張翠蘋　王君　李媛媛　王瑩瑩

[摘要]目的 探討細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（CD147）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）及基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）在扁平苔癬皮損組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 采用免疫組化方法檢測并比較40例扁平苔癬皮損及30例正常皮膚組織中CD147、MMP-3、MMP-7的表達(dá)。結(jié)果 扁平苔癬皮損組織中CD147、MMP-7的表達(dá)高于對照組（Z=-3.267、-2.331，P<0.05），且兩者表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.587，P<0.05）;兩組MMP-3表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 MMP-7、CD147在扁平苔癬皮損組織中表達(dá)上調(diào)，兩者可能在扁平苔癬的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。

[關(guān)鍵詞] 扁平苔癬;Basigin;基質(zhì)金屬蛋白酶3;基質(zhì)金屬蛋白酶7;免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R758.65[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A[文章編號] 2096-5532（2020）04-0455-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.085

[網(wǎng)絡(luò)出版] http：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20200519.1445.015.html;2020-05-19 17：19

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF EXTRACELLULAR MATRIX METALLOPROTEINASE INDUCER， MATRIX METALLOPROTEINASE-3， AND MATRIX METALLOPROTEINASE-7 IN SKIN LESIONS OF LICHEN PLANUS

ZHANG Cuiping， WANG Jun， LI Yuanyuan， WANG Yingying

（Department of Dermatology， Affiliated Hospital of Qingdao University， Qing-dao 266003， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the expression and clinical significance of extracellular matrix metalloproteinase inducer （CD147）， matrix metalloproteinase-3 （MMP-3）， and matrix metalloproteinase-7 （MMP-7） in skin lesions of lichen planus （LP）.Methods Immunohistochemistry was used to measure and compare the expression of CD147， MMP-3， and MMP-7 in 40 cases of lichen planus lesions and 30 cases of normal skin tissues. Results Lichen planus lesions had significantly higher expression of both CD147 and MMP-7 than the control group （Z=-3.267，-2.331;P<0.05）， and the expression of CD147 and MMP-7 was positively correlated with each other （r=0.587，P<0.05）. Lichen planus lesions also had higher expression of MMP-3 than the control group， but the difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion The expression of MMP-7 and CD147 is up-regulated in skin lesions of lichen planus; MMP-7 and CD147 may play important roles in the pathogenesis of lichen planus.

[KEY WORDS] lichen planus; Basigin; matrix metalloproteinase 3; matrix metalloproteinase 7; immunohistochemistry

扁平苔癬是一種發(fā)生在皮膚、黏膜、指（趾）甲的慢性炎癥性皮膚病，主要病理表現(xiàn)為基底細(xì)胞液化變性及真皮上部界面炎癥反應(yīng)帶。其病因及發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明了。近年來國內(nèi)外關(guān)于口腔扁平苔癬組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）表達(dá)的研究較多，結(jié)果認(rèn)為MMPs作為蛋白酶參與了細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解，可能在扁平苔癬基底細(xì)胞及基底膜損傷中發(fā)揮重要作用[1-3]。作為MMPs的上游調(diào)控因子[4]，CD147可誘導(dǎo)MMPs的活化并導(dǎo)致腫瘤的侵襲[5-7]。目前，國內(nèi)外對于皮膚扁平苔癬中MMP-3、MMP-7、CD147表達(dá)的研究不多。本文檢測扁平苔癬皮損組織中CD147、MMP-3、MMP-7的表達(dá)情況，探討三者間關(guān)系及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年3月—2019年3月，選取我科收治、經(jīng)組織病理檢查確診為皮膚扁平苔癬病人的組織標(biāo)本40例，其中男20例，女20例;年齡22～69歲，平均47.40歲;病程1月～10年，平均13.9月;14例取材于軀干，26例取材于四肢;所有病人均排除其他系統(tǒng)性疾病，均未系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素治療。同期選取我院美容外科手術(shù)切除的正常皮膚組織標(biāo)本30例作為正常對照組，其中男12例，女18例;年齡為17～70歲，平均32.20歲;15例取材于軀干，15例取材于四肢;均排除其他系統(tǒng)性疾病。兩組年齡、性別及取材部位差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。所取標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、切片。

1.2 主要試劑

一抗：包括兔抗人 MMP-3多克隆抗體、兔抗人 MMP-7多克隆抗體、兔抗人 CD147多克隆抗體（均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司）;通用型二抗PV-6001、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）試劑、免疫組化筆（北京中杉金橋公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

將標(biāo)本切片置于64 ℃的烤片機(jī)上60 min后，經(jīng)脫蠟、抗原修復(fù)、體積分?jǐn)?shù)0.03過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶、加一抗（CD147、MMP-3、MMP-7，滴度分別為1∶300、1∶150、1∶150）、加二抗PV-6001、DAB顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、中性樹膠封片等步驟，光鏡下觀察染色情況。

