彭豐 王敏 謝昱 秦仁義

肝門部膽管癌病人綜合治療后5年生存率仍不到15%[1-3]，其原因主要是其發(fā)病隱匿，同時(shí)缺乏敏感的化療方案，使其綜合療效始終處于瓶頸階段[4]。近年來(lái)，長(zhǎng)鏈非編碼 RNA(long noncoding RNA，LncRNA)在腫瘤中的作用成為研究熱點(diǎn)[5-7]。LncRNA在基因組印記、染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄激活等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[8-9]。我們通過(guò)前期基因芯片篩選出多條膽管癌差異性表達(dá)LncRNA，其中LncRNA SNHG1在結(jié)腸癌、肝癌的增殖轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[10-11]。本研究分析LncRNA SNHG1在膽管癌中的表達(dá)水平及其與臨床特征的相關(guān)性。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2016年1月～2018年12月我院行根治性切除手術(shù)的膽管癌病人36例，其中男性19例，女性17例，年齡46～71歲，平均年齡(56.7±8.03)歲。所有病人均按NCCN指南進(jìn)行診斷，且未在術(shù)前接受放療或者化療，均由術(shù)后病理檢查證實(shí)為肝門部膽管癌。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有病人均簽署知情同意書。

二、方法

收集36例膽管癌病人手術(shù)切除腫瘤及癌旁組織。術(shù)中距離所切除距腫瘤>1.5 cm膽管組織定義為癌旁組織，所有膽管癌及癌旁組織手術(shù)切除離體30分鐘內(nèi)迅速放入-80℃液氮保存。采用Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄及Realtime PCR試劑均購(gòu)于TAKARA公司。LncRNA SNHG1逆轉(zhuǎn)錄及Realtime PCR引物均由廣州銳博生物公司設(shè)計(jì)并合成。采用RT-PCR分別測(cè)量膽管癌及癌旁組織中LncRNA SNHG1表達(dá)水平，以GAPDH為內(nèi)參，采取2-△△CT測(cè)量相關(guān)表達(dá)水平，每個(gè)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。取LncRNA SNHG1在36例膽管癌病人中的表達(dá)中位數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，將病人分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。術(shù)后對(duì)所有病人進(jìn)行定期隨訪，包括電話隨訪、門診隨訪及住院復(fù)查等方式。連續(xù)2次隨訪時(shí)間間隔不少于2個(gè)月，隨訪截止日期為2019年12月。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用 SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并應(yīng)用 Log-rank檢驗(yàn)比較兩組病人生存率的差異。采用多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型評(píng)估影響膽管癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.膽管癌與癌旁組織中LncRNA SNHG1的表達(dá)水平：LncRNA SNHG1在膽管癌中的表達(dá)均高于癌旁組織。綜合全部36對(duì)膽管癌標(biāo)本及對(duì)應(yīng)癌旁結(jié)果，膽管癌組織中LncRNA SNHG1表達(dá)水平較對(duì)應(yīng)癌旁組織高(1.80±1.68)倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.膽管癌病人LncRNA SNHG1表達(dá)水平與臨床特征的相關(guān)性見表1。LncRNA SNHG1的表達(dá)量與病人年齡、性別、分化程度、T分期及CA19-9水平均無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，與病人是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。在發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，LncRNA SNHG1低表達(dá)病人比率顯著高于高表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3.差異LncRNA SNHG1表達(dá)水平膽管癌病人生存期分析見圖1、表2。低表達(dá)LncRNA SNHG1的膽管癌病人術(shù)后生存率高于高表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析評(píng)估結(jié)果顯示，年齡、血漿CA19-9 表達(dá)水平和LncRNA SNHG1表達(dá)水平均是影響膽管癌病人臨床預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)。

表1 肝門部膽管癌病人LncRNA SNHG1表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系分析(例)

表2 肝門部膽管癌病人多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析

討 論

肝門部膽管癌綜合診療效果仍處于一個(gè)瓶頸，缺乏早期有效的診斷方法是重要原因之一[12-13]。LncRNA作為腫瘤診斷及標(biāo)識(shí)預(yù)后的特殊生物標(biāo)志物的潛質(zhì)也逐漸被發(fā)掘出來(lái)[14-15]。探索肝門部膽管癌自身的特異性LncRNA標(biāo)志物就成為了提高其綜合診療效果的一個(gè)可能突破點(diǎn)。我們的研究團(tuán)隊(duì)在前期的研究中篩選了膽管癌差異性表達(dá)的LncRNA，并將其中之一的LncRNA SNHG1作為本次研究對(duì)象。

LncRNA SNHG1位于人11號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)2帶3亞帶，包含11個(gè)外顯子，其表達(dá)水平的上調(diào)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。如LncRNA SNHG1在骨肉瘤和結(jié)直腸癌中被證實(shí)可激活Notch及Wnt/β-catenin信號(hào)通路[16-17]。在肝癌和骨肉瘤中，LncRNA SNHG1分別被證實(shí)可以通過(guò)下調(diào)miR-195、miR-326和miR-577促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[11，18-19]。在肝癌細(xì)胞中，LncRNA SNHG1可通過(guò)抑制p53表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、抑制其凋亡[20]。上述研究都表明，LncRNA SNHG1可能與多個(gè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們團(tuán)隊(duì)通過(guò)本次研究，初步闡明了LncRNA SNHG1在膽管癌病人臨床特征的相關(guān)性。

我們對(duì)本中心36例肝門部膽管癌病人腫瘤及癌旁組織的LncRNA SNHG1表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)LncRNA SNHG1在膽管癌組織中呈顯著高表達(dá)，這與其在其他腫瘤中的表達(dá)水平類似，進(jìn)一步闡明了其可能的致癌基因特性。我們通過(guò)對(duì)膽管癌病人LncRNA SNHG1表達(dá)水平進(jìn)行單因素分析，發(fā)現(xiàn)病人腫瘤組織中LncRNA SNHG1表達(dá)水平與病人是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這也為今后進(jìn)一步研究明確其可能的分子生物學(xué)機(jī)制提供了方向。我們還發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，低表達(dá)LncRNA SNHG1的比率明顯偏高，其機(jī)制可能與膽管癌細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)，低表達(dá)LncRNA SNHG1轉(zhuǎn)移速度會(huì)稍慢于高表達(dá)組，但一旦出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，間質(zhì)化腫瘤細(xì)胞形成轉(zhuǎn)移子灶的速度會(huì)明顯增加，這也是為未來(lái)進(jìn)一步研究其可能對(duì)膽管癌惡性生物學(xué)效應(yīng)的影響機(jī)制揭示了潛在的亮點(diǎn)。多因素回歸分析表明，低表達(dá)LncRNA SNHG1的膽管癌病人術(shù)后生存率高于高表達(dá)組，不僅闡明了其可能的生物學(xué)特性，更提示了其將來(lái)作為肝門部膽管癌診療的新生物學(xué)標(biāo)志物的潛質(zhì)。

綜上所述，我們通過(guò)本次研究，初步闡明了LncRNA SNHG1在肝門部膽管癌中的表達(dá)水平及其與膽管癌病人臨床特征的相關(guān)性。LncRNA SNHG1表達(dá)水平可作為膽管癌病人判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。這為今后LncRNA SNHG1在膽管癌惡性生物學(xué)行為及機(jī)制的深層次研究明確了研究的方向，也為其可能的臨床應(yīng)用研究提供了理論依據(jù)。