王錦　劉奇志

摘要 2019年4月底，在北京、甘肅、湖北、遼寧等地一些梨園陸續(xù)發(fā)現(xiàn)梨樹葉片異常被害狀，經(jīng)調查發(fā)現(xiàn)造成該為害狀的害蟲為一種未知梨木虱，在國內(nèi)尚未見報道。本文簡要描述了此種梨木虱的形態(tài)識別特征，測定了該害蟲的16S rDNA和COⅠ

基因片段序列，依據(jù)測序結果及形態(tài)特征，鑒定為蘇嘎梨喀木虱Cacopsylla pyrisuga，為國內(nèi)新記錄種。本文還描述了該害蟲的為害狀、為害程度、藥劑防治效果，為深入研究其發(fā)生規(guī)律和防治技術提供參考。

關鍵詞 蘇嘎梨喀木虱; 為害狀; 防治效果; 分子鑒定

中圖分類號： S 436.612.29

文獻標識碼： B

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019270

Damage of Cacopsylla pyrisuga in pear orchards in China

WANG Jin， LIU Qizhi*

（College of Plant Protection， Laboratory of Entomology and Nematology， China Agricultural University， Beijing 100193， China）

Abstract

At the end of April 2019， pear leaves in some orchards in Beijing， Gansu， Hubei and Liaoning provinces showed abnormal damaged symptoms. It was found that there was an unknown pear psyllid， which has not been reported in China. This paper briefly described the morphological identification characteristics of this pear psyllid. According to the 16S rDNA and COⅠ gene sequences and morphological characteristics， the psyllid was identified as Cacopsylla pyrisuga， a newly recorded species in China. This paper also described the damage characteristics， degree of hazard and chemical control effect， which could provide the reference for further study of its appearance dynamics and prevention and control technology.

Key words

Cacopsylla pyrisuga; damaged symptom; control effect; molecular identification

2012年-2017年對全國主要梨產(chǎn)區(qū)的梨木虱種類調查發(fā)現(xiàn)，我國栽培梨園的梨木虱種類主要是中國梨喀木虱 Cacopsylla chinensis Yang & Li，僅有貴州貴陽和湖北襄陽地區(qū)除了有中國梨喀木虱還有黔梨木虱C.qianli Yang & Li[1]。

2019年4月底，在我國甘肅、湖北、遼寧等地梨園出現(xiàn)梨樹葉片被害狀異?，F(xiàn)象，北京海淀、房山、大興、密云區(qū)各大梨園也都陸續(xù)發(fā)現(xiàn)相同現(xiàn)象。為此，本崗位（生物防治與綜合防控崗位）團隊成員以北京市林業(yè)果樹研究院梨品種資源示范基地和房山三仁生產(chǎn)梨園為重點，觀察了梨樹葉片的被害狀特征，初步確認了引起葉片癥狀的害蟲為一種未知梨木虱，調查了葉片的受害程度，采集了該未知梨木虱帶回實驗室，解剖鏡下觀察和記錄了各蟲態(tài)的形態(tài)特征，測定了16S rDNA和COⅠ基因片段序列，確定了該梨木虱為國內(nèi)新記錄種，隨后進行了藥劑防治初探，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019年4月-5月，采集北京海淀、房山、大興梨園中被此種梨木虱為害的梨樹葉片和梨果及梨木虱樣本。將梨樹葉片和梨果放入自封袋，梨木虱樣本放入含有95%乙醇的試管中，帶回昆蟲線蟲學實驗室（Laboratory of Entomology and Nematology， LEN）。梨樹葉片和梨果于雙目解剖鏡下進行癥狀觀察，梨木虱標本保存在-20℃冰箱以供形態(tài)觀察和DNA提取。

1.2 分子鑒定

采用CTAB法提取梨木虱的全基因組DNA。每個地區(qū)梨園選取6頭梨木虱作為重復。提取的DNA用30 μL ddH2O溶解并儲存在-20℃中。PCR采用的是20 μL體系，包含0.5 μL DNA模板，200 μmol/L dNTP混合物，上、下游引物各0.1 μmol/L， 1×PCR buffer和2.5 U Taq DNA聚合酶。

