厲穎 陶柱萍 常旭 歐紅利 江倫 李燦委 唐艷隆 周玥 白麗 高鵬飛

中圖分類(lèi)號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）12-1446-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.12.08

摘 要 目的：初步研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對(duì)上皮腫瘤細(xì)胞MFC荷瘤小鼠的抑瘤機(jī)制。方法：將Balb/c小鼠隨機(jī)分為模型組（生理鹽水20 mL/kg）和CⅡ-3組（200 mg/kg），每組6只。在小鼠右側(cè)腋下注射MFC細(xì)胞懸液0.2 mL后，于次日灌胃相應(yīng)藥物，每日1次，連續(xù)10 d。末次給藥24 h后，在測(cè)量瘤體大小的基礎(chǔ)上，采用氫-1核磁共振技術(shù)（1H-NMR）并結(jié)合非監(jiān)督型主成分分析（PCA）、監(jiān)督型偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA），比較兩組荷瘤小鼠肝組織的代謝譜并分析差異性代謝物，探索CⅡ-3抑瘤作用的潛在機(jī)制。結(jié)果：與模型組比較，CⅡ-3組荷瘤小鼠的瘤體明顯減小;兩組小鼠的1H-NMR圖譜存有差異;結(jié)合非監(jiān)督型PCA、監(jiān)督型PLS-DA、OPLS-DA結(jié)果，共確定了肝組織潛在差異性代謝物6個(gè)，分別為糖原（升高）、丙酮酸（降低）、精氨酸（降低）、羥脯氨酸（升高）、肌苷（升高）、煙酰胺（升高），主要?dú)w屬于精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝。結(jié)論：CⅡ-3對(duì)MFC荷瘤小鼠的抑瘤作用可能與調(diào)節(jié)精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝有關(guān)。

關(guān)鍵詞 美洲大蠊提取物CⅡ-3;上皮腫瘤細(xì)胞MFC;代謝組學(xué);氫-1核磁共振技術(shù);小鼠

Study on Antitumor Mechanism of Periplaneta americana Extract CⅡ-3 on MFC Tumor-bearing Mice Based on 1H-NMR Metabonomics

LI Ying1，TAO Zhuping1，CHANG Xu2，OU Hongli2，3，JIANG Lun2，4，LI Canwei5，TANG Yanlong6，ZHOU Yue2， BAI Li2，GAO Pengfei1，7（1.College of Pharmacy and Chemistry， Dali University， Yunnan Dali 671000，China;2. College of Basic Medical Sciences， Dali University， Yunnan Dali 671000，China;3. Dept. of Blood Transfusion，Dehong Peoples Hospital， Yunnan Dehong 678400，China;4. Dept. Two of Internal Medicine， Yongxing County Traditional Chinese Medicine Hospital of Hunan Province， Hunan Chenzhou 423300，China;5. College of Public Health， Dali University， Yunnan Dali 671000，China;6. Dept. of Radiology， the First Affiliated Hospital of Dali University， Yunnan Dali 671000，China;7. Yunnan Key Laboratory for Biomedical Research and Development of Insects， Yunnan Dali 671000，China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To preliminarily study the antitumor mechanism of Periplaneta americana extract CⅡ-3 on MFC tumor-bearing mice. METHODS： Balb/c mice were randomly divided into model group （normal saline 20 mL/kg） and CⅡ-3 group （200 mg/kg）， with 6 mice in each group. MFC cell suspension （0.2 mL） was injected under the right armpit of mice. On the next day， mice were given relevant medicine intragastrically， once a day， for consecutive 10 d. 24 h after the last administration， Based on the measurement of tumor size， ?1H-NMR technology combined with unsupervised PCA， supervised PLS-DA and OPLS-DA were used to compare metabolic spectrum of liver tissue from tumor-bearing mice of 2 groups， to analyze differential metabolites and to explore the potential antitumor mechanism of CⅡ-3. RESULTS： Compared with model group， the tumor body was significantly reduced in tumor-bearing mice of CⅡ-3 group. There were differences in 1H-NMR spectra between the 2 groups. According to unsupervised PCA， supervised PLS-DA and OPLS-DA， totally six potential differential metabolites， as glycogen （increased）， pyruvate （decreased）， arginine （de- creased）， hydroxyproline （increased）， inosine （increased） and niacinamide （increased）， were identified in the liver tissue， which were mainly attributed to the metabolism of arginine， energy and nucleic acid. CONCLUSIONS： The antitumor effect of CⅡ-3 may be related to the regulation of arginine metabolism， energy metabolism and nucleic acid metabolism.

