不同殺蟲劑對(duì)銅綠麗金龜?shù)氖覂?nèi)毒力測(cè)定及混配增效藥劑篩選

何發(fā)林　喬治華　姚向峰　于灝泳　孫石昂　李向東　張吉旺　姜興印

摘要 為了篩選出對(duì)蠐螬具有增效作用的復(fù)配藥劑組合，室內(nèi)采用浸蟲法測(cè)定了多個(gè)復(fù)配劑對(duì)銅綠麗金龜2齡幼蟲的聯(lián)合毒力，并用共毒因子法與共毒系數(shù)法相結(jié)合評(píng)價(jià)了復(fù)配組合的聯(lián)合作用。結(jié)果表明，氯蟲苯甲酰胺與硫雙威、毒死蜱、噻蟲胺、氟蟲腈、聯(lián)苯菊酯、吡蟲啉、高效氯氟氰菊酯分別按9∶2、5∶1、3∶4、9∶25、18∶5、1∶3、18∶23復(fù)配時(shí)增效作用最顯著，其共毒系數(shù)分別為169、248、335、144、195、185、184;高效氯氟氰菊酯與噻蟲胺按15∶2復(fù)配時(shí)增效作用最明顯，共毒系數(shù)為166;聯(lián)苯菊酯與硫雙威、吡蟲啉分別按5∶2、5∶9復(fù)配時(shí)增效作用最顯著，共毒系數(shù)分別為216、244。

關(guān)鍵詞 銅綠麗金龜; 復(fù)配; 共毒因子; 共毒系數(shù)

中圖分類號(hào)： S 433.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： B

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019191

Co-toxicity of different insecticides against Anomala corpulenta and

screening of synergistic agents mixed with different insecticides

HE Falin， QIAO Zhihua， YAO Xiangfeng， YU Haoyong， SUN Shiang，

LI Xiangdong， ZHANG Jiwang， JIANG Xingyin*

（College of Plant Protection， Key Laboratory of Pesticide Toxicology and Application Technique of

Shandong Province， Shandong Agricultural University， Taian 271018， China）

Abstract

In order to screen out the complex insecticides with synergistic effect on grubs， the combined toxicity of multiple compounding agents against the 2nd-instar of the Anomala corpulenta was determined by the method of immersing the insects. The combined effects of compound combinations were evaluated using co-toxicity factor method and co-toxicity coefficient method. The results revealed that the mixtures of chlorantraniliprole with thiodicarb， chlorpyrifos， clothianidin， fipronil， bifenthrin， imidacloprid and lambda-cyhalothrin at the ratio of 9∶2， 5∶1， 3∶4， 9∶25， 18∶5， 1∶3 and 18∶23，respectively， showed significant synergistic effect， with the co-toxicity coefficients （CTCs） of 169， 248， 335， 144， 195， 185 and 184， respectively. The mixtures of lambda-cyhalothrin and clothianidin （15∶2） showed the highest synergism with the CTC of 166， and the CTC of the mixtures of bifenthrin with thiodicarb and imidacloprid at the ratios of 5∶2 and 5∶9 were 216 and 244， respectively.

Key words

Anomala corpulenta; combination of pesticides; co-toxicity factor; co-toxicity coefficient

地下害蟲是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的難以預(yù)測(cè)和防治的重大害蟲，主要為害農(nóng)作物幼苗、根系及塊莖等[1]。蠐螬為鞘翅目金龜甲總科幼蟲的統(tǒng)稱，是地下害蟲中最大的類群，也是造成損失最大、危害最重的種類[2]。金龜甲幼蟲與成蟲均能造成嚴(yán)重危害，幼蟲主要取食多種作物的地下根莖及莢果，造成作物枯萎死亡;而成蟲則取食農(nóng)作物、果樹和林木等葉片，導(dǎo)致芽殘葉破，甚至光枝禿稈[3]，嚴(yán)重影響農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)與產(chǎn)量。據(jù)調(diào)查統(tǒng)計(jì)，植物地下部分受害有86%是由金龜甲幼蟲為害造成的[4-5]，目前化學(xué)藥劑是防治金龜甲的主要手段，其中以防治幼蟲為主[6]。

