hTERT rs2736098、rs2075786及rs2736100位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)人群肝癌易感性的meta分析

萬(wàn)強(qiáng) 鄭繪霞 王旖 仇麗霞

(1大同市第五人民醫(yī)院放射科，山西 大同 037000；2山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院病理科；3西安市第九醫(yī)院病理科；4山西醫(yī)科大學(xué)統(tǒng)計(jì)教研室)

肝癌(HCC)是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，2015年其死亡率為25.26/10萬(wàn)，位居中國(guó)人群惡性腫瘤死亡率第二位〔1〕。 目前乙肝和丙肝病毒感染被認(rèn)為是HCC的主要危險(xiǎn)因素〔2〕。 HCC的發(fā)病是多因素作用的結(jié)果，其發(fā)病機(jī)制還不明確。近年研究發(fā)現(xiàn)相同暴露條件下個(gè)體患病存在很大差異，HCC的發(fā)生有遺傳傾向，與易感基因多態(tài)性密切相關(guān)。其中，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因多態(tài)性與HCC易感性已成為研究熱點(diǎn)〔3～9〕。hTERT 是端粒酶的催化亞基，能有效保持端粒結(jié)構(gòu)的完整性，在細(xì)胞增殖和衰老過(guò)程中發(fā)揮重要作用〔10〕。單核苷酸多態(tài)性是指單個(gè)核苷酸和堿基變異引起DNA序列的多態(tài)性。許多研究認(rèn)為hTERT基因的單核苷酸多態(tài)性與多種腫瘤發(fā)生有關(guān)，包括膀胱癌〔11〕、胃癌〔12〕、乳腺癌〔13〕、肺癌〔14〕等，通過(guò)研究hTERT基因上單核苷酸多態(tài)性與腫瘤易感性的關(guān)系對(duì)于惡性腫瘤的防治有重要意義。丁辰月等〔5〕認(rèn)為hTERT基因rs2736098AA基因型與HCC發(fā)生無(wú)關(guān)，而Su等〔7〕研究認(rèn)為該位點(diǎn)攜帶AA基因型的個(gè)體罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)性增加。不同的研究結(jié)果與樣本量的大小、環(huán)境因素、實(shí)驗(yàn)條件等相關(guān)。為更好評(píng)價(jià)hTERT基因多態(tài)性與HCC易感性的關(guān)系，本研究搜集以往的資料，整理數(shù)據(jù)，采用meta分析的方法，以期得到較為客觀的結(jié)論。

1 資料與方法

1.1文獻(xiàn)檢索 檢索中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)、維普(VIP)、萬(wàn)方及pubmed、Web of science、EMBASE等數(shù)據(jù)庫(kù)，收集時(shí)間從建庫(kù)至2018年1月，國(guó)內(nèi)外公開(kāi)的有關(guān)hTERT基因多態(tài)性和HCC易感性方面的研究。中文檢索式(肝癌易感性)AND(端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因多態(tài)性)，英文檢索式(susceptibility to hepatocellular carcinoma OR OR the genetic susceptibility to Liver cancer)AND(human telomerase reverse transcriptase OR hTERT)，同時(shí)手工檢索相關(guān)雜志及學(xué)位論文，擴(kuò)展搜索范圍。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) ①研究對(duì)象：均為中國(guó)人群；②實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：病例-對(duì)照類(lèi)型；③對(duì)照組基因型頻率均滿(mǎn)足Hardy.Weinberg(HWE)遺傳定律；④質(zhì)量高且提供信息全面的研究；⑤提供完整的數(shù)據(jù)或根據(jù)提供的數(shù)據(jù)能分析出所需要的數(shù)據(jù)。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn) ①重復(fù)發(fā)表，文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分低，提供數(shù)據(jù)信息少的研究；②未設(shè)立對(duì)照組；③綜述和摘要及會(huì)議資料。

