自制美洛昔康注射液裝量、可見異物及無菌檢查

郭華亮 王強 董鳳妍 徐海生 李法紅

自制美洛昔康注射液裝量、可見異物及無菌檢查

郭華亮 王強 董鳳妍 徐海生 李法紅

（山東金瑞生物科技有限公司 山東 濰坊 261061）

本試驗主要針對美洛昔康注射液的裝量、可見異物及無菌方面進行了檢查，結(jié)果顯示：3個批次的美洛昔康注射液平均裝量在50.3~51.2ml之間，單個樣品的裝量都在表示量的97%以上，符合注射液裝量要求；3個批次美洛昔康注射液樣品均未檢出明顯可見異物，均符合規(guī)定；無菌檢查顯示3個批次的美洛昔康注射均無菌，合格率100%，符合注射液要求。

美洛昔康 裝量 注射液 可見異物 無菌檢查

非甾體抗炎藥(NSAIDs)是目前廣泛用于治療急性和慢性炎癥及疼痛的藥物，其作用機制是通過抑制環(huán)氧合酶(COX)而阻止致炎的前列腺素(prostaglandins，PGs)的合成。然而大多數(shù)NSAIDs的使用受到與之相關(guān)的副作用，特別是胃腸副作用高發(fā)生率所限制[1, 2]。我國現(xiàn)有獸用NSAIDs品種單一，臨床使用中副作用較為明顯，因此，尋找副作用小的NSAIDs是獸醫(yī)臨床急需解決的問題[3、4]。

美洛昔康(Meloxicam)是一種烯醇酰胺類的新型非甾體抗炎藥，化學(xué)名為4-羥基-2-甲基-N-(5-甲基-2-噻唑基)-2H-1，2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1，1-二氧化物[5]，是勃林格殷格翰(Boehringer In－gelheim)公司1996年研發(fā)上市的一種新型傾向性環(huán)氧化酶2抑制劑，臨床研究表明美洛昔康具有較強的抗炎活性，胃腸道和腎耐受性優(yōu)于其他的非甾體抗炎藥[6]，臨床廣泛應(yīng)用于牛呼吸道疾病、犢牛腹瀉、奶牛乳腺炎以及豬非感染性運動異常以減輕跛行與炎癥[7]；與適宜的抗生素合用，輔助治療產(chǎn)后敗血癥與毒血癥[8]。目前國內(nèi)批準(zhǔn)勃林格殷格翰公司進口的美洛昔康注射液最高含量達到2%。而國內(nèi)開發(fā)的美洛昔康劑型主要有美洛昔康片劑、美洛昔康混懸液為主，國內(nèi)美洛昔康注射液最高含量僅為0.5 %，且僅用于犬貓等寵物疾病的防治[9]。而應(yīng)用于大型家畜奶牛、豬的高含量美洛昔康注射液的開發(fā)一直存在技術(shù)瓶頸，也是國內(nèi)制藥企業(yè)亟需解決的技術(shù)難題[10]。本研究針對我公司制備的美洛昔康注射液的裝量、可見異物和無菌方面進行考察，以期為美洛昔康注射液臨床應(yīng)用推廣及新藥開發(fā)提供理論及試驗支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 蛋白胨(批號20160517)、氯化鈉(批號20160121)、磷酸二氫鉀(批號20160031 2)、磷酸氫二鈉(批號20160211)均購自南京化學(xué)試劑股份有限公司；硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基(批號20160523)、改良馬丁培養(yǎng)基(批號20160110)、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號20160121)、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基(批號20160121)均購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；供試品美洛昔康注射液(50ml)由山東金瑞生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 菌種及儀器 驗證用菌種：金黃色葡萄球菌(CMCC(B)26003)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；枯草芽孢桿菌(CMCC(B)63501)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；生胞梭菌(CMCC(B)64941)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；白色念珠菌(CMCC(F)98001)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；黑曲霉(CMCC(F) 98003)購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。壓力蒸汽滅菌器45~150L購自山東省青島市儀器檢測公司；YH-31型隔水式恒溫培養(yǎng)箱、SH-100型超凈工作臺購自蘇州祥禹凈化科技有限公司；SC400A型澄明度檢測儀購自天津博宇偉業(yè)科技公司。

1.2 方法

1.2.1 裝量檢查 按照最低裝量檢查法(中國獸藥典2015年版一部附錄7頁)對規(guī)格為50ml/瓶的進行裝量檢查。具體方法如下：取樣品3瓶，開啟時注意避免損失，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至預(yù)經(jīng)標(biāo)化的干燥量入式量筒中，將容器倒置15min，盡量傾凈，讀出每個容器內(nèi)容物的裝量，并求其平均裝量。如有1個容器裝量不符合規(guī)定，另取3個復(fù)試，應(yīng)全部符合規(guī)定。每瓶注射液的裝量均不得少于其標(biāo)示量的97%。取公司生產(chǎn)的3批次美洛昔康注射液按上述方法檢查。

1.2.2 可見異物檢查 依據(jù)《中華人民共和國獸藥典》2015年版一部附錄可見異物第一法檢查，取3批號美洛昔康注射液，每批號取20瓶，除去容器標(biāo)簽，擦凈容器外壁，在光照度為2000~ 3000lx的條件下輕輕旋轉(zhuǎn)和翻轉(zhuǎn)容器，仔細觀察有無異物出現(xiàn)。