為害農(nóng)作物的金龜甲種類有10多種，種類因地而異，主要有麗金龜和鰓金龜兩類[5]。其中銅綠麗金龜Anomala corpulenta、華北大黑鰓金龜Holotrichia oblita、暗黑鰓金龜H.parallela是為害花生的優(yōu)勢(shì)種群[7]，其中以銅綠麗金龜?shù)陌l(fā)生量最大、為害最嚴(yán)重[8]。近年來， 由于全球氣候變暖、農(nóng)業(yè)種植制度（免耕淺耕技術(shù)、輪作制度、單粒播種、覆膜種植等）以及生態(tài)環(huán)境治理力度加大（環(huán)境綠化、退耕還林等）等，為蠐螬提供了隱蔽的繁殖場(chǎng)所及有利的取食、棲息場(chǎng)所，造成蟲源積累量大，導(dǎo)致蠐螬的為害呈逐年加重趨勢(shì)[9-10]。

隨著一些高毒和高殘留農(nóng)藥（有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類等）的限用與禁用，當(dāng)前很多藥劑對(duì)蠐螬的防治效果都不理想[11]。因此，篩選低毒、高效、低殘留的農(nóng)藥來防治蠐螬顯得尤為重要。氯蟲苯甲酰胺是由美國(guó)杜邦公司開發(fā)的第一代雙酰胺類殺蟲劑。研究證實(shí)，氯蟲苯甲酰胺對(duì)花生田蠐螬也有較好的防治效果[12]。由于該藥劑作用機(jī)制獨(dú)特，對(duì)哺乳動(dòng)物低毒，與常規(guī)殺蟲劑無交互抗性[13]，但是廣泛應(yīng)用后害蟲產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)也在逐步增加，許多鱗翅目害蟲已對(duì)其產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗藥性[14]。因此，研究農(nóng)藥復(fù)配制劑對(duì)于延長(zhǎng)新農(nóng)藥品種使用壽命、延緩抗性產(chǎn)生、提高藥效、擴(kuò)大防治譜、保證環(huán)境安全和降低防治成本等具有重要的意義[15]。

為篩選出對(duì)蠐螬具有增效作用的復(fù)配藥劑組合，并明確其在不同配比下的聯(lián)合作用效果，本研究在測(cè)定氯蟲苯甲酰胺等8種藥劑對(duì)銅綠麗金龜2齡幼蟲室內(nèi)毒力的基礎(chǔ)上，采用等效線法設(shè)置配比，并以共毒因子法進(jìn)行定性篩選與共毒系數(shù)法進(jìn)行定量分析相結(jié)合篩選出具有增效活性的配方組合，明確其最佳復(fù)配比例及聯(lián)合毒力效果，旨在為田間蠐螬防治藥劑的合理選用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 蟲源

供試銅綠麗金龜采自山東寧陽花生田。飼養(yǎng)方法參照河北省滄州地區(qū)農(nóng)科所的人工飼養(yǎng)方法[16]，將用黑光燈誘集到的蠐螬成蟲置于飼養(yǎng)盒（80 cm×60 cm×50 cm）中，飼養(yǎng)盒下部放有10～15 cm土壤（系蟲源采集地土壤），保持土壤濕度為15%～18%，再覆蓋一層雜草或谷糠作為保護(hù)和活動(dòng)層，飼養(yǎng)盒用尼龍網(wǎng)密封以防止成蟲逃逸，將飼養(yǎng)盒放入溫度（25±1）℃、濕度70%、光周期L∥D=16 h∥8 h的人工智能養(yǎng)蟲室中。每天更換新鮮的榆樹葉片作為飼料，檢查成蟲產(chǎn)卵情況，并收集當(dāng)天產(chǎn)的卵。挑選健康的同一日齡卵，放在裝有相同濕度土壤的幼蟲飼養(yǎng)盒（60 cm×40 cm×25 cm）中，孵化的幼蟲飼喂馬鈴薯塊莖。挑選出大小一致的2 齡初幼蟲作為供試蟲源。

