電針井穴結(jié)合顳三針對(duì)急性腦缺血大鼠NSE的影響

翟亮 李美 李萍 崔曉峰 周鵬

【摘 要】 目的：探討運(yùn)用電針中沖、涌泉結(jié)合針刺顳三針對(duì)急性腦缺血（ACI）大鼠的神經(jīng)功能缺損的改善情況和對(duì)血清神經(jīng)元特異化烯醇化酶（NSE）水平的變化。方法：篩選清潔級(jí) Wistar 大鼠8月齡48只，從中隨機(jī)選取32只大鼠，采用電凝阻斷大腦中動(dòng)脈的方法建立ACI模型大鼠，余下16只用于假手術(shù)模型建造，建模后的16只假手術(shù)模型大鼠隨機(jī)分成2組，每組各8只，建模后的32只ACI模型大鼠隨機(jī)分成4組，每組各8只;建模后24 h從假手術(shù)模型和ACI模型大鼠中各隨機(jī)選取一組進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，剩余的一組假手術(shù)模型大鼠作為假手術(shù)組，將剩下的3組ACI模型大鼠分別命名為針刺治療組、空白模型組和西藥對(duì)照組。對(duì)比各組大鼠治療前后的神經(jīng)功能評(píng)分及血清NSE水平。結(jié)果：造模24 h后，對(duì)比針刺治療組、西藥對(duì)照組與空白模型組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），三組分別與假手術(shù)組相比差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而對(duì)比模型組和假手術(shù)組 NSE水平差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;治療7 d后，對(duì)比針刺治療組與西藥對(duì)照組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），而兩組分別與空白模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;對(duì)比針刺治療組與西藥對(duì)照組大鼠的NSE水平，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），而兩組分別與空白模型組大鼠NSE水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論：電針井穴結(jié)合針刺顳三針對(duì)可有效改善 ACI大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀，同時(shí)電針井穴結(jié)合針刺顳三針可有效降低血清中 NSE水平。

【關(guān)鍵詞】 電針;井穴;顳三針;急性腦缺血;神經(jīng)元特異化烯醇化酶

【中圖分類號(hào)】R245? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）9-0011-04

Effects of Electroacupuncture at Jing Point Combined with Temporal Three Points on NSE in ACI Rats

ZHAI Liang LI Mei LI Ping CUI Xiaofeng ZHOU Peng

Shenzhen Baoan traditional Chinese medicine hospital Acupuncture and moxibustion Department，Shenzhen518133，China

Abstract：To explore the effect of electroacupuncture combined with zhongchong and Yongquan on the improvement of neurological deficit and the change of serum NSE level in rats with acute cerebral ischemia （ACI）. Methods 48 clean Wistar rats of 8 months old were selected and 32 rats were randomly selected from them. The middle cerebral artery was blocked by electrocoagulation to establish the ACI model rats. The remaining 16 rats were used to construct the sham operation model. The 16 sham operation model rats after modeling were randomly divided into 2 groups， 8 rats in each group， and 32 ACI model rats after modeling were randomly divided into 4 groups， 8 rats in each group; 24 hours after modeling A group of rats were randomly selected from the sham operated model and ACI model rats for data collection. The remaining group of sham operated model rats were taken as sham operated group. The remaining three groups of ACI model rats were named acupuncture treatment group， blank model group and Western medicine control group respectively. The neurological score and serum NSE level of rats in each group before and after treatment were compared. Results 24 hours after the establishment of the model， there was no significant difference between the three groups （P>0.05） in the neurological deficit scores of the rats in the acupuncture treatment group， western medicine control group and the blank model group， and there was significant difference between the three groups and the sham operation group （P<0.01）， while there was significant difference in the NSE level between the comparative model group and the sham operation group （P<0.01）; 7 days after the treatment， there was no significant difference between the acupuncture treatment group and the western medicine control group （P>0.05） There was no significant difference between the two groups （P>0.05） in the neurological deficit score of the control group， but there was significant difference between the two groups and the blank model group （P<0.05）. There was no significant difference between the two groups in the NSE level of the acupuncture treatment group and the Western medicine control group （P>0.05）， but there was significant difference between the two groups and the blank model group （P< 0.05）. Conclusion electroacupuncture at Jing point combined with acupuncture at temporal three points can effectively improve the neurological deficit symptoms of ACI rats， and electroacupuncture at Jing point combined with acupuncture at temporal three points can effectively reduce the serum NSE level.

