唐潔霞蔡建升陳全暉陳世藝龍冰霜魏 怡雷明智喻國(guó)旗于冬梅覃 健王 劍張志勇*

(1.廣西醫(yī)科大學(xué),南寧 530021;2.廣西區(qū)域高發(fā)疾病預(yù)防與控制重點(diǎn)研究實(shí)驗(yàn)室,南寧 530021)

眾所周知,高脂飲食可以導(dǎo)致高脂血癥,而高脂血癥是導(dǎo)致心血管疾病的首要危險(xiǎn)因素之一。茶是世界上廣泛流行的一種具有降脂功能的飲料,包括綠茶、紅茶等不同種類(lèi)的茶。油茶是一種以綠茶為主料,油、姜、蒜等為輔料制作的飲料,在中國(guó)廣西壯族自治區(qū)西北部十分流行。已有研究表明油茶具有降血脂功效[1-2],但是油茶預(yù)防血脂升高的作用還未被發(fā)現(xiàn)。因此,我們給予大鼠高脂飲食的同時(shí)灌胃油茶,研究油茶預(yù)防血脂升高的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40只SPF級(jí)雄性SD大鼠(240～260 g)購(gòu)自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(桂)2014-0002],飼養(yǎng)于廣西醫(yī)科大學(xué)(廣西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)[SYXK(桂)2014-0003],隨機(jī)分為5組(每組8只),適應(yīng)性喂養(yǎng)2周。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批(201904037),并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 主要試劑

油茶粉從廣西某食品公司購(gòu)買(mǎi)。其組成為35%綠茶、28%食用油,其余為姜、蒜、蔥等。先煮開(kāi)水,稱(chēng)量1.7850 g、8.9250 g、17.8500 g 油茶粉,分別加入50 mL開(kāi)水,用玻璃棒攪拌10 min直至均勻,得到低、中、高劑量油茶。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

第1組大鼠作為正常對(duì)照(Ctrl),給予正常飲食(ND,10%脂肪供能比,MD12031),灌胃水。其余組都給予高脂飲食(HFD,60%脂肪供能比,MD12033),第2組灌胃水(HFD),第 3、4、5組分別灌胃低、中、高劑量油茶(HFD+L,HFD+M,HFD+H)。灌胃體積為8 mL/kg,低、中、高濃度油茶的綠茶劑量分別為 0.1、0.5、1.0 g/(kg·bw),分別相當(dāng)于茶葉人體推薦量的1倍、5倍、10倍,油茶成分的含量由廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心檢測(cè)。所有的大鼠都在SPF屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng),自由攝食飲水。灌胃4周后,停止灌胃2周。

在實(shí)驗(yàn)的第 2、3、4、5、6 周末頜下靜脈取血,室溫中靜置50 min,離心(3550 r/min,10 min),棄乳糜層和沉淀,取血清,立刻于4℃保存,迅速轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。在檢測(cè)之前,血清從-80℃轉(zhuǎn)移到4℃一個(gè)晚上,接著用移液槍吹打混勻,血清 TC、TG、LDLC、HDLC、AST、ALT含量使用上海執(zhí)誠(chéng)試劑盒(CH8717、 TR7534、 CH7738、 CH7736、 AL7930、AS7938),經(jīng)全自動(dòng)生化分析儀(7100,日立)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 油茶成分的含量

經(jīng)廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研究中心檢測(cè),低濃度油茶含有水分(83.5 g/100 g),茶多酚(0.41 g/100 g),姜辣素(24.4 mg/100 g),大蒜素(＜0.06 mg/100 g)和脂質(zhì)(5.60 g/100 g)。推算中劑量油茶含有茶多酚(2.05 g/100 g),姜辣素(122.00 mg/100 g),脂質(zhì)(28.00 g/100 g)。推算高劑量油茶含有茶多酚(4.10 g/100 g),姜辣素(244.00 mg/100 g),脂質(zhì)(56.00 g/100 g)。

2.2 體重變化和攝食

實(shí)驗(yàn)期間每周末體重變化如圖1a所示,各組進(jìn)食量變化如圖1b所示,給予油茶4周后體重增加、攝食量和食物利用率如表1所示。初始體重為(265.0±14.4)g,各組間沒(méi)有顯著差異。4周末HFD組體重增加顯著高于Ctrl組(P＜0.01),表明高脂飲食可以顯著增加體重增加。HFD+M組、HFD+H組4周末體重和體重增加都顯著低于HFD組(P＜0.05)(P＜0.01,P＜0.001),表明中、高劑量油茶具有抑制高脂飲食引起的體重增加的作用。從3周末開(kāi)始,HFD+H組體重顯著低于HFD組,其余各組間沒(méi)有顯著差異(圖中未標(biāo)注),表明高劑量油茶可以抑制高脂飲食引起的體重增加,作用可能比中劑量油茶更強(qiáng)。HFD+H組的前4周的攝食量和食物利用率都顯著低于HFD組(P＜0.05,P＜0.01),HFD+M組的食物利用率顯著低于HFD組,表明高劑量油茶可能通過(guò)抑制食欲和降低食物利用率、中劑量油茶可能通過(guò)降低食物利用率來(lái)抑制高脂飲食導(dǎo)致的體重增加。