分別用引物序列UEA9（5′-GTAAACCTAACATTTTTTCCTCAACA-3′）、C2-N-3389（5′-TCA-TAAGTTCARTATCATTG-3′）和16SR21（5′-GCCTGTTTATCAAAAACAT-3′）、16S22（5′-CCGGTCTGAACTCAGATCA-3′）擴增梨木虱的COⅠ

和16S rDNA基因片段序列[2-3]。PCR產(chǎn)物送中美泰和生物技術（北京）有限公司測序，測序結果在NCBI數(shù)據(jù)庫比對。

1.3 梨木虱葉片被害率調查

2019年4月28日在北京市林業(yè)果樹科學研究院梨樹品種示范基地選取‘新高‘翠玉‘紅香酥‘玉露香‘綠寶石‘五九香‘皇冠‘CQ8個品種，調查葉片受害率[4-5]。每個品種梨調查3株樹，每株樹在東、西、南、北4個方位分別隨機調查5個1～2年生枝條。調查所選枝條被害葉片數(shù)和總葉片數(shù)，計算葉片被害率。

1.4 防治及其效果調查

2019年5月1日，北京市林業(yè)果樹科學研究院梨樹品種示范基地噴施400倍99%冬青油乳油防治此種梨木虱。在打藥前，選取上述8個品種梨樹，每品種隨機調查3株樹，每株樹在東、西、南、北 4個方位分別隨機調查5個1～2年生枝條，調查所選樹枝上梨木虱卵、成蟲和若蟲的數(shù)量。在噴施藥劑7 d后用相同方法調查梨樹殘存梨木虱活蟲數(shù)，計算蟲口減退率。

在北京房山三仁梨園防治區(qū)4月16日噴施3 000倍20%螺蟲·呋蟲胺懸浮劑和2.5%聯(lián)苯菊酯水乳劑混合液。5月8日在打藥區(qū)和未打藥區(qū)分別采用五點取樣法，每點選取3株樹，每株樹在東、西、南、北4個方位分別隨機調查5個1～2年生枝條，調查所選樹枝上梨木虱卵、成蟲和若蟲的數(shù)量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)田間調查結果， 用下列公式計算出葉片被害率、蟲口減退率。

葉片被害率=被害葉片數(shù)/葉片總數(shù)×100%;

蟲口減退率=（藥前活蟲數(shù)-藥后活蟲數(shù)） /藥前活蟲數(shù)×100%。

2 結果與分析

2.1 為害習性及特征

此種梨木虱可以為害花（圖1a）、果實（圖1b）和葉片（圖1c～l）。

受害葉片有4種癥狀。1）嫩葉被害后，葉片向正面縱向內(nèi)卷（圖1c，d），卷葉內(nèi)可見害蟲卵、1～2齡若蟲。2）若蟲通常在葉片背面縱向取食葉肉，葉片受害初期，可見葉肉被取食痕跡（圖1，e所示葉片正面被害，f所示葉片背面受害）。3）隨著害蟲取食量增加，葉脈兩側葉肉被取食后連成縱線，從葉片正面可見葉脈兩側有兩條縱脊，向葉正面凸起（圖1g～k）。4）受害嚴重的葉片卷曲皺縮，反卷扭曲，從葉正面向葉背面皺成一團（圖1l）。

若蟲群集為害，分泌白色蠟質狀排泄物，似蠟絲，或蠟粒、蠟塊，附著于肛門不易脫落（圖2a～c）。若蟲還分泌蜜露招引螞蟻（圖2d）。

2.2 形態(tài)識別特征

卵黃色，紡錘形，光滑無刻紋（圖3a）。

若蟲共分5齡。復眼呈紅色，球形;觸角端節(jié)端部2/3黑色（圖3b～f）。1、2齡若蟲體黃色;3～5齡若蟲體棕色，各骨片及翅芽褐色;5齡若蟲體背有兩列橙色條紋并伴有黑斑。

