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      藏藥三味豆蔻湯散水提物鎮(zhèn)靜催眠作用研究

      2020-07-03 09:39:38李毛加張金魁李海麗南措吉扎西吉才讓南加
      關(guān)鍵詞:閾下巴比妥鈉豆蔻

      李毛加,張金魁,李海麗,南措吉,扎西吉,才讓南加*

      (1.青海民族大學(xué) 藥學(xué)院,青海 西寧 810007;2.青海省青藏高原植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,青海 西寧 810007)

      0 引言

      隨著生活節(jié)奏的加快,人們的生活、工作壓力日益增大,導(dǎo)致抑郁、失眠等眾多問(wèn)題.我國(guó)成年人群中約有38.2%的人存在失眠癥狀,約50%的人有過(guò)失眠現(xiàn)象[1].大量的失眠癥患者伴有不同程度的抑郁、焦慮癥狀,增加糖尿病、冠心病、老年癡呆癥等的患病風(fēng)險(xiǎn).三味豆蔻湯散是藏醫(yī)治療失眠的首選藥方,該方最早記載于《四部醫(yī)典》,由白豆蔻、蓽茇和孜然配伍而成,至今有1 300多年的應(yīng)用歷史.索南卓瑪[2]等對(duì)其進(jìn)行了初步的臨床觀察研究,但是尚未見(jiàn)相關(guān)藥效學(xué)研究報(bào)道.本文通過(guò)三味豆蔻湯散對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)次數(shù)影響實(shí)驗(yàn)、閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠實(shí)驗(yàn)和閾上劑量戊巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn),探討三味豆蔻湯散鎮(zhèn)靜催眠作用,旨在為三味豆蔻湯散的藥效評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐.

      1 材料與方法

      1.1 材料

      1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

      昆明種小鼠40只,SPF級(jí),體重18~22 g,雌雄各半,合格證號(hào)2018003號(hào),購(gòu)于青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.飼養(yǎng)于青海民族大學(xué)藥學(xué)院動(dòng)物房,環(huán)境溫度:室溫(24±2)℃,相對(duì)濕度55%~65%,分籠飼養(yǎng),正常采光.動(dòng)物飲用純凈水,飼料為實(shí)驗(yàn)鼠維持顆粒料(湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司),適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)一周,自由攝食與飲水,實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h.

      1.1.2 藥品和試劑

      三味豆蔻湯散(藥物購(gòu)自青海省藏醫(yī)院,青藥制字Z20122220),地西泮注射液(規(guī)格10 mg/2 mL,哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司,批號(hào):1801062),戊巴比妥鈉(上?;瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站,批號(hào):1810251).

      1.1.3 儀器

      ZZ-6小鼠自主活動(dòng)儀(成都泰盟科技有限公司),AL204分析天平(梅特勒-托力多儀器上海有限公司),F(xiàn)A1604電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司),JPT-5架盤(pán)天平(北京大柵欄天平廠),SXHW型電熱套(河南太康教材儀器廠),小鼠灌胃器(北京合力科創(chuàng)科技發(fā)展有限公司),一次性使用無(wú)菌注射器(規(guī)格1mL,山東新華安得醫(yī)療用品有限公司,批號(hào):20181023).

      1.2 實(shí)驗(yàn)方法

      1.2.1 樣品溶液及試劑的制備

      1.2.1.1 三味豆蔻湯散水煎煮藥液的制備

      依據(jù)三味豆蔻湯散臨床使用劑量(3 g/人/天,人體重量標(biāo)準(zhǔn)為60 kg)設(shè)置了三個(gè)劑量組,低劑量組(400 mg/kg)、中劑量組(600 mg/kg)、高劑量組:(700 mg/kg).

      稱取三味豆蔻湯散0.8、1.2、1.4 g,分別溶于50 mL水中,文火煎煮10 min,配制成低劑量、中劑量、高劑量三組的三味豆蔻湯散水煎煮液.

      1.2.1.2 戊巴比妥鈉溶液的制備

      分別稱取戊巴比妥鈉40、55 mg 溶于10 mL滅菌注射用水中,配制得40、55 mg/kg的戊巴比妥鈉溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用).

      1.2.1.3 地西泮溶液的制備

      取地西泮溶液2 mL,加入20 mL滅菌注射用水中稀釋,配制得2.0 mg/kg的地西泮溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用).

