蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜法研究

摘 要：多菌靈是蘋果生產(chǎn)中常用的農(nóng)藥，具有毒性，會(huì)引發(fā)胸悶、惡心、抽搐等癥狀，國(guó)標(biāo)中明確規(guī)定了蘋果汁中的多菌靈殘留量要求。基于此，在蘋果汁投入市場(chǎng)前，需進(jìn)行多菌靈含量檢測(cè)，本文主要探究蘋果汁中多菌量的高效液相色譜法，論述其應(yīng)用過程與要點(diǎn)，為蘋果汁中多菌靈檢測(cè)提供幫助。

關(guān)鍵詞：蘋果汁;多菌靈;高效液相色譜法

蔬菜水果中的多菌靈檢測(cè)方法較為多樣，如紫外光譜法及高效液相色譜法等。液相色譜法的應(yīng)用最為普遍，但其對(duì)試劑要求較高;紫外光譜法前處理過程較為復(fù)雜，其檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性偏低。就此，探究一種高效、靈敏度高的蘋果汁中多菌靈檢測(cè)方法具有鮮明現(xiàn)實(shí)意義。

1 蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、溶劑過濾器、pH計(jì)、氮吹儀與高效液相色譜系統(tǒng);實(shí)驗(yàn)所用試劑包括多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（200μg/mL）、氯化鈉溶液（100g/L）、鹽酸（2mol/L）、乙酸乙酯、甲醇等。

1.2 樣品處理

在蘋果汁中多菌靈的高效液相色譜檢測(cè)中，需采用合理處理方法，提取蘋果汁中的多菌靈，保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性。常用的蔬菜水果中多菌靈提取方法較多，本實(shí)驗(yàn)選擇兩種，通過對(duì)比分析，選出最優(yōu)的樣品處理方法。

1.2.1 方法一：快速樣品前處理方法

應(yīng)用高速組織搗碎機(jī)對(duì)蘋果進(jìn)行均質(zhì)處理，將均質(zhì)后的蘋果置于50mL離心管中，添加10mL乙腈，進(jìn)行渦旋混勻處理，再添加4g無水硫酸鎂、1g硫化鈉及1g無水醋酸鈉，渦旋2min后，以4000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理，處理時(shí)間5min;靜置后吸取5mL上清液，與125mg的N-丙基乙二胺、750mg無水硫酸鎂共同置于15mL離心管中，以上述同樣參數(shù)，進(jìn)行渦旋與離心處理;最后，靜置后吸取2mL上清液，進(jìn)行45℃水浴處理，再應(yīng)用氮吹儀將溶液吹干，使用乙腈溶解殘?jiān)?.45μm的濾膜過濾溶液，完成樣品溶液的制備。

1.2.2 方法二：乙酸乙酯提取方法

應(yīng)用高速組織搗碎機(jī)制備蘋果汁，貯存于-20℃的冰箱中備用。在樣品前處理中，稱取10g蘋果汁置于250mL平底燒瓶中，再添加30mL的氯化鈉溶液，應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量溶液的pH值，添加鹽酸調(diào)節(jié)，使其pH處于6-7之間;然后，向平底燒瓶中添加50mL的乙酸乙酯溶液，將平底燒瓶置于恒溫振蕩提取器中，處理一個(gè)小時(shí);其次，對(duì)振蕩后的液體進(jìn)行真空抽濾處理，再應(yīng)用乙酸乙酯清洗燒瓶?jī)?nèi)的濾渣，將其與濾液混合，靜置分層后收集乙酸乙酯相，并應(yīng)用乙酸乙酯進(jìn)行水相的清洗，共清洗兩次;最后，將混合溶液過硫酸鈉柱，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理，在溶液近干時(shí)停止儀器，向溶液內(nèi)添加乙酸乙酯，應(yīng)用氮吹儀將溶液吹干，添加甲醇至1.5mL，完成樣品溶液的制備。