成蟲體綠黃色（圖3g）。頭黃色，頭頂后緣淺灰黃色，兩側凹陷，各有一個褐色斑點（圖3i）。觸角10節(jié)，第4～6節(jié)末端、第7節(jié)大部分和第8～10節(jié)黑色，其余部分黃色（圖3h）。胸部橙黃色，中胸前盾片后半部淺黃色、盾片具4條淺黃色縱向條帶，中間2條直，兩側條帶向外呈弧狀彎曲，小盾片淺黃色（圖3i）。前翅端無翅刺，翅脈黃至黃褐色（圖3g）。后足腿節(jié)背面黃色，腹部綠黃色（圖3g）。

雌性產(chǎn)卵瓣瓣膜平滑彎曲，非陡然彎曲[圖3j（a）]。

雄性陽基側突頂尖圓盾[圖3k（a）]。陽莖遠端部分略短[圖3k（b）]，頂端處略膨脹，較圓滑，棱角不凸顯[圖3k（c）]。

綜合圖3j及圖3k所述，該未知梨木虱與Cho等所描述的C.pyrisuga形態(tài)特征一致[6]，因而初步認為該未知梨木虱為蘇嘎梨喀木虱C.pyrisuga。

將蘇嘎梨喀木虱與中國梨喀木虱和烏蘇里梨喀木虱形態(tài)進行區(qū)分，區(qū)別如下所述。

蘇嘎梨喀木虱與其他梨木虱成蟲鑒別特征檢索表

1.前翅表面小刺對比不強烈;陽基側突細長薄片狀，前緣無顯著擴展，頂端牙型;雌性載肛突較短，

頂端有成對長剛毛Cacopsylla chinensis

前翅具強烈對比的表面小刺;陽基側突寬，前緣擴張成狹窄伸長瓣;雌性載肛突較長，剛毛短，頂端有許多釘狀剛毛2

2.雌性瓣膜圓滑;雄性陽基側突頂尖圓盾，陽莖遠端稍有膨大，頂端膨脹處圓滑，棱角不凸顯

Cacopsylla pyrisuga

雌性瓣膜強烈彎曲;雄性陽基側突頂尖尖銳，陽莖遠端膨大部分長，頂端膨脹處近三角形，棱角凸顯

Cacopsylla burckhardti

蘇嘎梨喀木虱與其他梨木虱若蟲鑒別特征檢索表

1.前翼墊，沿外緣有一條9～12根頭狀剛毛排成的線;后翅墊腹側表面前半部分被微刺覆蓋;腹緣可見3對縱膈Cacopsylla chinensis

前翼墊，外緣有1根頭狀剛毛;翼墊和腹部邊緣剛毛長;后翅墊腹側表面被微刺覆蓋;腹緣無縱膈2

2.復眼紅色;前翼墊外邊緣圓滑無角度向前

Cacopsylla pyrisuga

復眼棕色;前翼墊外邊緣有輕微的角度向前

Cacopsylla burckhardti

2.3 分子確認

為進一步確認形態(tài)特征鑒定的準確性，本研究又提取了采自北京海淀、房山、大興梨園的未知梨木虱若蟲的DNA，分別用引物UEA9/C2-N-3389和16SR21/16S22擴增梨木虱的COⅠ和16S rDNA基因片段序列。測序結果在NCBI數(shù)據(jù)庫比對，該未知梨木虱的16S rDNA基因片段序列長度為486 bp，NCBI比對結果C.pyrisuga的基因片段序列長度為448 bp。COⅠ基因片段序列長度651 bp，NCBI比對結果C.pyrisuga的基因片段序列長度為576 bp。具體比對結果見表1、2。該未知梨木虱的COⅠ和16S rDNA基因片段序列與C.pyrisuga序列的一致性均為100%。因而進一步確認該未知梨木虱為蘇嘎梨喀木虱C.pyrisuga。

2.4 不同梨品種受害程度

通過對北京市林業(yè)果樹科學研究院梨樹品種示范基地選取的8個品種（‘新高‘翠玉‘紅香酥‘玉露香‘綠寶石‘五九香‘皇冠‘CQ）葉片受害率調查發(fā)現(xiàn)，不同品種梨樹受蘇嘎梨喀木虱為害程度不同，受害率最高的品種為‘紅香酥，達10.15%，其次是‘玉露香和‘五九香，被害率分別為7.17%和6.25%?！赂摺G寶石‘皇冠和‘CQ被害率無顯著差異，‘翠玉被害率最低（圖4）。