KEYWORDS ? Periplaneta americana extract CⅡ-3; MFC cell line; Metabolomics; 1H-NMR; Mice

惡性腫瘤的病死率高、患者預(yù)后差，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，給患者及其家屬帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。胃癌是世界上較為嚴(yán)重的惡性腫瘤之一，其病死率位居全球第3位[1]。目前，對(duì)于腫瘤的治療方法以傳統(tǒng)化療、放療和手術(shù)等為主，但傳統(tǒng)放化療方法療效有限，且毒副作用較大，可造成機(jī)體免疫監(jiān)視和免疫防御減弱等[2]。因此，尋找新的腫瘤治療藥物顯得尤為迫切。

近年來(lái)，代謝組學(xué)作為一種新興的組學(xué)技術(shù)，已成功地應(yīng)用于各種系統(tǒng)生物學(xué)研究領(lǐng)域，通過(guò)分析疾病治療過(guò)程中生物體內(nèi)發(fā)生的代謝物和代謝通路改變，從整體角度研究生物體的功能水平[3]。核磁共振（NMR）技術(shù)具有高通量、無(wú)創(chuàng)性以及重現(xiàn)性好、前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[4]，以氫-1核磁共振技術(shù)（1H-NMR）為基礎(chǔ)的代謝組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于癌癥生物標(biāo)志物的鑒定、監(jiān)測(cè)以及抗癌藥物的研發(fā)[5]。

美洲大蠊[Periplaneta americana（L.）]為昆蟲(chóng)綱蜚蠊目蜚蠊科昆蟲(chóng)的干燥全體?，F(xiàn)代藥理研究表明，美洲大蠊在抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫、護(hù)肝、促進(jìn)組織修復(fù)和抗菌等方面均具有較強(qiáng)的作用[6]。美洲大蠊提取物CⅡ-3是從美洲大蠊粉末中提取的以肽類(lèi)為主的混合物[2]。本課題組前期的研究表明，CⅡ-3對(duì)小鼠胃癌細(xì)胞MFC的生長(zhǎng)具有一定的抑制作用[2]，但其抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚需深入探討?；诖耍狙芯繌拇x組學(xué)角度出發(fā)，借助1H-NMR技術(shù)對(duì)比分析給予CⅡ-3前后MFC荷瘤小鼠肝組織中的內(nèi)源性差異性代謝物，探索CⅡ-3對(duì)MFC荷瘤小鼠的潛在抑瘤作用機(jī)制，以期為進(jìn)一步明確CⅡ-3的抑瘤機(jī)制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Ascend 800 MHz NMR儀（瑞士Bruker公司）;MCO-18AIC型CO2培養(yǎng)箱（日本Sanyo公司）;Miccra D-1型組織破碎儀[邁卡萊客（廣州）工業(yè)技術(shù)有限公司];Sigma 3-15型低溫高速離心機(jī)（希格瑪實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)公司）;Labconco CentriVap型真空離心濃縮儀（北京照生行儀器設(shè)備有限公司）;GOLD-SIM型冷凍干燥機(jī)[金西盟（北京）儀器有限公司]。

1.2 藥品與試劑

CⅡ-3由大理大學(xué)云南省昆蟲(chóng)生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，經(jīng)鑒定其中66%～67%為小分子肽類(lèi)物質(zhì);RPMI 1640完全培養(yǎng)基、胎牛血清（FCS）均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;生理鹽水由本實(shí)驗(yàn)室自制;K2HPO4、NaH2PO4、甲醇等試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 細(xì)胞