2.3 血脂譜和肝功能指標(biāo)變化

各時(shí)期各組的血脂譜和肝功能指標(biāo)變化如表2所示。與Ctrl組相比,HFD組的TC、LDL水平顯著增加(TC 2～6周末：P＜0.001,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05;LDLC 2-5周末：P＜0.001,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01),表明高脂飲食會(huì)導(dǎo)致膽固醇水平上升。從2周末起,HFD組的TG高于Ctrl組,在6周末有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),表明高脂飲食會(huì)引起TG水平上升。高脂飲食可以導(dǎo)致混合型高血脂癥。3、4周末,HFD+H組的TG顯著低于HFD組(P＜0.05,P＜0.01),表明高劑量油茶可以抑制高脂飲食引起的TG水平升高。2-4周末,HFD+L組的TC顯著低于HFD組(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01),表明低劑量油茶可以抑制高脂飲食引起的總膽固醇上升。

HFD+H組3周末的TC顯著高于HFD+L組(P＜0.001),與HFD組無(wú)顯著差異(P＞0.05),表明高劑量油茶可能沒(méi)有抑制高脂飲食引起的TC上升的功效。HFD+L組4周末的TG顯著高于HFD+H組(P＜0.05),與HFD組的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),表明低劑量油茶可能沒(méi)有顯著抑制高脂飲食引起的TG上升的功效。

實(shí)驗(yàn)期間,HFD組的AI高于Ctrl組,在5,6周未有顯著意義(2-4周未：P＞0.05;5-6周未：P＜0.05,P＜0.01),油茶組在給藥期間HFD+M、HFD+H組的AI低于HFD組(P＞0.05),HFD+L組的在2、3周末低于 HFD組(P＞0.05),在 4周末高于HFD組(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)期間,HFD組的AAI低于Ctrl組(P＞0.05),油茶組在給藥期間HFD+M、HFD+H組的AAI高于HFD組(P＞0.05),HFD+L組的在2、3周末高于HFD組(P＞0.05),在4周末低于HFD組(P＞0.05)。AI和AAI結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)期間油茶未表現(xiàn)出明顯的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。HFD+L組5周末的AI顯著低于、AAI顯著高于2、3周末(AI：P＜0.05,P＜0.05,AAI：P＜0.01,P＜0.01),HFD+M 組和HD+H組的5周末AI都顯著低于、AAI都顯著高于2、3、4 周末(HFD+M/HFD+H-AI：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05,HFD+M/HFD+H-AAI：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05),即停止灌胃油茶1周時(shí)患動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)顯著上升。另外,HFD組在停止灌胃水1周時(shí)也出現(xiàn)AI顯著下降、AAI顯著上升的情況。

圖1 實(shí)驗(yàn)期間體重和攝食量Note.a,Body weight during the experiment.b,Food intake of each group during the experiment.Figure 1 Body weight and food intake during the experiment

表1 給予油茶4周后體重增加、攝食量和食物利用率(±s,n=7 or 8)Table 1 Body weight gain,food intake and food utilization of rats after 4 weeks of Youcha administration

表1 給予油茶4周后體重增加、攝食量和食物利用率(±s,n=7 or 8)Table 1 Body weight gain,food intake and food utilization of rats after 4 weeks of Youcha administration

注：在同一時(shí)間HFD組與Ctrl組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,**P＜0.01,***P＜0.001。在同一時(shí)間油茶組與HFD組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001。在同一時(shí)間HFD+L組或者HFD+M組和HFD+H組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,&P＜0.05,&&P＜0.01。Note.HFD Group compares with the Ctrl Group at the same weekend,**P ＜0.01,***P＜0.001.Youcha-treated Group compares with the HFD Group at the same weekend,#P ＜0.05,##P ＜0.01,###P ＜0.001.HFD+L Group or HFD+H Group compares with the HFD+H Group at the same weekend,&P ＜0.05,&&P ＜0.01.

組別Groups正常對(duì)照組Ctrl group單純高脂飲食組HFD group低劑量油茶組HFD+L group中劑量油茶組HFD+M group高劑量油茶組HFD+H group體重增加(g)Body weight gain 131.0±51.1 193.0±43.9** 165.3±36.9&& 140.9±29.0## 109.1±26.9###進(jìn)食量(g)Food intake 579.73±51.37 500.67±25.99 504.75±21.42& 471.30±23.19 425.85±4.66#食物利用率(%)Food utilization 25.03±0.06 38.70±8.93*** 32.75±7.17 29.75±5.09# 25.65±6.43##

