林可可，荊瀟寬，楊 可，李向華**，李炎坤，2**

(1.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學(xué)院糖尿病心腦血管病變湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

炎性疼痛是臨床上最常見(jiàn)和最難治的慢性痛，組織損傷引起的慢性炎癥和有害刺激引起的繼發(fā)性炎癥均可導(dǎo)致炎性疼痛的發(fā)生。福爾馬林常用于建立炎性疼痛模型，腹腔注射可以產(chǎn)生雙相疼痛反應(yīng)，第一相疼痛主要由激活初級(jí)痛覺(jué)傳入神經(jīng)引起，第二相疼痛至少部分涉及炎癥引起的脊髓背角中樞敏化[1]。

青藤堿(sinomenine，SIN)是從傳統(tǒng)中藥青風(fēng)藤中提取分離的一種活性生物堿，具有廣泛的藥理作用，如免疫抑制[2]、抗炎[3]、抗腫瘤[4]、神經(jīng)保護(hù)[5]、抗抑郁[6]、抗焦慮[7]等。但其對(duì)福爾馬林等致炎物質(zhì)引起的炎性疼痛目前研究尚不完全清楚。因此，我們主要研究青藤堿對(duì)5%福爾馬林所致小鼠炎性痛的鎮(zhèn)痛作用，以期促進(jìn)青藤堿的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性昆明小鼠26只，體質(zhì)量18～22g，購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(鄂)2015-0018。飼養(yǎng)環(huán)境為22℃～24℃，濕度50%～60%，光照晝夜交替，自由攝食和飲水。

1.2 試劑與藥品

青藤堿購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司(純度為97%)，用生理鹽水溶解配成4mg/mL、8mg/mL溶液備用。福爾馬林溶液(即37%～40%的甲醛溶液)用生理鹽水稀釋為5%的福爾馬林溶液，臨用現(xiàn)配。

1.3 儀器

攝像設(shè)備為深圳市佳琪圣科技有限公司產(chǎn)品(型號(hào)：Rpeso 008)。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組與給藥

動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組(8只)、福爾馬林模型組(6只)、青藤堿40mg/kg組(6只)、青藤堿80mg/kg組(6只)。采用小鼠足底皮下注射5%福爾馬林10μL/10g的方法制備炎性疼痛模型，青藤堿各劑量組于造模前30min分別腹腔注射青藤堿40或80mg/kg，模型組在造模前30min腹腔注射相應(yīng)體積生理鹽水，正常對(duì)照組分別腹腔和足底注射相應(yīng)體積的生理鹽水。

1.5 行為學(xué)測(cè)試

將小鼠放入透明的實(shí)驗(yàn)箱中，實(shí)驗(yàn)箱底部放置攝像頭記錄小鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中爪子的反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)前將小鼠置于實(shí)驗(yàn)箱中適應(yīng)30min，各組小鼠足底注射生理鹽水(對(duì)照組)或福爾馬林溶液(模型組和青藤堿組)后立即放入實(shí)驗(yàn)箱室中，讓其自由活動(dòng)，記錄各組小鼠1h內(nèi)的疼痛反應(yīng)(以小鼠出現(xiàn)舔/摩擦注射部位或抬爪行為為判斷標(biāo)準(zhǔn))，并統(tǒng)計(jì)各組每5min內(nèi)出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的總時(shí)間以及一相疼痛反應(yīng)和二相疼痛反應(yīng)的總時(shí)間。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 一般情況

正常對(duì)照組小鼠行動(dòng)正常，探索活動(dòng)較多，注射爪無(wú)紅腫情況出現(xiàn)；模型組小鼠疼痛反應(yīng)明顯增多，探索活動(dòng)減少，注射爪明顯紅腫；青藤堿給藥組小鼠與模型組相比，疼痛反應(yīng)明顯減輕，探索活動(dòng)明顯增加。

2.2 青藤堿對(duì)福爾馬林所致疼痛反應(yīng)時(shí)間過(guò)程曲線的影響

各組小鼠給藥前活動(dòng)無(wú)明顯差異。與對(duì)照組相比，模型組小鼠出現(xiàn)舔/摩擦注射部位或抬爪等疼痛反應(yīng)明顯增加，且呈典型的雙相反應(yīng)(0～10min為一相反應(yīng)，10～60min為二相反應(yīng))，表明模型制備成功。與模型組相比，青藤堿各劑量組疼痛反應(yīng)明顯減少，且具有劑量依賴性。結(jié)果如圖1所示。

圖1 青藤堿對(duì)福爾馬林所致疼痛反應(yīng)時(shí)間過(guò)程曲線的影響

2.3 青藤堿分別對(duì)福爾馬林所致兩相疼痛反應(yīng)的影響

在一相反應(yīng)中，與對(duì)照組相比，模型組小鼠疼痛反應(yīng)顯著增加(P﹤0.001)；與模型組相比，青藤堿40mg/kg和 80mg/kg組疼痛反應(yīng)均顯著減輕(P﹤0.01和P﹤0.001)。在二相反應(yīng)中，與對(duì)照組相比，模型組的痛反應(yīng)顯著增加(P﹤0.01)；與模型組相比，青藤堿40mg/kg組疼痛反應(yīng)雖然有所減輕，但沒(méi)有顯著性差異，而青藤堿80mg/kg組疼痛反應(yīng)顯著減輕(P﹤0.05)。結(jié)果如圖2所示。

與對(duì)照組相比，**P﹤0.01，***P﹤0.001；與模型組相比，#P﹤0.05，##P﹤0.01，###P﹤0.001

3 討 論

在正常情況下，急性炎癥對(duì)保護(hù)機(jī)體免受病原體入侵、促進(jìn)組織重塑和修復(fù)至關(guān)重要。而長(zhǎng)時(shí)間的慢性炎癥不僅對(duì)機(jī)體沒(méi)有任何益處，反而會(huì)導(dǎo)致組織損傷和疼痛。促炎介質(zhì)如細(xì)胞因子、趨化因子等在炎癥部位釋放，能夠使周?chē)从X(jué)神經(jīng)元敏化，導(dǎo)致慢性疼痛[8]。皮膚就是最容易引起炎性疼痛的部位之一，本實(shí)驗(yàn)采用福爾馬林足底皮下注射，注射后1h內(nèi)，小鼠出現(xiàn)明顯的雙相疼痛反應(yīng)，提示福爾馬林誘導(dǎo)皮膚炎性疼痛模型建立成功。

青藤堿是從傳統(tǒng)中藥青風(fēng)藤中提取分離的一種生物堿，在臨床上已被應(yīng)用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療。青藤堿是嗎啡的類似物，研究表明其不僅具有較好的抗炎、免疫抑制、抗腫瘤等作用，對(duì)炎性疼痛[9]、糖尿病性神經(jīng)痛[10]、術(shù)后疼痛[11]、癌性骨痛[12]等也有著較好的鎮(zhèn)痛作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，青藤堿可顯著減少5%福爾馬林誘發(fā)的一相和二相疼痛行為，且作用呈劑量依賴性。以上表明，青藤堿可有效抑制福爾馬林誘導(dǎo)的炎性疼痛，提示青藤堿對(duì)炎性疼痛的治療有較好的應(yīng)用前景，但其鎮(zhèn)痛機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。