      1.2.2 分組與給藥

      取50只小鼠隨機(jī)分成五組,分別為陽(yáng)性對(duì)照組、空白對(duì)照組、三味豆蔻湯散低劑量組、三味豆蔻湯散中劑量組、三味豆蔻湯散高劑量組.每組10只,雌雄各半,各藥物組小鼠分別按0.2 mL/10 g的給藥標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行灌胃給藥,每日1次,連續(xù)給藥7 d,空白對(duì)照組小鼠灌胃等容量生理鹽水.

      1.2.3 三味豆蔻湯散對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)次數(shù)影響實(shí)驗(yàn)

      測(cè)試前將ZZ-6自主活動(dòng)儀預(yù)熱30 min.各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物和空白對(duì)照組按照相應(yīng)劑量進(jìn)行灌胃,陽(yáng)性對(duì)照組在1~6 d期間內(nèi)灌胃等體生理鹽水,第7 d一次性灌胃給予2.0 mg/kg的地西泮溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用),藥溶容積為0.2 mL/10 g[3-6].末次給藥30 min后將各組小鼠放入ZZ-6自主活動(dòng)儀內(nèi),待小鼠適應(yīng)5 min后[7],開(kāi)始記錄小鼠 30、60、90、120 min內(nèi)活動(dòng)次數(shù).

      1.2.4 閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠實(shí)驗(yàn)

      1.2.4.1 戊巴比妥鈉閾下劑量的確定

      戊巴比妥鈉閾下劑量為使90%~100%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥鈉的最大劑量,經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定小鼠戊巴比妥鈉閾下睡眠劑量為40 mg/kg.

      1.2.4.2 閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響

      實(shí)驗(yàn)按1.2.2項(xiàng)下正常灌胃7 d,5個(gè)處理組于第7 d給予三味豆蔻湯散30 min后腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉40 mg/kg(臨用前現(xiàn)配),戊巴比妥鈉劑量根據(jù)小鼠體質(zhì)量計(jì)算(0.1 mL/10 g小鼠體質(zhì)量),觀察并記錄給予閾下劑量戊巴比妥鈉后30 min內(nèi)各組小鼠入睡的只數(shù)(以30 min內(nèi)翻正反射消失達(dá)1 min以上者為入睡),計(jì)算各組小鼠睡眠發(fā)生百分率(入睡率)[8,9].

      入睡率(%)=入睡動(dòng)物數(shù)/動(dòng)物總數(shù)×100%

      1.2.5 閾上劑量戊巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

      1.2.5.1 戊巴比妥鈉閾上劑量的確定

      戊巴比妥鈉閾上劑量為使小鼠100%入睡,但又不使睡眠時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的劑量,經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定小鼠戊巴比妥鈉閾上睡眠劑量55 mg/kg.

      1.2.5.2 閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的影響

      實(shí)驗(yàn)方法同1.2.4.2項(xiàng),5個(gè)處理組于第7 d給藥30 min后腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉55 mg/kg(臨用前現(xiàn)配),戊巴比妥鈉劑量根據(jù)小鼠體質(zhì)量計(jì)算(0.1 mL/10 g小鼠體質(zhì)量).以小鼠翻正反射消失為指標(biāo),記錄小鼠睡眠潛伏期(從給藥到小鼠翻正反射消失的時(shí)間)與睡眠持續(xù)時(shí)間(小鼠翻正反射消失至恢復(fù)所需的時(shí)間)[10-12].

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,計(jì)量資料采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn).P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

      2 結(jié)果

      2.1 三味豆蔻湯散對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)次數(shù)影響實(shí)驗(yàn)

      為確定三味豆蔻湯散的顯效時(shí)間,在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前以中劑量(即人臨床用藥等效劑量)進(jìn)行了小鼠預(yù)實(shí)驗(yàn).發(fā)現(xiàn)三味豆蔻湯散的顯效時(shí)間大概是用藥后的60~90 min內(nèi),所以實(shí)驗(yàn)以小鼠的60~90 min內(nèi)的活動(dòng)次數(shù)為依據(jù).

      表1 三味豆蔻湯散不同劑量對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響(x±s,n=10)

      注:與空白對(duì)照組相比,*P<0.05;**P<0.01.