1.4文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)從以下幾個(gè)方面評(píng)估〔15〕：(1)研究對(duì)象的納入標(biāo)準(zhǔn)和基本構(gòu)成是否明確；(2)研究設(shè)計(jì)是否科學(xué)；(3)混雜因素及方法是否準(zhǔn)確；(4)統(tǒng)計(jì)方法是否正確；(5)是否就本研究的偏倚進(jìn)行了討論。以上每項(xiàng)各1分，總分≥3分為質(zhì)量可靠。

1.5資料及數(shù)據(jù)提取 根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，由兩名研究者獨(dú)立完成文獻(xiàn)評(píng)估和資料提取，主要包括第一作者、發(fā)表年份、基因型檢測(cè)方法、樣本量、對(duì)照組的來(lái)源、病例組與對(duì)照組基因型數(shù)量。如果兩個(gè)人評(píng)估和資料提取有爭(zhēng)議，由第三方協(xié)定解決。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用RevMan5.3軟件進(jìn)行處理，合并效應(yīng)量選用OR及95%CI。納入研究采用Q檢驗(yàn)進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，各研究不存在異質(zhì)性(P>0.1)，采用固定效應(yīng)模型；反之，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析，I2衡量異質(zhì)性大小程度。部分潛在的發(fā)表偏倚采用stata15.1軟件進(jìn)行Begg和Egger線性回歸檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1文獻(xiàn)基本特征及質(zhì)量評(píng)價(jià) 初篩選文獻(xiàn)175篇，逐層篩選，最終納入7篇研究〔3～9〕，如圖1。累計(jì)病例2 564例，對(duì)照組2 770例。3篇文獻(xiàn)〔3,5,6〕同時(shí)研究了rs2736098位點(diǎn)與HCC患者性別的關(guān)系，3篇文獻(xiàn)〔5～7〕同時(shí)研究了rs2736098位點(diǎn)與HCC患者是否吸煙的關(guān)系。累計(jì)病例分別為1 970例、1 874例，對(duì)照組分別為2 214例、1 938例。2篇文獻(xiàn)〔4,8〕同時(shí)研究了hTERT rs2075786位點(diǎn)與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，累計(jì)病例327例，對(duì)照組508例。2篇文獻(xiàn)〔5,9〕同時(shí)研究了hTERT rs2736100位點(diǎn)與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，累計(jì)病例1 504例，對(duì)照組1 568例。對(duì)照組均符合HWE平衡，各研究特點(diǎn)和基因型分布見(jiàn)表1～4。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

表1 納入文獻(xiàn)基本特征

表2 rs2736098位點(diǎn)各基因型分布特點(diǎn)(n)

表3 rs2075786位點(diǎn)各基因型分布特點(diǎn)(n)

表4 rs2736100位點(diǎn)各基因型分布特點(diǎn)

2.2meta分析結(jié)果

2.2.1rs2736098位點(diǎn)基因頻率分析 有7篇文獻(xiàn)〔3～9〕研究了該位點(diǎn)。攜帶基因型GA的個(gè)體是攜帶基因型GG HCC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的1.28倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔OR=1.28，95%CI(1.01，1.62)，P=0.04〕，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=61%，P=0.009，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖2；攜帶基因型GA或AA的個(gè)體與攜帶基因型GG個(gè)體相比罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)增加〔OR=1.25，95%CI(1.01，1.54)，P=0.04〕，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=65%，P=0.02，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖3；攜帶等位基因A和G個(gè)體相比，罹患HCC風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.07)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=87%，P<0.000 01，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖4；攜帶AA基因型個(gè)體和GG基因型相比，HCC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.15)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=38%，P=0.14，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖5；攜帶GA或GG基因型個(gè)體和攜帶AA基因型相比，肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.53)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=31%，P=0.19，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖6。

圖2 rs2736098位點(diǎn)基因型GA在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(GA∶GG)

圖3 rs2736098位點(diǎn)基因型GA+AA在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(GA+AA∶GG)

圖4 rs2736098位點(diǎn)等位基因A在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(A∶G)

圖5 rs2736098位點(diǎn)基因型AA在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(AA∶GG)

圖6 rs2736098位點(diǎn)基因型GA+GG在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(GA+GG∶AA)