2.5 田間防治效果

通過對北京市林業(yè)果樹科學研究院梨樹品種示范基地打藥前后梨木虱數(shù)量進行調查并計算蟲口減退率發(fā)現(xiàn)，在蘇嘎梨喀木虱初齡若蟲期噴400倍99%冬青油乳油7 d防效可達99%。通過對北京房山三仁梨園打藥區(qū)和未打藥區(qū)梨木虱進行調查發(fā)現(xiàn)，卵-初齡若蟲期噴3 000倍20%螺蟲·呋蟲胺懸浮劑和2.5%聯(lián)苯菊酯水乳劑，防治效果達99%。

3 結論與討論

經(jīng)形態(tài)觀察及分子鑒定確定此種梨木虱為蘇嘎梨喀木虱C.pyrisuga。

蘇嘎梨喀木虱與烏蘇里梨喀木虱形態(tài)相近[6]。但前者較后者而言成蟲體色更偏向綠黃色;成蟲觸角黑色部分更多，前者第7節(jié)大部分和第8節(jié)全部為黑色，后者第7、8節(jié)端部為黑色;前者若蟲復眼為紅色，后者為棕色;前者雌成蟲產(chǎn)卵瓣瓣膜更加圓滑，雄成

蟲陽基側突頂尖圓盾，陽莖遠端稍有膨大，頂端膨脹處圓滑，棱角不凸顯。而后者對應的生殖器結構的區(qū)別特征為：雌成蟲瓣膜強烈彎曲，雄成蟲陽基側突頂尖略尖，陽莖遠端膨大部分略長，頂端膨脹處近三角形，棱角凸顯[6]。

通過調查發(fā)現(xiàn)蘇嘎梨喀木虱對不同梨樹品種的為害程度不同，可能與不同品種的葉片柵欄組織厚度占整個葉片厚度的百分比有關[7]。

通過對蘇嘎梨喀木虱的防治發(fā)現(xiàn)，此種梨木虱對藥劑較敏感，一般防治梨木虱的藥劑都可以有效控制該梨木虱的危害。另外，對蘇嘎梨喀木虱的生活史和生物學特性研究需進一步加強，以期為輕簡化防治此害蟲提供參考。

參考文獻

[1] CHEN Peng， LIU Qizhi， QIAO Xiaofang， et al. Identification and phylogenetic analysis of pear psyllids （Hemiptera： Psyllidae） in Chinese pear orchards [J]. Journal of Economic Entomology， 2018， 111（6）： 2908-2913.

[2] SIMON C， FRATI F， BECKENBACH A， et al. Evolution， weighting， and phylogenetic utility of mitochondrial gene sequences and a compilation of conserved polymerase chain reaction primers [J]. Annals of the Entomological Society America， 1994， 87： 651-701.

[3] LUNT D H， ZHANG D X， SZYMURA J M， et al. The insect cytochrome oxidase I gene： evolutionary patterns and conserved primers for phylogenetic studies [J]. Insect Molecular Biology， 1996， 5： 153-165.

[4] 王潔雯， 郭黃萍， 劉奇志， 等. 黑麥草對梨園梨木虱種群數(shù)量影響初探[J].中國果樹， 2013（4）： 54-56.

[5] 路曉楠， 劉奇志， 樂文全， 等. 梨樹樹形與梨木虱種群發(fā)生關系研究[J].北方園藝， 2015（4）： 116-118.

[6] CHO G， BURCKHARDT D， INOUE H， et al. Systematics of the east Palaearctic pear psyllids （Hemiptera： Psylloidea） with particular focus on the Japanese and Korean fauna [J]. Zootaxa， 2017， 4362（1）： 075-098.

[7] 張婷.梨木虱發(fā)生規(guī)律研究及三次藥技術評價[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學， 2016：13-17.

（責任編輯：王 音）