1.2 供試藥劑

供試殺蟲劑均為原藥，包括95.3%氯蟲苯甲酰胺（chlorantraniliprole），上海杜邦農(nóng)化有限公司;95%硫雙威（thiodicarb），江蘇龍燈化學(xué)有限公司;97%毒死蜱（chlorpyrifos），利爾化學(xué)股份有限公司;98%噻蟲胺（clothianidin），山東海利爾化工有限公司;97%氟蟲腈（fipronil），海利爾藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;96%聯(lián)苯菊酯（bifenthrin），山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司;96%吡蟲啉（imidacloprid），山東濰坊潤(rùn)豐化工股份有限公司; 96%高效氯氟氰菊酯（lambda-cyhalothrin），山東濰坊潤(rùn)豐化工股份有限公司;溶劑：99%丙酮，天津大茂化學(xué)試劑廠;乳化劑：TritonX-100，北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 單劑毒力測(cè)定

室內(nèi)毒力測(cè)定采用浸蟲法。將供試藥劑用丙酮配制成母液，再用0.05%的TritonX-100水溶液將藥劑等比稀釋至試驗(yàn)濃度。挑取健康活潑、生理狀態(tài)一致的銅綠麗金龜2齡幼蟲至浸蟲器中，在藥液中浸漬30 s用吸水紙吸去多余的藥液，放入裝有大小一致馬鈴薯塊莖飼料的指形管（直徑1.8 cm，長(zhǎng)8 cm）中，用棉塞封口。每處理重復(fù)4次，每重復(fù)30頭試蟲，以0.05%的TritonX-100水溶液作對(duì)照。

處理后試蟲的飼養(yǎng)條件：將處理試蟲置于溫度（25±1）℃、相對(duì)濕度（70±10）%、無光照的條件下飼養(yǎng)，5 d后檢查死亡蟲數(shù)，用毛筆輕觸蟲體不動(dòng)，或不能正常爬行者視為死亡。

1.3.2 共毒因子的測(cè)定

采用Mansour等[17]的共毒因子法定性篩選出共毒因子大于20的增效配比。假設(shè)經(jīng)毒力測(cè)定A、B兩單劑的致死中濃度分別為a和b，選擇具有增效作用的5個(gè)配比，這5個(gè)配比即為等效線法中相加作用線的六等分點(diǎn)，可表示為a/5b、a/2b、a/b、2a/b、5a/b。這5個(gè)配比混劑的濃度分別為（a+5b）/6、（a+2b）/3、（a+b）/2、（2a+b）/3、（5a+b）/6，通過共毒因子法評(píng)價(jià)A+B混劑的增效作用。具體配制方法是將各單劑配制成致死中濃度藥液，再按體積比1∶5、1∶2、1∶1、2∶1、5∶1混合即得不同配比混劑藥液，用于初步評(píng)價(jià)氯蟲苯甲酰胺與7種藥劑按不同比例復(fù)配的聯(lián)合作用及其他藥劑復(fù)配的聯(lián)合作用。

共毒因子=（實(shí)測(cè)死亡率-理論死亡率）/理論死亡率×100，共毒因子>20表示有增效作用;-20≤共毒因子≤20表示相加作用;共毒因子<-20表示拮抗作用。生物測(cè)定方法同1.3.1。

1.3.3 共毒系數(shù)的測(cè)定

以共毒因子法篩選出共毒因子大于20的配比作參考，并在該配比范圍內(nèi)進(jìn)一步細(xì)化配比，再根據(jù)死亡率設(shè)置5～7個(gè)濃度梯度測(cè)定其對(duì)銅綠麗金龜2齡幼蟲的聯(lián)合毒力，求出LC50及線性回歸方程，參照Sun等[18]的共毒系數(shù)法計(jì)算出共毒系數(shù)（CTC），篩選出共毒系數(shù)大于120的最佳增效配比。