1.4 結(jié)果判斷

CD147、MMP-3、MMP-7陽性細(xì)胞染色淡黃色至棕褐色。光鏡下，每張切片隨機(jī)選取5個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞。染色結(jié)果依據(jù)半定量法進(jìn)行判斷。染色強(qiáng)度評分：基本不著色0分，淡黃色為1分，棕褐色為2分;陽性細(xì)胞百分比評分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。以細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比評分的乘積判定結(jié)果：0～1分為陰性，2～3分為陽性，4分及其以上為強(qiáng)陽性，分別用（-）、（+）、（）表示。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料組間比較均采用曼-惠特尼秩和檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

扁平苔癬皮損組織中CD147陽性染色主要表現(xiàn)為表皮基底層、棘層、顆粒層細(xì)胞膜和細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒，而正常對照組表皮基底層、棘層及顆粒層淺著色。扁平苔癬皮損組織中MMP-3陽性染色主要表現(xiàn)為表皮基底層細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒，正常對照組表皮基底層細(xì)胞漿亦出現(xiàn)MMP-3陽性染色。扁平苔癬皮損組織MMP-7陽性染色表現(xiàn)為表皮基底層、棘層及顆粒層細(xì)胞漿和（或）細(xì)胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒，而正常對照組表皮基底層、棘層及顆粒層淺著色（圖1）。扁平苔癬組CD147、MMP-7表達(dá)高于正常對照組，差異具有顯著意義（Z=-3.267、-2.331，P<0.05）;兩組MMP-3表達(dá)差異無顯著性（P>0.05）。見表1。Spearman相關(guān)分析顯示，扁平苔癬皮損組織中MMP-7與CD147表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.587，P<0.05）。

3 討論

MMPs屬于鋅依賴性內(nèi)肽酶家族，能夠降解ECM的多種成分[8-10]，正常表達(dá)水平的MMPs參與生長發(fā)育過程中ECM的重構(gòu)以及細(xì)胞的增殖、遷移和黏附等，參與機(jī)體多種生理功能的調(diào)控;而MMPs的異常表達(dá)往往與炎癥、腫瘤以及心血管疾病有關(guān)[11-14]。既往研究顯示，MMP-2、MMP-9與扁平苔癬的發(fā)病機(jī)制相關(guān)[15-18]。作為MMPs家族的重要成員，MMP-3、MMP-7是否參與了扁平苔癬發(fā)病尚不清楚。MMP-3能夠降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原及纖連蛋白、蛋白聚糖、層粘連蛋白、明膠等，不僅在破壞細(xì)胞間橋、導(dǎo)致細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，還能激活前體MMP-1、前體MMP-9[19]。有研究結(jié)果顯示，MMP-3表達(dá)上調(diào)與口腔扁平苔癬的發(fā)病機(jī)制相關(guān)[20-21];其表達(dá)水平與口腔扁平苔癬的嚴(yán)重程度有關(guān)[22]，但其與皮膚扁平苔癬嚴(yán)重程度是否相關(guān)有待進(jìn)一步研究。GUNDUZ等[1]研究顯示，扁平苔癬皮損組織中MMP-2、MMP-3及纖連蛋白表達(dá)缺失，而正常皮膚組織上述因子尤其是MMP-3均有表達(dá)，主要表達(dá)在基底細(xì)胞層，認(rèn)為上述因子表達(dá)缺失與扁平苔癬皮損組織炎癥反應(yīng)有關(guān)。本文研究結(jié)果顯示，皮膚扁平苔癬中MMP-3表達(dá)雖有上調(diào)，但與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。分析其原因可能為：皮膚扁平苔癬與口腔扁平苔癬發(fā)病機(jī)制可能存在差異，或與研究樣本量大小、染色方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)，其具體原因有待大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。

MMP-7也屬于MMPs家族中重要的成員之一，是上皮特異性產(chǎn)物，有較強(qiáng)降解Ⅳ膠原的作用，并與上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)。有研究表明，MMP-3與MMP-7在正?？谇火つ?、口腔扁平苔癬及口腔鱗癌

中的表達(dá)逐漸增高，MMP-3、MMP-7在侵襲過程中表達(dá)上調(diào)，與侵襲性相關(guān)[23-25]。這或許為甄別口腔扁平苔癬的惡變提供了可能。還有研究顯示，口腔扁平苔癬口腔黏膜上皮與結(jié)締組織MMP-7的表達(dá)高于正常口腔黏膜[23]，MMP-7與組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）的比值高于對照組[24]，認(rèn)為MMP-7及MMP-7/TIMP的表達(dá)失調(diào)可能參與了口腔扁平苔癬的發(fā)病。本文研究顯示，MMP-7在扁平苔癬皮損組織的基底層、棘層及顆粒層均有表達(dá)，并且MMP-7的表達(dá)明顯高于正常對照組，表明MMP-7可能在扁平苔癬發(fā)病中發(fā)揮重要作用。