MFC細(xì)胞取自615小鼠胃癌組織，呈貼壁生長(zhǎng)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。

1.4 動(dòng)物

SPF級(jí)Balb/c小鼠，雌性8只、雄性4只，6～8周齡，體質(zhì)量20 g左右，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2016-0002。所有小鼠均飼養(yǎng)于大理大學(xué)清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，給予標(biāo)準(zhǔn)飲食和清潔用水，在平均溫度為（20±2）℃、相對(duì)濕度為（55±5）%條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

2 方法

2.1 MFC細(xì)胞體外培養(yǎng)

取MFC細(xì)胞，常規(guī)復(fù)蘇，用含10%FCS的RPMI 1640完全培養(yǎng)基于37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng);取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）調(diào)整細(xì)胞密度至1×107 mL-1，備用。

2.2 分組、造模與給藥

將小鼠隨機(jī)分為模型組和CⅡ-3組，每組6只（雌性4只、雄性2只），用75%乙醇消毒小鼠右側(cè)腋下，棉球擦干后皮下注射“2.1”項(xiàng)下MFC細(xì)胞懸液0.2 mL，于接種后次日開(kāi)始給藥，給藥劑量依據(jù)前期研究設(shè)置，模型組小鼠灌胃等體積生理鹽水，CⅡ-3組小鼠灌胃CⅡ-3（200 mg/kg），給藥體積均為20 mL/kg，每日1次，連續(xù)10 d。

2.3 樣品的收集與處理

末次給藥24 h后，頸椎脫臼處死各組小鼠，迅速剝離瘤體，測(cè)量大小，并分離肝組織。取肝組織0.1 g，加入67%冰甲醇中，勻漿，在4 ℃下以12 000 r/min離心10 min，取上清液，真空濃縮4 h，冷凍干燥24 h，制成凍干粉，再加入0.1 mol/L K2HPO4/NaH2PO4緩沖液（pH 7.4）650 μL，渦旋混勻，在4 ℃下以12 000 r/min離心10 min，取上清液550 μL，置于-80 ℃冰箱保存，用于1H-NMR檢測(cè)。

2.4 1H-NMR圖譜采集與分析

采用NMR儀采集各組每只小鼠的肝圖譜，譜寬為20 ppm，采樣點(diǎn)數(shù)為32 K，采樣時(shí)間為1.64 s，累計(jì)64次。所有圖譜均采用Topspin 3.1軟件進(jìn)行傅里葉轉(zhuǎn)換，并進(jìn)行手動(dòng)相位、基線校正，以3-（三甲基甲硅烷基）氘代丙酸鈉（TSP）[化學(xué)位移（δ）=0]為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)譜圖進(jìn)行化學(xué)位移的校正。應(yīng)用AMIX 3.8軟件去除水峰區(qū)域，并對(duì)圖譜進(jìn)行分段積分，將產(chǎn)生的所有積分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理。歸一化后的數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA-P 13.0軟件，進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，包括非監(jiān)督型主成分分析（PCA）、監(jiān)督型偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA），其中非監(jiān)督型PCA可用以繪制所有樣品的1H-NMR代謝輪廓;監(jiān)督型PLS-DA可用以分析NMR數(shù)據(jù)（X變量）和分組信息（Y變量）之間的相關(guān)性，可通過(guò)200次置換試驗(yàn)對(duì)模型的有效性進(jìn)行驗(yàn)證;OPLS-DA則有助于辨別不同組間的主要代謝物，最大化地反映模型內(nèi)部不同組別之間的差異，以尋找出具有特征性的差異性代謝物[7]。根據(jù)OPLS-DA的相關(guān)系數(shù)結(jié)果，通過(guò)Pearson相關(guān)系數(shù)（r）顯著性差異檢測(cè)，確定|r|=0.754（n=6）作為代謝物變化是否具有顯著性差異的閾值（P<0.05），即當(dāng)r>0.754或r<-0.754時(shí)，該代謝物組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[7];在此基礎(chǔ)上，結(jié)合人類(lèi)代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)（HMDB）和相關(guān)文獻(xiàn)[8-11]，最終確定差異性代謝物。