對(duì)比結(jié)果顯示，方法二的多菌靈回收率更高。就此，本實(shí)驗(yàn)選擇乙酸乙酯提取方法進(jìn)行樣品前處理。同時(shí)，在本實(shí)驗(yàn)中，為驗(yàn)證高效液相色譜法在多菌靈檢測(cè)方面的準(zhǔn)確性，本文共進(jìn)行三個(gè)樣品的測(cè)定。

1.3 樣品檢測(cè)

在樣品檢測(cè)中，選擇菲羅門硅烷基柱作為高效液相色譜檢測(cè)的色譜柱，其規(guī)格為250mm×4.60mm，5μm;色譜柱的溫度設(shè)定為室溫;色譜柱的進(jìn)樣量設(shè)定為10μL;將磷酸鹽緩沖液和甲醇作為流動(dòng)相，要求混合液的濃度為0.02mol/L，二者配比為1：1，在置于色譜柱前，需對(duì)混合液進(jìn)行過濾出現(xiàn)，選擇0.45μm規(guī)格的濾膜;流動(dòng)相的流速設(shè)定為0.8mL/min。在檢測(cè)時(shí)，將檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為280nm，在發(fā)現(xiàn)樣品的譜圖和多菌量標(biāo)準(zhǔn)液的譜圖色譜峰值保留時(shí)間相同時(shí)，即可完成檢測(cè)。其中，色譜圖中的色譜峰值保留時(shí)間作為多菌靈的定性分析數(shù)據(jù);色譜圖中的色譜峰面積作為多菌靈的定量分析數(shù)據(jù)，保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[1]。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在本實(shí)驗(yàn)選擇的三個(gè)樣品中，測(cè)定的多菌量含量分別為4.997×10-2、5.834×10-2、6.722×10-2，均小于國(guó)標(biāo)中限定的0.5，說明蘋果汁符合規(guī)范要求，可正常投入市場(chǎng)。

2.2 實(shí)驗(yàn)分析

2.2.1 樣品處理分析

在蘋果汁樣品的前處理中，需選擇合理試劑進(jìn)行多菌靈的提取。在本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，選擇乙酸乙酯、二氯甲烷及乙腈三種提取劑進(jìn)行多菌靈回收率的測(cè)定。測(cè)定結(jié)果顯示，乙酸乙酯的多菌靈回收率為103.85±1.06;二氯甲烷的多菌靈回收率為39.23;乙腈的多菌靈回收率為22.975± 7.37?？梢?，乙酸乙酯的回收率最高，可提高蘋果汁中多菌靈檢測(cè)的靈敏度，本實(shí)驗(yàn)選擇乙酸乙酯作為最終的多菌靈提取劑。

2.2.2 色譜條件分析

在多菌靈檢測(cè)中，色譜條件會(huì)影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。在本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，對(duì)180-780nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收光譜進(jìn)行分析。對(duì)比顯示，在280nm波長(zhǎng)處，光譜圖上的雜峰較少，基線較為穩(wěn)定，且整個(gè)光譜圖清晰度較高。就此，本實(shí)驗(yàn)將色譜柱的檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為280nm。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)前，設(shè)置不同流動(dòng)相配比與流速梯度，分別進(jìn)行多菌靈分析，對(duì)比各個(gè)方案下的光譜圖。對(duì)比顯示，在流動(dòng)相選擇磷酸鹽緩沖液和甲醇時(shí)，光譜圖最為清晰;在二者配比為1：1時(shí)，光譜圖的雜峰較少;在流動(dòng)相的流速設(shè)定為0.8mL/min時(shí)，出峰時(shí)間和峰型最為合理。就此，本實(shí)驗(yàn)將色譜檢測(cè)的流動(dòng)相選為磷酸鹽緩沖液與甲醇，二者配比設(shè)定為1：1，流動(dòng)相的流速設(shè)定為0.8mL/min。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線分析

在實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析中，需應(yīng)用多菌靈標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，明確高效液相色譜法在檢測(cè)多菌靈時(shí)的檢出限。在標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制中，對(duì)200μg/mL的多菌靈儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋處理，分別制備成1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL、7μg/mL、10μg/mL、12μg/mL、15μg/mL、18μg/mL、20μg/mL。按照實(shí)驗(yàn)前確定的色譜條件，進(jìn)行檢測(cè)，獲得相應(yīng)的色譜