HFD組的ALT在3、5、6周末顯著高于Ctrl組(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.05),表明高脂飲食可以引起肝損害。實(shí)驗(yàn)期間,與HFD組相比,油茶還未表現(xiàn)出明顯的護(hù)肝作用(P＞0.05)。然而,HFD+L組6周末的 AST、ALT 顯著高于2、3 周末(AST：P＜0.05,P＜0.01,ALT：P＜0.05,P＜0.01),HFD+M 組和 HFD+H組6周末的AST顯著高于2-4周末、ALT顯著高于4、5周末(HFD+M/HFD+H-AST：P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,HFD+M/HFD+H-ALT：P＜0.05,P＜0.01),表明停止灌胃油茶2周后出現(xiàn)明顯的肝損害。另外,停止灌胃水2周后Ctrl組和HFD組也出現(xiàn)明顯的肝損害。

3 討論

高脂飲食會(huì)導(dǎo)致高脂血癥、肝等組織病變[3],還會(huì)導(dǎo)致其他健康問(wèn)題[4]。傳統(tǒng)油茶可以降低高脂模型大鼠的脂肪重量和指數(shù)上升,可以顯著降低血脂水平,特別是TG水平,并且具有劑量-效應(yīng)關(guān)系[1]。然而,制作油茶的傳統(tǒng)工藝較為復(fù)雜[2],現(xiàn)代生活節(jié)奏又快,本實(shí)驗(yàn)使用市場(chǎng)上常見(jiàn)的油茶粉研究其對(duì)高脂飲食的雄性SD大鼠的抑制血脂升高的作用。

表2 2～6周末大鼠的血脂、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平(ˉx±s,n≥5)Table 2 Blood lipid,ALT and AST levels of rats from 2nd weekend to 6th weekend

根據(jù)血清脂質(zhì)水平,在2周末成功建立了高脂血癥模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,低劑量的油茶對(duì)高脂飲食引起的TC、LDLC水平升高有抑制作用,高劑量油茶雖然沒(méi)有表現(xiàn)出抑制膽固醇升高的作用,但是可以顯著抑制TG水平上升。另外,高劑量油茶還能顯著抑制高脂飲食引起的體重增加。由于在青少年早期出生后體重增加和TG水平的關(guān)聯(lián)密切[5],本研究猜測(cè)高劑量油茶導(dǎo)致的體重下降可能與其對(duì)TG的抑制有關(guān)。HFD+H組的攝食量和食物利用率顯著低于HFD組,高劑量油茶還可能通過(guò)抑制食欲和食物利用率來(lái)抑制TG水平上升。EGCG可以顯著提高HDLC水平[6],可能是高劑量油茶組可顯著高于HFD組的原因。

Zhu等人[1]的油茶實(shí)驗(yàn)顯示HFD+H組的TC顯著低于HFD+L組。然而,本實(shí)驗(yàn)HFD+H組3周末的TC顯著高于HFD+L組,與HFD組無(wú)顯著差異。本實(shí)驗(yàn)油茶的原料主要有茶葉、食用油、生姜、蔥和大蒜。茶葉、生姜具有降血脂功能[6-10],生姜的有效成分姜黃素還可以增強(qiáng)茶多酚的滲透性從而增強(qiáng)降血脂作用[11]。本實(shí)驗(yàn)所用油茶中大蒜素的含量過(guò)少,故而忽略其影響。李忠友[12]對(duì)廣西農(nóng)村瑤族、侗族和苗族3個(gè)少數(shù)民族聚居地的膳食營(yíng)養(yǎng)與慢性病流行現(xiàn)狀的調(diào)查分析表明,三地居民的血脂水平在全國(guó)都屬于較低水平,而在三地居民中恭城瑤族居民的高TC率最高,可能與恭城油茶的油脂用量多有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)使用市售油茶粉,其原料中食用油的比例為28%,是Zhu等[1]人的油茶實(shí)驗(yàn)中茶籽油比例的4倍以上。故此我們猜測(cè)本實(shí)驗(yàn)HFD+H組大鼠的膽固醇比HFD+L組高可能是因?yàn)楦邉┝坑筒璧挠椭窟^(guò)高。

由于停止灌胃后,Ctrl組、HFD組和油茶組都表現(xiàn)出了明顯的肝損害,所以不能表明本實(shí)驗(yàn)的油茶具有顯著的護(hù)肝作用。Zhu等[1]人的油茶實(shí)驗(yàn)中油茶表現(xiàn)出了顯著的護(hù)肝作用,可能與該實(shí)驗(yàn)使用的油茶控制了油脂含量有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)所使用的市售成品油茶可能由于油脂含量較高而未表現(xiàn)出明顯的護(hù)肝作用。

總之,低劑量油茶可能具有預(yù)防高脂飲食引起的TC升高的作用,但是對(duì)體重的影響有限。高劑量油茶可能具有預(yù)防高脂飲食引起的TG升高和體重增加的作用,但對(duì)膽固醇作用有限。我們的研究結(jié)果表明,油茶可能具有抑制血脂升高的能力,但油茶中的油脂含量可能會(huì)影響其功效的發(fā)揮,提示我們飲用油茶時(shí)要注意油茶中油脂含量。