3篇文獻(xiàn)〔3,5,6〕研究了該位點(diǎn)性別因素和HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，男性組中，攜帶GA或AA基因型個(gè)體與攜帶GG型相比，罹患HCC風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.43)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0%，P=0.80，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析；女性組中，攜帶GA或AA基因型個(gè)體與攜帶GG型相比，HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.74)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=47%，P=0.15，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖7。

圖7 性別不同rs2736098位點(diǎn)基因型GA+AA在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(GA+AA∶GG)

3篇文獻(xiàn)〔5～7〕研究了該位點(diǎn)是否吸煙因素和肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，吸煙組中，攜帶GA或AA基因型個(gè)體與攜帶GG型相比，罹患HCC風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.73)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=62%，P=0.07，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析；不吸煙組中，攜帶GA或AA基因型個(gè)體與攜帶GG型相比，肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.58，P=0.10)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0%，P=0.75，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖8。

圖8 吸煙與否rs2736098位點(diǎn)基因型GA+AA在肝癌組和對(duì)照組分布的meta分析(GA+AA：GG)

2.2.2rs2075786位點(diǎn)基因頻率分析 2篇文獻(xiàn)〔4,8〕研究該位點(diǎn)。攜帶等位基因T和C個(gè)體相比，罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)增加〔OR=1.92，95%CI(1.52，2.43)，P<0.01〕，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0%，P=0.81，采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖9；攜帶TC或CC基因型個(gè)體與攜帶TT型相比，肝癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.22)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=78%，P=0.03，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖10。

圖10 rs2075786位點(diǎn)基因型TC+CC在肝癌組和對(duì)照組分布的meta分析(TC+CC：TT)

2.2.3rs2736100位點(diǎn)基因頻率分析 2篇文獻(xiàn)〔5,9〕研究該位點(diǎn)。攜帶等位基因A和C個(gè)體相比，罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.38)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=78%，P=0.03，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖11；攜帶CC或AC基因型個(gè)體與攜帶AA型相比，HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.49)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=62%，P=0.10，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行meta分析，如圖12。

圖11 rs2736100位點(diǎn)等位基因A在病例組和對(duì)照組分布的meta分析(A∶C)

圖12 rs2736100位點(diǎn)基因型AC+CC在肝癌組和對(duì)照組分布的meta分析(AC+CC:AA)

2.3發(fā)表偏倚 納入文獻(xiàn)進(jìn)行Begg和Egger檢驗(yàn)進(jìn)行偏倚分析結(jié)果，rs2736098位點(diǎn)上，GA∶GG，研究中Begg檢驗(yàn)(P=0.58)和Egger檢驗(yàn)〔t=1.33，P=1.33，95%CI(-1.70,5.34)〕提示沒(méi)有顯著的發(fā)表偏倚；GA+AA∶GG，研究中Begg檢驗(yàn)(P=0.55)和Egger檢驗(yàn)〔t=1.14，P=0.31，95%CI(-1.89,4.91)〕提示沒(méi)有顯著的發(fā)表偏倚。

2.4敏感性分析 為了保證本研究結(jié)果的可靠性，將納入文獻(xiàn)從每個(gè)基因模型中逐一排除，meta分析結(jié)果提示，rs2736098位點(diǎn)上，逐一排除研究，觀察前后總效應(yīng)量OR無(wú)實(shí)質(zhì)性變化，結(jié)果具有一定的穩(wěn)定性和可靠性。

3 討 論

TERT定位于染色體5p15.33,長(zhǎng)度為35 kb，是調(diào)控端粒酶活性的限速步驟，與端粒酶的活性變化一致〔16,17〕。TERT通過(guò)調(diào)控端粒酶的活性，導(dǎo)致個(gè)體罹患腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加。hTERT基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控主要方式是通過(guò)啟動(dòng)子，包括啟動(dòng)子序列5′端的E盒(CACGTG)，可與Myc、Max等轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合，Myc/Max的過(guò)度表達(dá)可導(dǎo)致TERT基因轉(zhuǎn)錄明顯活化〔18,19〕；鋅脂蛋白轉(zhuǎn)錄因子(SP)1活化hTERT的轉(zhuǎn)錄，與P53形成復(fù)合物，改變SP1的結(jié)構(gòu)，SP1與hTERT結(jié)合受阻，進(jìn)而阻止轉(zhuǎn)錄的發(fā)生〔20,21〕。

