義地區(qū)女性MTHFR（C66G， A129C）， MTRR（A66G）位點(diǎn)基因多態(tài)性分布具有本地特征，其中突變基因型位點(diǎn)MTHFR（677CT、677TT）型人群所占比例為64.1%，明顯高于廣東陽江、海南瓊海等地，低于吉林延邊、河北廊坊等地，這與我國神經(jīng)管畸形患病率北高南低的分布特征基本一致[24]。遵義地區(qū)葉酸代謝關(guān)鍵酶基因突變率較高，因此加強(qiáng)優(yōu)生知識普及，提高全民參與意識及依從性，優(yōu)化孕前及孕期篩查技術(shù)手段是當(dāng)?shù)厝蘸髢?yōu)生工作的重點(diǎn)內(nèi)容之一，同時為當(dāng)?shù)爻錾毕莘乐喂ぷ魈峁┮欢ǖ臄?shù)據(jù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1] 云小云，歐鳳榮.葉酸缺乏與出生缺陷相關(guān)性研究進(jìn)展[J].實(shí)用藥物與臨床，2016，19（02）：244.248.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國出生缺陷防治報告[R].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2012.

[3] Waskiewicz A，Piotrowski W，Broda G，et al.Impact of MTHFR C677T gene polymorphism and vitamins intake on homocysteine concentration in the Polish adult population[J].Kardiol Pol，2011，69：1259.1264.

[4] Weisberg I，Tran P，Christensen B，et al.A second genetic polymorphism in methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR）associated with decreased enzyme activity[J].Mol Genet Metab，1998，64（03）：169.72.

[5] Wilcken，B，Bamforth F，Li Z，et al.Geographical and ethnic variation of the 677C>T allele of 5，10methylenetetrahydrofolate reductase（MTHFR）：findings from over 7000 newborns from 16.areas world wide[J].J Med Genet，2003，40（08）：619.25.

[6] Wang Y，Liu Y，Ji W，et al.Analysis of MTR and MTRR polymorphisms for neural tube defects risk association[J].Medicine（Baltimore）.2015，94（35）：1367.

[7] Ouyang S，Li Y，Liu Z，et al.Association between MTR A2756G and MTRR A66G polymorphisms and maternal risk for neural tube defects：a meta.analysis[J].Gene，2013，515（02）：308.12.

[8] Salih M A，Murshid W R，Seidahmed M Z.Epidemiology，prena.tal management，and prevention of neural tube defects[J].Saudimedical Journal，2014，35：s15.s28.

[9] Figueiredo R F，F(xiàn)igueiredo N，F(xiàn)eguri A.The role of the folic acid to the prevention of orofacial cleft：an epidemiological study[J].Oral Diseases，2015，21（02）：240.247.

[10]尹璐，呂永剛.亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與自然流產(chǎn)的相關(guān)性分析[J].吉林醫(yī)學(xué)，2012，33（21）：4520.4521.

[11]左金玲，易建平，陳寶麗.妊娠高血壓綜合征基因遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J].中國婦幼保健，2011，26（24）：3822.3824.

[12]王素敏，沈嶸，石小燕，等，同型半胱氨酸代謝酶基因突變多態(tài)性與妊娠高血壓綜合征遺傳易感性研究.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006，14（04）：15.17.

[13]于延輝，魯衍強(qiáng)，李瑛，等.延邊州漢族女性MTHFR和MTRR基因遺傳多態(tài)性調(diào)查[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2015，23（09）：591.594.

[14]李俊華，魯衍強(qiáng)，馬少杰，等.廊坊市漢族女性MTHFR與MTRR基因多態(tài)性分析[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，34（11）：1564.1565.

[15]從玉英，魯衍強(qiáng)，芮欣怡，等.淄博市漢族女性亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性分布研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2012，21（10）：779.781.

[16]曾瑞華，魯衍強(qiáng)，王宏，等.廣東省陽江市漢族女性MTHFR？MTRR基因多態(tài)性分布特征研究[J].中國婦幼保健，2018，33（01）：136.138.

[17]蔣武，魯衍強(qiáng)，李瑛，等.南寧市壯族和漢族女性MTHFR和MTRR基因單核苷酸多態(tài)性比較[J].廣西醫(yī)學(xué)，2014，36（11）：1517.1519.

[18]顏珠苗，魯衍強(qiáng)，李瑛，等.瓊海市漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分布研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，19（01）：18.21.

[19]謝曉媛，崔嵐，辛力.葉酸代謝障礙與出生缺陷關(guān)系的研究概況[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23（07）：10.11，108.

[20]王輝，魯衍強(qiáng)，王宏，等.貴州六盤水市彝族與漢族女性葉酸代謝關(guān)鍵酶基因多態(tài)性特征分布[J].中華生殖與避孕志，2017，37（11）：915.917.

[21]蒲霞，蔣小亞，魯衍強(qiáng)，等.貴陽市漢族與布依族育齡女性葉酸代謝關(guān)鍵酶基因位點(diǎn)多態(tài)性研究[J].中華生殖與避孕雜志，2019，39（07）：533.538.

[22]向長鋼，魯衍強(qiáng)，薛琰，等.眉山市656例漢族女性MTHFR和MTRR基因多態(tài)性分析[J].山東醫(yī)藥，2015，55（14）：22.25.

[23]余云志，魯衍強(qiáng)，杜梅，等.大理白族自治州彝族女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性分析[J].中國婦幼保健，2018，33（18）：4229.4231.

[24]孔亞敏，向坤，雒瑤，等.中國神經(jīng)管缺陷發(fā)生率地區(qū)差異及干預(yù)對策[J].中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2015，31（12）：1110.1111.