3 結(jié)果

3.1 CⅡ-3對(duì)MFC荷瘤小鼠瘤體的影響

與模型組比較，CⅡ-3組荷瘤小鼠的瘤體明顯減小，詳見(jiàn)圖1。

3.2 小鼠肝組織的1H-NMR圖譜分析

兩組小鼠的1H-NMR圖譜存在一定差異。依據(jù)δ值、HMDB和相關(guān)文獻(xiàn)[8-11]對(duì)上述代謝進(jìn)行分析，共指認(rèn)出6個(gè)潛在的差異性代謝物，分別為精氨酸、羥脯氨酸、糖原、丙酮酸、肌苷、煙酰胺，涉及精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝。兩組荷瘤小鼠肝組織的1H-NMR圖譜見(jiàn)圖2。

3.3 小鼠肝組織1H-NMR的多元統(tǒng)計(jì)分析

3.3.1 非監(jiān)督型PCA分析 非監(jiān)督型PCA分析散點(diǎn)圖見(jiàn)圖3。由圖3 可見(jiàn)，模型組和CⅡ-3組均呈現(xiàn)出良好的聚類(lèi)趨勢(shì)，說(shuō)明模型組與CⅡ-3組小鼠整體代謝輪廓可很好的區(qū)分。模型的質(zhì)量可以R2X和Q2進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中R2X表示可解釋變量，Q2表示模型的可預(yù)測(cè)度[7]。非監(jiān)督型PCA模型擬合參數(shù)（R2X）為0.73，Q2為0.58，表明建立的數(shù)據(jù)模型比較可靠[7]。

3.3.2 監(jiān)督型PLS-DA分析 監(jiān)督型PLS-DA數(shù)據(jù)模型的200次置換檢驗(yàn)圖見(jiàn)圖4。由圖4所示，R2=（0，0.785），Q2=（0，-0.085 1），圖中累積的R2、Q2均小于原始值，且Q2在Y軸上有負(fù)截距，提示數(shù)據(jù)模型成立且有較好的預(yù)測(cè)能力[7]。

3.3.3 OPLS-DA分析 OPLS-DA分析散點(diǎn)圖見(jiàn)圖5。由圖5可見(jiàn)，模型組與CⅡ-3組沿1.000 04*t[1]軸分開(kāi)，組間區(qū)分明顯，表明兩組小鼠存在代謝差異。OPLS-DA數(shù)據(jù)模型的主要參數(shù)如下：R2X=0.808，R2Y=0.999，Q2=0.954，從上述參數(shù)可知，本研究建立的模型具有較高的可靠性[7]。OPLS-DA數(shù)據(jù)模型的S-plot載荷圖（S-plot載荷圖能夠可視化代謝物與模型之間的協(xié)方差和相關(guān)性，反映組間差異的貢獻(xiàn)程度[12]）見(jiàn)圖6。由圖6可見(jiàn)，遠(yuǎn)離原點(diǎn)的變量對(duì)組間差異有顯著貢獻(xiàn)。

3.4 差異性代謝物的確定

根據(jù)OPLS-DA分析結(jié)果并結(jié)合HMDB和相關(guān)文獻(xiàn)[8-11]，進(jìn)一步確定了兩組荷瘤小鼠肝組織代謝譜中有6個(gè)潛在差異性代謝物，詳見(jiàn)表1。這6個(gè)差異性代謝物主要?dú)w屬于精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝，其代謝通路圖見(jiàn)圖7。