      如表1所示,與空白對(duì)照組相比,三味豆蔻湯散中、高劑量組小鼠的活動(dòng)次數(shù)和站立次數(shù)均明顯下降,說(shuō)明該藥物對(duì)小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)有明顯抑制作用,其鎮(zhèn)靜效果明顯.高劑量組與中劑量組相比,高劑量組的小鼠的活動(dòng)次數(shù)和站立次數(shù)未出現(xiàn)顯著下降,兩組無(wú)顯著性差異(P>0.05).

      2.2 閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響

      如表2所示,與空白對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組小鼠入睡率明顯增加(P<0.01);三味豆蔻湯散水提物三個(gè)劑量組均能不同程度增加戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠入睡只數(shù),其中三味豆蔻湯散中、高劑量組效果較好.

      表2 閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率的影響(x±s,n=10)

      注:與空白對(duì)照組(生理鹽水)相比,*P<0.05;**P<0.01

      2.3 閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

      如表3所示,與空白對(duì)照組相比,三味豆蔻湯散中、高劑量組小鼠睡眠潛伏期均明顯縮短,睡眠時(shí)間明顯延長(zhǎng),說(shuō)明三味豆蔻湯散水提物與戊巴比妥鈉有協(xié)同作用.高劑量組與中劑量組之間小鼠睡眠時(shí)間沒(méi)有顯著性差異.

      表3 閾上劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響(x±s,n=10)

      注:與空白對(duì)照組相比*P<0.05,**P<0.01

      3 討論

      隨著生活節(jié)奏的加快,失眠問(wèn)題困擾著越來(lái)越多的人,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療失眠的常見(jiàn)藥物主要包含苯二氮卓類、非苯二氮卓類、具有鎮(zhèn)靜作用的抗抑郁藥等幾種類型,長(zhǎng)時(shí)間服用易產(chǎn)生依賴性、耐受性、戒斷癥狀、反跳作用等各種不良反應(yīng).故從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)經(jīng)典復(fù)方和中草藥中發(fā)現(xiàn)具有治療失眠功效的藥物,對(duì)提高人們健康水平顯得非常重要.藏醫(yī)學(xué)認(rèn)為,原發(fā)性失眠是由于“三因”中“隆”的偏升而引起,而“隆” 具有“寒”、“輕”、“動(dòng)”等屬性,故通過(guò)甘味藥和辛味藥等具有“熱”、“膩”等效能的藥物相互配伍來(lái)抑制“隆”的“寒”、“輕”、“動(dòng)”屬性.三味豆蔻湯散是以此理論配伍的經(jīng)典復(fù)方,《四部醫(yī)典》曰:“豆蔻、孜然芹、蓽拔三味藥研細(xì),用牛奶煎煮成湯,可治療失眠、不寐”[13].組成三味豆蔻湯散的白豆蔻味辛、苦,蓽茇味辛、甘,孜然味甘、辛,依據(jù)藏醫(yī)理論,甘味藥具有“重”、“膩”、“鈍”等藥性,辛味藥具有“熱”、“銳”等藥性,因此三味豆蔻湯散主要以其“熱”、“膩”、“重”等藥性來(lái)抑制 “隆”的“輕”、“寒”等特性來(lái)治療失眠癥,這體現(xiàn)了藏醫(yī)治療失眠是以平和“三因”為主的理念.

      通過(guò)對(duì)藏藥三味豆蔻湯散鎮(zhèn)靜催眠藥效的研究,藏藥三味豆蔻湯散可降低小鼠自發(fā)活動(dòng)的次數(shù)、增加閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率,延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三味豆蔻湯散具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用.中、高劑量組組間無(wú)顯著差異,中劑量的給藥量與臨床常用劑量和《四部醫(yī)典藏藥配方大全》[14]中記載的三味豆蔻湯散的服用劑量大致相同,反映出臨床用藥劑量的合理性.組成三味豆蔻湯散的三種藥中含有桉油精、枯茗醛等揮發(fā)油類和胡椒堿、蓽茇明寧堿等生物堿類有效成分,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道三味豆蔻湯散中的揮發(fā)油及生物堿等都具有抗失眠、抗驚厥等作用[15-18],充分佐證了藏藥三味豆蔻湯散的臨床用藥合理性,但是三味豆蔻湯散鎮(zhèn)靜催眠的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究.

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