1.2.3 無菌檢查 依據(jù)《中華人民共和國獸藥典》2015年版一部附錄137頁無菌檢查法要求進行試驗檢查和方法驗證試驗。（1）稀釋液的制備：pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清；分裝到500ml玻璃瓶中，裝量為300ml，加塞、軋蓋。經(jīng)115 ℃ 30 min濕熱滅菌。（2）培養(yǎng)基配制：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：取本品29.3g于1L蒸餾水中，加熱溶解，煮沸數(shù)分鐘，分裝于適當(dāng)容器中，備用。改良馬丁培養(yǎng)基：取本品28.5g，加熱溶解于1L蒸餾水中，分裝備用。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：取本品19.0g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝備用。改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：取本品42.5g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝備用。（3）培養(yǎng)基滅菌與貯存：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基經(jīng)115℃ 30min濕熱滅菌；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基經(jīng)121℃ 20min濕熱滅菌。已經(jīng)滅菌好的培養(yǎng)基，待冷卻后置冰箱保存，保存溫度為2~8℃，有效期為1個月。（4）樣品無菌檢查：無菌操作取3批次供試樣品，各10瓶，每瓶取10ml，分別混合至100ml pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，振搖，再分別加入一般薄膜過濾器，濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm直徑約為50mm，進行薄膜過濾。用pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液各沖洗3次，100ml/次，沖洗結(jié)束后，在無菌條件下取出濾膜，剪成2等分，分別置于50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良的馬丁培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，封好口，硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基置33℃、改良馬丁培養(yǎng)基置25℃，培養(yǎng)14d，逐日觀察各瓶內(nèi)是否渾濁，試驗以金黃色葡萄球菌設(shè)置陽性和陰性對照，陽性對照和陰性對照處理與樣品處理步驟相同。

2 結(jié)果

2.1 裝量檢查結(jié)果

按我國獸藥典規(guī)定，50ml注射液裝量抽樣檢查應(yīng)抽取供試品3個，每個容器裝量不少于標(biāo)示裝量的97 %，平均裝量不少于標(biāo)示量。試驗抽取的美洛昔康注射液(50ml)裝量檢結(jié)果顯示3個批次美洛昔康注射液樣品的平均裝量在50.3~51.2ml之間，單個樣品的裝量都在表示量的97%以上，均符合注射液裝量規(guī)定，合格率為100%，3個批次美洛昔康注射液裝量檢查結(jié)果如表1所示。

表1 美洛昔康注射液裝量檢查結(jié)果 (ml、%)

2.2 可見異物檢查結(jié)果

我國獸藥典規(guī)定注射用溶液無菌檢查要求，取供試品20支(瓶)中，均不得檢出可見異物。如檢出可見異物的供試品超過1支(瓶)，應(yīng)另取20支(瓶)同法檢查，均不得檢出，否則為不合格。本試驗抽取的美洛昔康注射液可見異物檢查結(jié)果顯示，3個批次美洛昔康注射液樣品均未檢出明顯可見異物，均符合規(guī)定，合格率為100%，可見異物檢查結(jié)果見表2。

表2 美洛昔康注射液可見異物檢查結(jié)果

2.3 無菌檢查結(jié)果

無菌檢查陽性對照結(jié)果顯示金黃色葡萄球菌在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，5d后生長良好；陰性對照結(jié)果顯示無接種金黃色葡萄球菌的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基在33℃條件下，培養(yǎng)14d后，仍然無菌生長，這說明本試驗操作符合無菌檢查操作，試驗設(shè)置的陽性和陰性對照對比結(jié)果有效。3批次美洛昔康注射液無菌檢查結(jié)果顯示，樣品在硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基接種管和改良馬丁培養(yǎng)基接種管內(nèi)，分別在33℃和25℃條件下，培養(yǎng)14d均無菌生長，這說明3批次的美洛昔康注射液符合注射液無菌要求。這也說明目前美洛昔康注射液生產(chǎn)條件符合無菌要求，可以開展規(guī)?；a(chǎn)。

注：“+”為生長，“-”為不生-長。接種管數(shù)中1代表用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基接種管；2代表用改良馬丁培養(yǎng)基接種管。

3 結(jié)論

美洛昔康具有較好的解熱鎮(zhèn)痛和消炎的作用，對大型哺乳動物，如牛的乳房炎，豬的子宮炎治療，賽馬的跛行等具有較好的治療效果，目前國內(nèi)生產(chǎn)的美洛昔康注射液主要存在缺點是藥物含量較低，不適合于大型哺乳動物使用，僅僅供給小型寵物使用。目前高含量的美洛昔康注射液主要依賴于進口，處于壟斷地位，其價格昂貴，限制了該藥物的廣泛使用，因此，在目前畜牧業(yè)快速發(fā)展的背景下，需要積極開展該藥物的研究以打破國外的技術(shù)壟斷。本研究對自制美洛昔康注射液的裝量、可見異物及無菌方面進行了檢查，結(jié)果顯示自制的美洛昔康注射劑裝量符合要求，無明顯可見異物，注射液無菌，合格率100%，符合獸藥注射液類劑型的要求。本研究為進一步開展美洛昔康注射液的研發(fā)及生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，也為該新劑型獸藥的臨床應(yīng)用推廣以及上市前申報材料的工作準(zhǔn)備提供了一定的試驗依據(jù)。

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（2020–04–22）

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