CD147又稱細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，是一種跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白家族，最初從惡性腫瘤細(xì)胞的質(zhì)膜中分離得到[26]，主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞、表皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等[27]，可誘導(dǎo)多種MMPs的活化，包括MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9等[5]，在腫瘤進(jìn)展中起重要作用[28-29]。有研究結(jié)果表明，CD147能刺激MMPs的分泌，但對TIMPs并不產(chǎn)生影響，導(dǎo)致MMPs與TIMPs的失衡，從而導(dǎo)致基底膜與腫瘤外基質(zhì)的降解，引起腫瘤的侵犯與轉(zhuǎn)移[30]。一項對于甲狀腺濾泡癌（FTC）的研究顯示，CD147、MMP-3、MMP-7、MMP-9在人FTC組織中表達(dá)上調(diào)，并且培養(yǎng)的PTC-131細(xì)胞中MMP-3、MMP-7、MMP-9的表達(dá)依賴于CD147的調(diào)節(jié)[5]。本文研究結(jié)果顯示，與正常對照組比較，扁平苔癬皮損組織中MMP-3的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，MMP-7、CD147表達(dá)上調(diào)，且MMP-7、CD147表達(dá)呈正相關(guān)，推測CD147可能通過誘導(dǎo)MMP-7的活化，促進(jìn)其分泌而協(xié)同參與扁平苔癬的發(fā)病，其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，扁平苔癬皮損組織中的CD147及MMP-7表達(dá)上調(diào)，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者在扁平苔癬發(fā)病中可能發(fā)揮重要作用，至于兩者是否直接導(dǎo)致扁平苔癬的發(fā)病需進(jìn)一步研究證實(shí)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]GUNDUZ K， DEMIRELI P， INANIR I， et al. Expression of matrix metalloproteinases （MMP-2， MMP-3， and MMP-9） and fibronectin in lichen planus[J].? Journal of Cutaneous Pathology， 2006，33（8）：545-550.

[2]PAULUSOVA V， LACO J， DRZHAL I， et al. Expression of matrix metalloproteinase 9 in patients with oral lichen planus[J].? Acta Medica （Hradec Kralove）/Universitas Carolina， Facultas Medica Hradec Kralove， 2012，55（1）：23-26.

[3]SINGH P， GROVER J， BYATNAL A A， et al. Elucidating the role of Cyclooxygenase-2 in the pathogenesis of oral lichen planus-an immunohistochemical study with supportive histochemical analysis[J].? Journal of Oral Pathology & Medicine， 2017，46（5）：381-386.

[4]WENG Yingzheng， CHEN Ting， REN Jianfei， et al. The association between extracellular matrix metalloproteinase indu-cer polymorphisms and coronary heart disease： a potential way to predict disease[J].? DNA and Cell Biology， 2020，39（2）：244-254.

[5]YOKO O， SHIBATA N， OKAMOTO T， et al. The role of CD147 in the invasiveness of follicular thyroid carcinoma cells[J].? Thyroid， 2012，22（4）：383-394.

[6]RODRIGUEZ C M， GILARDONI M B， REMEDI M M， et al. Tumor-stroma interaction increases CD147 expression in neoplastic B lymphocytes in chronic lymphocytic leukemia[J].? Blood Cells Molecules and Diseases， 2020，82：102405.

[7]LIAN Chengxiang， GUO Ye， ZHANG Jianglin， et al. Targeting CD147 is a novel strategy for antitumor therapy[J].? Current Pharmaceutical Design， 2017，23（29）：4410-4421.

[8]GUO Lin， HAO Ruihu， TIAN Fengde， et al. Interferon regulatory factor 5 （IRF5） regulates the expression of matrix me-talloproteinase-3 （MMP-3） in human chondrocytes[J].? International Immunopharmacology， 2018，55：231-236.

[9]浦光瑞，張虹. 基質(zhì)金屬蛋白酶在口腔扁平苔癬、白斑及鱗癌中的研究進(jìn)展[J].? 大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2013，35（2）：193-196.

[10]楊雪娜，熊詠民. 基質(zhì)金屬蛋白酶在骨關(guān)節(jié)疾病中的研究進(jìn)展[J].? 國外醫(yī)學(xué)（醫(yī)學(xué)地理分冊）， 2019，40（4）：470-474.

[11]PAYERAS M R， CHERUBINI K， FIGUEIREDO M A， et al. Oral lichen planus： focus on etiopathogenesis[J].? Archives of Oral Biology， 2013，58（9）：1057-1069.