4 討論

腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展往往伴隨著體內(nèi)內(nèi)源性代謝物的變化，而代謝組學(xué)可通過(guò)檢測(cè)生物過(guò)程的最終產(chǎn)物來(lái)監(jiān)測(cè)所有代謝影響因素的整體結(jié)果，因此越來(lái)越多的研究者利用代謝組學(xué)技術(shù)來(lái)監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞的代謝過(guò)程，分析識(shí)別在腫瘤發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中體內(nèi)內(nèi)源性代謝物的改變和相關(guān)代謝通路的變化[13-14]。腫瘤的生長(zhǎng)對(duì)肝、脾、肺、腎、心臟等許多非累及器官的代謝功能均會(huì)產(chǎn)生影響。其中，肝是機(jī)體內(nèi)源性和外源性物質(zhì)代謝和沉積的重要器官，當(dāng)其受到損傷時(shí)，會(huì)造成相關(guān)代謝網(wǎng)絡(luò)變化，并引起全身代謝紊亂[12];同時(shí)，肝是胃癌血行轉(zhuǎn)移最常見(jiàn)的部位，胃癌的肝轉(zhuǎn)移可在胃癌患者中得到同步診斷[15]。因此，本研究選擇肝作為檢測(cè)樣品，借助1H-NMR技術(shù)比較給予CⅡ-3前后MFC荷瘤小鼠肝組織的代謝譜，結(jié)合非監(jiān)督型PCA、監(jiān)督型PLS-DA和OPLS-DA多元統(tǒng)計(jì)分析確定CⅡ-3干預(yù)MFC荷瘤小鼠后肝組織中的潛在差異性代謝物及其代謝通路，初步探索CⅡ-3抗腫瘤的作用機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，CⅡ-3組小鼠的瘤體明顯變小，結(jié)果與本課題組前期研究結(jié)果（CⅡ-3能抑制MFC細(xì)胞生長(zhǎng)）一致[2]。代謝組學(xué)結(jié)果顯示，CⅡ-3可降低精氨酸、丙酮酸水平，升高糖原、羥脯氨酸、肌苷、煙酰胺水平，提示CⅡ-3的抗腫瘤作用可能與調(diào)節(jié)機(jī)體精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝有關(guān)。

4.1 精氨酸代謝

精氨酸是人類(lèi)硝酸鹽生物合成的前體物質(zhì)，同時(shí)也參與了氧化亞胺反應(yīng)態(tài)氮中間體的形成，可促進(jìn)DNA損傷和細(xì)胞凋亡[16]。有研究報(bào)道，精氨酸可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體免疫功能來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，其機(jī)制可能為：（1）精氨酸調(diào)節(jié)T細(xì)胞代謝，提高自然殺傷細(xì)胞的活性，促進(jìn)巨噬細(xì)胞的激活和吞噬以提高宿主的免疫功能，增強(qiáng)抗腫瘤活性并提高宿主存活率;（2）通過(guò)一氧化氮途徑提升巨噬細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫反應(yīng)[17];此外，精氨酸也可通過(guò)抑制抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)而顯著抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[18]。Jung J等[16]研究結(jié)果表明，精氨酸在胃癌患者體內(nèi)的表達(dá)水平較高，而在術(shù)后預(yù)后良好的患者體內(nèi)表達(dá)下降，與本研究結(jié)果一致。

脯氨酸與羥脯氨酸等氨基酸是膠原蛋白富含的氨基酸，羥脯氨酸是一種非必需氨基酸，可由脯氨酸羥化而來(lái)，是由膠原和彈性蛋白等結(jié)締組織蛋白質(zhì)水解得到的一種氨基酸，其含量變化是衡量機(jī)體膠原組織代謝的重要指標(biāo)。Tsai CK等[19]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者腫瘤組織中的脯氨酸水平降低。在本研究中，與模型組比較，CⅡ-3組荷瘤小鼠肝組織中羥脯氨酸水平上調(diào)，提示CⅡ-3給藥后精氨酸水平降低、羥脯氨酸水平升高，表明CⅡ-3可能通過(guò)調(diào)節(jié)精氨酸代謝抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