圖，明確不同濃度多菌靈的色譜峰面積，將多菌靈色譜峰面積作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的Y軸;將多菌靈的濃度作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的X軸，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程，為Y=4.9984X+11.093，

方程的R2值為0.9996，說明線性方程的準(zhǔn)確性較高，即根據(jù)色譜峰面積，應(yīng)用該方程計(jì)算多菌靈濃度，具備較高的準(zhǔn)確性。同時(shí)，將信噪比設(shè)定為S/N=3，計(jì)算高效液相色譜法測(cè)定多菌靈的最低檢測(cè)限為0.1341mg/mL。

2.2.4 回收率分析

稱取10g蘋果汁樣品，分別與25μL、50μL、75μL、

150μL標(biāo)準(zhǔn)多菌靈儲(chǔ)備液混合，獲得不同濃度的多菌靈樣品液。按照上述樣品前處理流程，進(jìn)行樣品中多菌靈的提取與濃縮，每個(gè)添加量檢測(cè)三次，做平行實(shí)驗(yàn)。將檢測(cè)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，應(yīng)用外標(biāo)法進(jìn)行定量處理，計(jì)算不同濃度樣品溶液的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。計(jì)算結(jié)果顯示，25μL樣品溶液的平均回收率為99.4±8.9%;50μL樣品溶液的平均回收率為102.7±3.365;75μL樣品溶液的平均回收率為102.3±2.871;150μL樣品溶液的平均回收率為93.2±6.932。計(jì)算的多菌靈檢測(cè)限為0.02mg/kg，符合國(guó)標(biāo)中蘋果汁樣品中多菌靈限量0.5mg/kg的要求[2]。

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)分析內(nèi)容可知，在蘋果汁中多菌靈的檢測(cè)中，蘋果汁樣品的前處理、高效液相色譜法的色譜條件，直接關(guān)系到多菌靈檢測(cè)的準(zhǔn)確性，檢測(cè)人員可借鑒本文提出的前處理方法，將乙酸乙酯作為提取劑，配合旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀與氮吹儀，以高回收率提取多菌靈，保障多菌靈檢測(cè)準(zhǔn)確性;在實(shí)驗(yàn)前設(shè)置不同色譜條件，對(duì)比分析不同色譜條件下的色譜圖，選出最佳色譜條件，保障多菌靈檢測(cè)靈敏度?？偟膩碚f，在蘋果汁中多菌靈的檢測(cè)中，高效液相色譜法的檢測(cè)限為0.02mg/kg，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程相關(guān)系數(shù)接近于1，說明檢測(cè)準(zhǔn)確性與精密度較高，可在蘋果汁中多菌靈檢測(cè)中推廣應(yīng)用。

3 結(jié)論

綜上所述，在蘋果汁中多菌靈的檢測(cè)中，高效液相色譜法表現(xiàn)出前處理流程簡(jiǎn)單、檢測(cè)效率高、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性與精密度高、檢測(cè)靈敏度強(qiáng)、回收率高等優(yōu)勢(shì)，可在蔬菜水果的多菌靈殘留量快速檢測(cè)中推廣應(yīng)用，提高蔬菜水果中農(nóng)藥檢測(cè)的效率，保障食品流通安全。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊麗芬，楊忠平，邵林，等.QuEChERS-高效液相色譜法測(cè)定蘋果中多菌靈和噻菌靈[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2020，11（07）：2257-2262.

[2]夏姍姍，韋沙迪，王愛臣，等.30%咪鮮胺錳鹽·多菌靈水分散粒劑的高效液相色譜分析[J].化工設(shè)計(jì)通訊， 2019，45（03）：148+151.

作者簡(jiǎn)介：

沈方（1990- ），女，漢族，籍貫：江蘇省新沂市新安鎮(zhèn)，學(xué)歷：本科，畢業(yè)于南京財(cái)經(jīng)大學(xué)，現(xiàn)有職稱：助理工程師，研究方向：中級(jí)工程師。