[12]KUSUMAWADEE U， NATTISA N， BOON-EK Y， et al. Ethanolic extract of ocimum sanctum leaves reduced invasion and matrix metalloproteinase activity of head and neck cancer cell lines[J].? Asian Pacific Journal of Cancer Prevention， 2020，21（2）：363-370.

[13]LI Aoyu， YU Hua， LI Rongfeng， et al. Inhibitory effect of metalloproteinase inhibitors on skin cell inflammation induced by jellyfish nemopilema nomurai nematocyst venom[J].? To-xins， 2019，11（3）：156.

[14]周雪. 基質(zhì)金屬蛋白酶在血管炎癥中的作用[J].? 國際兒科學(xué)雜志， 2014，41（3）：253-256.

[15]杜杰，王君，趙涵，等. MMP-9，TIMP-1及ETS-1在扁平苔癬中的表達(dá)[J].? 中國皮膚性病學(xué)雜志， 2015，29（6）：569-571.

[16]徐經(jīng)琦，王君，史同新，等. 扁平苔癬HIF-1α、GLUT-1及MMP-2表達(dá)及意義[J].? 青島大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）， 2019，55（3）：350-353.

[17]CARNELIO S， AGARWAL N， RODRIGUES G. Immunohistochemical and clinical significance of matrix metalloprotei-nase-2 and its inhibitor in oral lichen planus[J].? Journal of Oral and Maxillofacial Pathology， 2019，23（3）：476.

[18]萬慧穎，徐敏燕，謝震，等. 扁平苔癬皮損中基質(zhì)金屬蛋白酶-9、半胱氨酸蛋白酶-3的表達(dá)[J].? 四川醫(yī)學(xué)， 2018，39（8）：869-872.

[19]FARZIN M， MARDANI M， GHABANCHI J， et al. Serum level of matrix metalloproteinase-3 in patients with oral lichen planus[J].? Iranian Red Crescent Medical Journal， 2012，14（1）：10-13.

[20]NOSRATZEHI T， ALIJANI E， MOODI M. Salivary MMP-1， MMP-2， MMP-3 and MMP-13 levels in patients with oral lichen planus and squamous cell carcinoma[J].? Asian Pacific Journal of Cancer Prevention， 2017，18（7）：1947-1951.

[21]MIRZAII-DIZGAH I， AGHA-HOSSEINI F， MAHBOOBI N， et al. Serum and saliva MMP-3 in patients with OLP and oral SCC[J].? The Journal of Contemporary Dental Practice， 2015，16（2）：107-111.

[22]MAZZARELLA N， FEMIANO F， GOMBOS F， et al. Matrix metalloproteinase gene expression in oral lichen planus： erosive vs. reticular forms[J].? Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology， 2006，20（8）：953-957.

[23]LI Tiejun， JUN Cui. COX-2， MMP-7 expression in oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma[J].? Asian Pacific Journal of Tropical Medicine， 2013，6（8）：640-643.

[24]RUBACI A H， HAKKI O K， OLGAC V， et al. The roles of matrix metalloproteinases-2， -7， -10 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in the pathogenesis of oral lichen planus[J].? Journal of Oral Pathology & Medicine， 2012，41（9）：689-696.

[25]MUNIZ J， BIBIANO B， BEGHINI M， et al. Galectin-9 as an important marker in the differential diagnosis between oral squamous cell carcinoma， oral leukoplakia and oral lichen planus[J].? Immunobiology， 2015，220（8）：1006-1011.

[26]BISWAS C. Tumor cell stimulation of collagenase production by fibroblasts[J].? Biochemical and Biophysical Research Communications，1982，109（3）：1026-1034.

[27]王澄儀，謝明，焦婷. 細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子在炎癥發(fā)生發(fā)展中的作用[J].? 口腔生物醫(yī)學(xué)， 2018，9（2）：95-101.

[28]LUCCHETTI D， COLELLA F， PERELLI L， et al. CD147 promotes cell small extracellular vesicles release during colon cancer stem cells differentiation and triggers cellular changes in recipient cells[J].? Cancers， 2020，12（2）：260.

[29]GUO W T， ABUDUMIJITI H， XU L X， et al. CD147 promotes cervical cancer migration and invasion by up-regulating fatty acid synthase expression[J].? International Journal of Clinical and Experimental Pathology， 2019，12（12）：4280-4288.

[30]陳加明，仝林虎，王夢霖. CD147與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].? 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘， 2017，17（99）：90-93.

（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）

[收稿日期]2019-09-23; [修訂日期]2020-02-17

[基金項目]山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃（2016WS0281）

[第一作者]張翠蘋（1992-），女，碩士研究生。

[通信作者]王君（1971-），女，碩士，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師。E-mail：junwangqd@126.com。