Keywords：Electro-acupuncture; Jing Point; Temporal Three Points;Acute Cerebral Ischemia; Neural Function; Neuron Specific Enolase

急性腦缺血（Acute Cerebral Infarction，ACI）疾病是常見的腦血管病，本病常見發(fā)病急聚、病情較重、變化多樣、復(fù)發(fā)率高、致殘率高及致死率高的特點(diǎn)。在祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中針灸學(xué)占有重要地位，用于疾病的預(yù)防和治療，是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有可能躋身于國(guó)際科學(xué)前沿的重要領(lǐng)域。因此，研究針灸學(xué)防病治病的作用機(jī)理，對(duì)推動(dòng)針灸在臨床的推廣運(yùn)用有著非常至關(guān)重要的作用。

既往研究發(fā)現(xiàn)， 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（Neuron Specific Enolase， NSE）的水平對(duì)腦梗死的病灶大小以及預(yù)后具有著重要的臨床意義[1]， 可用來作為腦梗死的敏感性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[2]。而關(guān)于電針井穴結(jié)合顳三針對(duì)ACI大鼠對(duì)血清中NSE水平的影響在國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。 本研究觀察運(yùn)用電針中沖（雙）、涌泉（雙）結(jié)合針刺顳三針對(duì) ACI大鼠神經(jīng)功能缺損的治療效果及血清中 NSE水平的變化，旨在為臨床運(yùn)用井穴結(jié)合顳三針治療急性缺血性卒中提供些許理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 篩選清潔級(jí)成年Wistar雄性8月齡大鼠48只，體質(zhì)量（400±50）g，光照下喂養(yǎng)12h、室溫控制在23～25℃左右、讓其處于在自由飲食的環(huán)境中生存。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品 尼莫地平（30 mg，拜耳醫(yī)藥保健有限公司）， NSE酶聯(lián)免疫試劑盒（上海臻科生物科技有限公司）， 酶標(biāo)儀購(gòu)于美國(guó) BD公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與造模 篩選清潔級(jí)成年Wistar雄性8月齡大鼠48只，從中隨機(jī)選取32只大鼠，采用電凝阻斷大腦中動(dòng)脈的方法建立 ACI模型大鼠， 余下16只用于假手術(shù)模型建造，建模后的16只假手術(shù)模型大鼠隨機(jī)分成2組，每組各8只，建模后的32只大鼠ACI模型大鼠隨機(jī)分成4組，每組各8只;建模后24 h從假手術(shù)模型和ACI模型大鼠中各隨機(jī)選取一組進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，剩余的一組假手術(shù)模型大鼠作為假手術(shù)組，將剩下的3組ACI模型大鼠分別命名為針刺治療組、空白模型組和西藥對(duì)照組。

采用電凝法阻斷大腦中動(dòng)脈（Middle Cerebral Artery，MCA） 制作大鼠腦卒中模型[3]：即首先對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，使用3.5%水合氯醛，劑量為1 mL/100 g，麻醉后，取大鼠俯臥位并將大鼠頭部固定，以頭頂正中線為基線，向左側(cè)旁開0.3 cm處，做與正中線平行切口，長(zhǎng)約1 cm左右，分離皮膚將顳肌從顱骨上剝離，暴露顳窩，使用顱骨鉆在鱗狀骨前部打孔，使用小咬骨鉗向前下方擴(kuò)大骨窗（注意不破壞硬腦膜）。在大約左眼和右耳之間的連線上的大腦皮層表面，可看MCA。使用玻璃分針使MCA 充分暴露。使用電熱燒灼器（ 932 型，上海醫(yī)療器械股份有限公司） ，調(diào)好適宜熱度，在嗅束和MCA交界區(qū)對(duì)其進(jìn)行凝斷，術(shù)后縫合并進(jìn)行保溫和感染預(yù)防。假手術(shù)組不凝斷MCA，其余過程同前。 術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)、觀察。