相對(duì)毒力指數(shù)（TI）=（標(biāo)準(zhǔn)藥劑LC50/供試藥劑LC50）×100;

混劑實(shí)際毒力指數(shù)（ATI）=（標(biāo)準(zhǔn)藥劑LC50/混劑LC50）×100;

混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=TI（A）×藥劑A在混劑中百分含量+TI（B）×藥劑B在混劑中的百分含量;

共毒系數(shù)（CTC）=（混劑實(shí)際毒性指數(shù)ATI/混劑理論毒性指數(shù)TTI）×100，共毒系數(shù)大于120為增效作用;80～120為相加作用;小于80為拮抗作用。計(jì)算共毒系數(shù)時(shí)使用復(fù)配組合中LC50較大的單劑為標(biāo)準(zhǔn)殺蟲劑。生物測(cè)定方法同1.3.1。

1.4 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)蠐螬的存活情況，不同藥劑處理間的死亡率用Abbotts公式校正，計(jì)算出死亡率，采用DPS 8.01軟件和 Microsoft Excel 2010軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出毒力回歸方程、致死中濃度LC50、95%置信區(qū)間（95%CI）、相關(guān)系數(shù)r、相對(duì)毒力指數(shù)（TI）及相關(guān)參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單劑毒力測(cè)定結(jié)果

8種殺蟲劑對(duì)銅綠麗金龜2齡幼蟲毒力測(cè)定結(jié)果（表1）表明，硫雙威的毒力最高，其LC50為0.368 4 mg/L，高效氯氟氰菊酯的毒力最低，其LC50為23.339 5 mg/L，氯蟲苯甲酰胺的LC50為8.953 1 mg/L，毒力大小順序?yàn)椋毫螂p威>毒死蜱>噻蟲胺>氟蟲腈>聯(lián)苯菊酯>氯蟲苯甲酰胺>吡蟲啉>高效氯氟氰菊酯。

2.2 共毒因子法定性篩選結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明：在試驗(yàn)的10個(gè)復(fù)配組合中，共毒因子大于20的組合共有19組，其中分別為氯蟲苯甲酰胺與硫雙威9∶2、45∶4復(fù)配，與毒死蜱3∶1、15∶2、15∶1復(fù)配，與噻蟲胺9∶10復(fù)配，與氟蟲腈9∶25、18∶5、9∶1復(fù)配，與聯(lián)苯菊酯18∶5、9∶1復(fù)配，與吡蟲啉1∶2復(fù)配，與高效氯氟氰菊酯9∶115、18∶23復(fù)配;高效氯氟氰菊酯與噻蟲胺23∶2復(fù)配;聯(lián)苯菊酯與硫雙威5∶2、25∶2復(fù)配，與吡蟲啉5∶18、5∶9復(fù)配。

2.3 共毒系數(shù)法定量篩選結(jié)果

在共毒因子法定性篩選最佳配比組合的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步通過共毒系數(shù)法測(cè)定不同配比組合的增效作用。由共毒系數(shù)法定量篩選的結(jié)果（表3）可知，在所設(shè)配比中，氯蟲苯甲酰胺與硫雙威3∶1、9∶2、45∶4復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比15∶2表現(xiàn)為相加作用，15∶1為拮抗作用;與毒死蜱3∶1、5∶1、15∶1復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比15∶2表現(xiàn)為相加作用，10∶1為拮抗作用;與噻蟲胺3∶4、9∶10復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比1∶2、1∶1、3∶2表現(xiàn)為相加作用;與氟蟲腈9∶25、18∶5復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比3∶5、9∶1表現(xiàn)為相加作用，6∶1為拮抗作用;與聯(lián)苯菊酯3∶1、18∶5、9∶1復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比6∶1表現(xiàn)為相加作用，10∶1為拮抗作用;與吡蟲啉1∶3、1∶2復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比1∶4、3∶4、4∶5表現(xiàn)為相加作用;與高效氯氟氰菊酯18∶23、1∶1復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比9∶115、9∶10表現(xiàn)為相加作用，3∶50為拮抗作用。