4.2 能量代謝

肝是儲(chǔ)存糖原的重要器官，糖原是葡萄糖的聚合物，是動(dòng)物體內(nèi)碳水化合物的主要儲(chǔ)存方式，丙酮酸是糖酵解的中間產(chǎn)物。有研究報(bào)道，腫瘤細(xì)胞的Warburg效應(yīng)可引起丙酮酸水平升高[20]。Zhang HL等[21]采用NMR代謝組學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，胃癌患者腫瘤組織中丙酮酸水平升高。在本研究中，與模型組相比，CⅡ-3組荷瘤小鼠肝組織中糖原水平升高、丙酮酸水平降低，說(shuō)明能量代謝發(fā)生了變化。CⅡ-3給藥后丙酮酸水平的降低提示糖酵解過(guò)程受到抑制，即CⅡ-3可能通過(guò)抑制糖酵解、調(diào)節(jié)能量代謝來(lái)發(fā)揮其抗腫瘤作用。

4.3 核酸代謝

肌苷參與了體內(nèi)核酸代謝、能量代謝和蛋白質(zhì)合成等過(guò)程，可以直接透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入體細(xì)胞，活化丙酮酸氧化酶類(lèi)，從而使處于低能缺氧狀態(tài)下的細(xì)胞恢復(fù)正常[22]。此外，肌苷是一種天然抗氧化劑，可以減少活性氧的生成，保護(hù)DNA免受活性氧物質(zhì)誘導(dǎo)的氧化損傷[23]，并有助于受損肝細(xì)胞功能的恢復(fù)[24]。

煙酰胺是煙酸的酰胺形式，在糖酵解、檸檬酸循環(huán)和線粒體電子傳遞等基礎(chǔ)能量代謝中具有不可或缺的作用[25]。煙酸在體內(nèi)可經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)合成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+），靶向NAD+代謝可能抑制多種腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展，包括增殖、存活、代謝適應(yīng)、侵襲、與腫瘤細(xì)胞微環(huán)境的異型相互作用以及DNA維持和修復(fù)在內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)等[26]。姚珂[27]基于超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析了胃癌組織及癌旁組織的代謝差異，結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞的快速增殖及消耗能量可能導(dǎo)致胃癌組織的煙酰胺水平低于癌旁組織。在本研究中，CⅡ-3組荷瘤小鼠肝提取物中肌苷和煙酰胺水平升高，提示CⅡ-3可能通過(guò)調(diào)節(jié)核酸代謝而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

4.4 不足

本研究尚有一些可改進(jìn)的方面。首先，依據(jù)本課題組前期的研究結(jié)果，本研究暫只設(shè)計(jì)了MFC荷瘤小鼠模型組和CⅡ-3組兩組，后續(xù)將增設(shè)正常對(duì)照組，以綜合分析正常對(duì)照組、模型組和CⅡ-3組受試動(dòng)物的差異性代謝物，以期更直觀、全面地反映CⅡ-3可能的抗腫瘤作用機(jī)制。其次，本研究?jī)H對(duì)MFC荷瘤小鼠和經(jīng)CⅡ-3干預(yù)10 d的荷瘤小鼠的肝組織代謝物的變化進(jìn)行了比較，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以考慮設(shè)置多個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集肝組織樣品，對(duì)其代謝物進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，從而得到更全面的代謝物變化信息。此外，本研究?jī)H選用了1 H-NMR技術(shù)進(jìn)行分析，后續(xù)研究可結(jié)合其他代謝組學(xué)技術(shù)，如液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）、氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）等，以進(jìn)一步驗(yàn)證本文結(jié)果。

5 結(jié)語(yǔ)

CⅡ-3給藥后，MFC荷瘤小鼠肝組織中多種代謝物水平發(fā)生變化，提示CⅡ-3的抗腫瘤作用可能與調(diào)節(jié)精氨酸代謝、能量代謝和核酸代謝有關(guān)，為后續(xù)研究提供了理論依據(jù)。

（作者厲穎和陶柱萍對(duì)本文有同等貢獻(xiàn)）

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（收稿日期：2020-01-13 修回日期：2020-04-24）

（編輯：鄒麗娟）