1.2.3 干預(yù)方法 針刺治療組選取中沖、涌泉、顳三針（穴位定位均參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[4]）。采用一次性無菌毫針（0.25mm×25mm，蘇州醫(yī)療用品有限公司），刺入2～4mm深，選取井穴接華佗牌 SDZ-V 型電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品有限公司），左右側(cè)肢體井穴分別各接一對(duì)，采用刺激的電流為1～2 mA，頻率2 Hz/20 Hz，疏密波，每次刺激30 min，1次/d，共治療7 d。西藥治療組腹腔注射尼莫地平（德國(guó)BAYER 20mg）灌胃，根據(jù)“人和動(dòng)物體表面積折算的等效劑量比率表”確定灌胃使用的藥物用量，根據(jù)尼莫地平12 mg/Kg的使用劑量，使用生理鹽水按0.6 mg/mL的比例配制藥物，每天2次（分別于早、晚灌胃），治療7 d為1個(gè)療程?？瞻啄Ｐ徒M與假手術(shù)組均做常規(guī)飼養(yǎng)不做任何干預(yù)處理。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)方法 各組大鼠用10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）腹腔注射麻醉，斷頭取血，制備血漿，置4℃ 冰箱，待血液凝固后采用5 000 r/min 離心10 min，取出血清。按照NSE? ELISA 試劑盒說明測(cè)定血清 NSE水平。

1.2.5 神經(jīng)功能缺損評(píng)價(jià)方法 在造模結(jié)束后24h和治療7d后，分別采用 Longa[5]評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分測(cè)定，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分為五個(gè)等級(jí)：0 分：無神經(jīng)功能缺失癥狀;1 分：不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪;2 分：向外側(cè)轉(zhuǎn)圈（追尾現(xiàn)象）;3 分：向?qū)?cè)傾倒;4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。評(píng)分范圍在 ≥1 且 <4分者判定為為模型建造成功，不符合評(píng)分要求的予以剔除。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，采用（x±s）表述數(shù)據(jù)，多組間比較采用單因素方差分析法，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);P<0.05說明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠的神經(jīng)缺損功能評(píng)分比較 造模后24h，對(duì)比針刺治療組、西藥對(duì)照組與空白模型組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），三組分別與假手術(shù)組相比差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;治療7 d后，對(duì)比針刺治療組與西藥對(duì)照組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分，兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而兩組分別與空白模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。[FL）]

2.2 各組大鼠的血清NSE比較 造模后24h，對(duì)比模型組和假手術(shù)組 NSE水平，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;治療7 d后，對(duì)比針刺治療組與西藥對(duì)照組大鼠的NSE水平，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），而兩組分別與空白模型組大鼠NSE水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。[FL）]

3 討論

2015年我國(guó)卒中協(xié)會(huì)首次發(fā)布中國(guó)卒中流行報(bào)告[6]顯示每21秒就會(huì)有1人因卒中而死亡，在我國(guó)卒中已成為危害生命健康的首位疾病。急性腦缺血，即缺血性卒中的急性發(fā)作，是臨床常見的腦血管疾病，中醫(yī)稱之為“中風(fēng)”。中醫(yī)認(rèn)為情志過極、飲食不節(jié)、內(nèi)傷耗損、體態(tài)肥盛等，引動(dòng)內(nèi)風(fēng)旋動(dòng)，氣血逆亂，上犯腦絡(luò)，致使血瘀腦脈或血溢于脈外，因而發(fā)為中風(fēng)[7]。