目前，關(guān)于hTERT基因多態(tài)性和HCC易感性相關(guān)性研究已有很多，但研究結(jié)果不盡相同，Li等〔22〕有關(guān)hTERT rs2736098位點(diǎn)與惡性腫瘤易感性相關(guān)性的meta分析結(jié)果顯示，攜帶基因型GA個(gè)體與GG型相比，罹患惡性腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加。亞組分析，攜帶基因型GA個(gè)體罹患HCC的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是攜帶GG型個(gè)體的1.38倍。而Zhao等〔23〕meta分析結(jié)果認(rèn)為，攜帶基因型GA個(gè)體和GG型相比，罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)并無(wú)增加。董矜等〔4〕研究認(rèn)為hTERT rs2736098位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)人群HCC易感性無(wú)關(guān)。本組meta分析結(jié)果與Li等〔22〕相同。此外，也發(fā)現(xiàn)攜帶GA或AA基因型的個(gè)體罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶GG基因型個(gè)體的1.25倍〔OR=1.25，(1.01,1.51)〕，可以看出，攜帶至少一個(gè)等位基因A個(gè)體與中國(guó)人群HCC易感性相關(guān)，A為該位點(diǎn)突變的等位基因?？赡艿臋C(jī)制為：(1)等位基因A可能上調(diào)hTERT mRNA的表達(dá)，延長(zhǎng)端粒酶，細(xì)胞逃過(guò)凋亡而永生化；(2)可能引起P53突變，從而增加HCC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。張超〔3〕研究發(fā)現(xiàn)，hTERT rs2736098多態(tài)性位點(diǎn)可能與中國(guó)人群女性的HCC易感性有關(guān)。本研究的結(jié)果認(rèn)為該位點(diǎn)與中國(guó)人群漢族女性和男性的HCC易感性均無(wú)關(guān)，與丁辰月等〔5〕結(jié)果相同?？赡茉?yàn)閺埑?〕的樣本量較少，合并分析所占權(quán)重較小。本研究結(jié)果提示，T等位基因可能為HCC的易感基因，與崔偉麗等〔8〕結(jié)論一致。馬紅等〔24〕研究該位點(diǎn)多態(tài)性和HCC易感性相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，TT基因型攜帶者罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)增加2.23倍，T等位基因亦為胃癌的易感基因。此外，關(guān)于hTERT rs2736100位點(diǎn)多態(tài)性和肝癌易感性分析中發(fā)現(xiàn)，該位點(diǎn)多態(tài)性并不能增加罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)。徐保華等〔25〕認(rèn)為該位點(diǎn)多態(tài)性與胃癌易感性有關(guān)，攜帶CC基因型個(gè)體與AA基因型相比，罹患胃癌風(fēng)險(xiǎn)增加1.37倍。結(jié)果的不同可能與腫瘤特異性、樣本量不足等有關(guān)。

總之，本次meta分析得出，hTERT rs2736098位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)人群HCC易感性有關(guān)，A等位基因可能為HCC的易感基因；hTERT rs2075786位點(diǎn)上，T等位基因可能為肝癌的易感基因；hTERT rs2736100位點(diǎn)多態(tài)性并不能增加罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)。本研究局限性在于：第一，包含的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能得出一個(gè)可靠的結(jié)論，尤其是對(duì)分層的分析；第二，在一些觀察研究中出現(xiàn)異質(zhì)性；第三，未考慮其他因素交互作用。對(duì)于hTERT基因多態(tài)性與HCC易感性關(guān)系的研究，基于人群的大規(guī)模研究及更多層次的分層研究非常必要，以便得出更為可靠的結(jié)論。