高效氯氟氰菊酯與噻蟲胺15∶2、23∶2復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比10∶1、25∶2表現(xiàn)為相加作用，15∶1為拮抗作用。聯(lián)苯菊酯與硫雙威3∶2、5∶2復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比25∶2表現(xiàn)為相加作用，5∶1、20∶1為拮抗作用;與吡蟲啉5∶18、5∶9復(fù)配時(shí)共毒系數(shù)大于120，表現(xiàn)出增效作用，配比1∶3、2∶3表現(xiàn)為相加作用，1∶6為拮抗作用。

3 結(jié)論與討論

雙酰胺類殺蟲劑防治靶標(biāo)害蟲具有速效性與持效性兼容、高效低毒、環(huán)境友好等特點(diǎn)[19]。劉順通等[20]的研究結(jié)果表明，可用 35%氯蟲苯甲酰胺WG來防治花生田蠐螬，但其研究未涉及藥劑的混配。李耀發(fā)等[21]測(cè)定了18種殺蟲劑對(duì)華北大黑鰓金龜和銅綠麗金龜?shù)亩玖?，但未涉及藥劑的?fù)配篩選工作。其他試驗(yàn)也很少涉及藥劑篩選[22-23]。而對(duì)現(xiàn)有殺蟲劑進(jìn)行科學(xué)合理的混配已經(jīng)成為抗藥性治理和害蟲綜合防治的有效手段。

Sun等的共毒系數(shù)法[18]是國(guó)內(nèi)常用的測(cè)定農(nóng)藥混用聯(lián)合作用的主要方法[24]，該方法可以判斷混配藥劑是否具有增效作用和增效程度。但是該方法工作量大，所需供試蟲量大，測(cè)定結(jié)果難以得到最佳的配比，已不適用于評(píng)價(jià)農(nóng)藥聯(lián)合作用，難以指導(dǎo)生產(chǎn)和應(yīng)用[25]。而本試驗(yàn)采用共毒因子與共毒系數(shù)相結(jié)合的方法來評(píng)價(jià)農(nóng)藥的聯(lián)合作用，首先利用共毒因子法對(duì)大量配比進(jìn)行定性篩選，然后采用共毒系數(shù)法對(duì)共毒因子中大于20的配比組進(jìn)行定量篩選，得到具有增效作用的最佳配比和各配比的增效程度。該方法省時(shí)、省工、省材料，又能得到最佳配比和增效程度。但也有研究表明，用共毒系數(shù)法對(duì)共毒因子大于20的復(fù)配組合篩選時(shí)卻沒有增效作用[26-27]。本試驗(yàn)也出現(xiàn)了這種情況，這可能是由于共毒因子篩選只具有定性作用，所以篩選的共毒因子大于20的配方?jīng)]有增效作用。

本試驗(yàn)測(cè)定了氯蟲苯甲酰胺等8種藥劑對(duì)銅綠麗金龜2齡幼蟲的毒力，求得其LC50。在此基礎(chǔ)上，采用等效線法設(shè)置配比，通過共毒因子法篩選出大于20的配比組合，進(jìn)一步細(xì)化配比，通過共毒系數(shù)法篩選出共毒系數(shù)大于120的最佳復(fù)配組合，其中具有增效作用的配比共有23組。研究結(jié)果將為防治蠐螬復(fù)配劑配方的篩選和抗性治理提供理論基礎(chǔ)，有關(guān)氯蟲苯甲酰胺與幾種藥劑復(fù)配對(duì)蠐螬的田間應(yīng)用效果，有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）