近十年來國(guó)內(nèi)臨床運(yùn)用針灸治療相關(guān)疾病的研究表明，急性缺血性卒中在臨床上應(yīng)用針灸治療已被證實(shí)是一種安全可靠有效的方法，可以有效改善神經(jīng)功能缺損癥狀[8]。 臨床研究表明[9-11]井穴刺絡(luò)療法可有效改善中風(fēng)患者急性期意識(shí)障礙、運(yùn)動(dòng)功能和日常生活活動(dòng)能力的恢復(fù)。且多項(xiàng)臨床研究[12-14]表明，井穴刺絡(luò)能夠調(diào)節(jié)顱內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)，刺激外周血管壁交感神經(jīng)，增強(qiáng)損傷腦組織的能量供應(yīng)，平衡缺血區(qū)細(xì)胞外離子濃度，調(diào)節(jié)缺血區(qū)域氧分壓，改善血腦屏障通透性等。王澍欣等[15]研究發(fā)現(xiàn)針刺顳三針對(duì)腦部代謝和神經(jīng)的興奮性有顯著功效，具有促進(jìn)急性缺血性中風(fēng)患者神經(jīng)功能缺損恢復(fù)的作用[16]，從而提高患者的生存質(zhì)量。

臨床上應(yīng)用井穴配合顳三針治療中風(fēng)也取得的很好的療效[17]。此療法方法獨(dú)特、可操作性好，其中井穴位于四肢末稍是表里陰陽經(jīng)交接之處， 經(jīng)氣“發(fā)生”之所在，井穴針刺適用于 “氣血逆亂，上犯腦絡(luò)” 的病機(jī)。針刺井穴具有激發(fā)臟腑經(jīng)氣之運(yùn)行、經(jīng)絡(luò)之疏通、陰陽之調(diào)整及醒腦醒神等效用。顳三針位于頭部顳側(cè)，研究[18]表明針顳部穴位可激發(fā)經(jīng)絡(luò)氣血運(yùn)行、促進(jìn)局部血流運(yùn)行之功效，可促使側(cè)枝循環(huán)的建立，重建功能活動(dòng)的神經(jīng)通路。

在神經(jīng)細(xì)胞中，NSE是參與糖酵解的關(guān)鍵酶，是能夠非常敏感的反映神經(jīng)元損傷的一項(xiàng)生化指標(biāo)。 MOORE等[19]1965年首次提出一種酸性的可溶性蛋白14-3-2，隨后發(fā)現(xiàn)這種蛋白特異性定位于神經(jīng)元細(xì)胞中并且具有酶的活性，故稱之為 NSE[20]。由于烯醇化酶主要由α、β、γ以三種不同的亞基以二聚體的形式存在，目前已發(fā)現(xiàn)的是 αα、ββ、γγ、αβ、αγ等5種烯醇化酶同工酶，其中特異性地存在于神經(jīng)元及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中的是αγ和γγ兩型，故稱為神經(jīng)元特異性烯醇化酶。在正常的健康人的腦脊液和外周血中的 NSE含量通常是含有非常低的含量，當(dāng)急性腦組織損傷時(shí)，神經(jīng)元變性、壞死，神經(jīng)元細(xì)胞膜及血腦屏障遭到損傷破壞，其通透性增加，從而導(dǎo)致NSE被大量釋放到血液中。 研究證實(shí)NSE在外周血中的存在與神經(jīng)細(xì)胞的高死亡率相關(guān)[21]。 血清 NSE水平隨 ACI患者病灶直徑及神經(jīng)損傷程度的加重而升高[22][23]，且神經(jīng)功能的改善與 NSE水平降低明顯相關(guān)[24]， NSE含量變化可以反映腦損傷的嚴(yán)重程度，其作為預(yù)后的生物標(biāo)志物和治療指標(biāo)具有重要的臨床意義[25]。因此， NSE是用于評(píng)估神經(jīng)元損傷的重要生物學(xué)指標(biāo)[26]，可作為改善缺血性卒中的病情診斷和治療后評(píng)估的敏感性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[27]。

綜上所述，電針井穴結(jié)合顳三針可有效改善 ACI大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀， 其機(jī)理可能與血清 NSE水平降低相關(guān)。臨床上多應(yīng)用井配合顳三針對(duì)卒中認(rèn)知障礙相關(guān)研究，但對(duì)急性缺血性卒中的療效及機(jī)理研究鮮有報(bào)道，本次研究旨在為臨床運(yùn)用井穴結(jié)合顳三針治療急性缺血性卒中提供些許理論依據(jù)。但缺乏臨床證據(jù)，臨床試驗(yàn)將是課題組今后的研究重點(diǎn)。

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（收稿日期：2020-01-14 編輯：劉 斌）