羅雨薇　張磊　鄒暢　趙盼　張雅媛　周冬仙　周文斌

[摘要] 目的 探討運(yùn)用IsoFluxTM系統(tǒng)在乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating tumor cells，CTCs）檢測(cè)中的臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法 回顧性分析深圳市人民醫(yī)院甲乳外科2015年12月～2017年5月收治的23例女性乳腺癌患者運(yùn)用IsoFluxTM系統(tǒng)進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的臨床資料，并將CTCs數(shù)量與腫塊大小、TNM分期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 23例乳腺癌患者中，可手術(shù)乳腺癌患者22例，術(shù)前使用IsoFluxTM系統(tǒng)全部檢測(cè)到CTCs，陽(yáng)性捕獲率100%，每7.5 mL全血樣本中CTCs數(shù)目2～4201個(gè)不等，中位數(shù)173.5個(gè);另1例為乳腺癌術(shù)后2年出現(xiàn)雙肺多發(fā)結(jié)節(jié)、懷疑肺轉(zhuǎn)移的患者，未檢測(cè)到CTCs，根據(jù)CTCs結(jié)果對(duì)其肺部結(jié)節(jié)初步排除肺轉(zhuǎn)移可能。22例可手術(shù)乳腺癌患者的腫塊大小和log（CTCs）顯著相關(guān)，CTCs的數(shù)量與乳腺癌TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）不存在顯著的相關(guān)性。結(jié)論 此次將IsoFluxTM系統(tǒng)應(yīng)用于乳腺癌CTCs檢測(cè)的探索性研究初步證明，該系統(tǒng)敏感性高、捕獲力強(qiáng)，是乳腺癌患者CTCs檢測(cè)的一個(gè)理想選擇，有助于監(jiān)測(cè)乳腺癌術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移情況。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌;循環(huán)腫瘤細(xì)胞;IsoFluxTM系統(tǒng);CTC簇

[中圖分類號(hào)] R737.9 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-9701（2020）23-0028-06

Application analysis of IsoFluxTM system in detection of circulating tumor cells of breast cancer

LUO Yuwei1 ? ZHANG Lei2 ? ZOU Chang3 ? ZHAO Pan3 ? ZHANG Yayuan1 ? ZHOU Dongxian1 ? ZHOU Wenbin1

1.Department of Thyroid and Breast Surgery， the Second Clinical Medical College of Jinan University， Shenzhen People's Hospital， Shenzhen ? 518020， China; 2.Shenzhen Tsure Biotechnology Company Limited， Shenzhen ? 518020， China; 3.Clinical Medical Research Center， the Second Clinical Medical College of Jinan University， Shenzhen People's Hospital， Shenzhen ? 518020， China

[Abstract] Objective To explore the clinical application value of IsoFluxTM system in the detection of circulating tumor cells（CTCs） in breast cancer patients. Methods The clinical data of 23 female breast cancer patients whose circulating tumor cells was detected using the IsoFluxTM system in the Department of Thyroid and Breast Surgery， Shenzhen People's Hospital from December 2015 to May 2017 were retrospectively analyzed. The relationship between the number of CTCs， tumor size， and TNM stage was statistically analyzed. Results Among the 23 breast cancer patients， 22 were operable breast cancer patients. CTCs were all detected by IsoFluxTM system before operation. The positive capture rate was 100%. The number of CTCs in each 7.5 mL whole blood sample ranged from 2 to 4201， with the median of 173.5. Another case was a patient with multiple lung nodules and suspected lung metastases 2 years after breast cancer surgery. CTCs was not detected. Based on the CTCs results， we initially ruled out the possibility of lung metastases for lung nodules. The size of lump in 22 patients with operable breast cancer was significantly correlated with log（CTCs）. There was no significant correlation between the number of CTCs and the TNM stages（Ⅰ， Ⅱ， Ⅲ） of breast cancer. Conclusion The exploratory study of applying the IsoFluxTM system to the detection of breast cancer CTCs initially proved that the system has high sensitivity and strong capture power， and is an ideal choice for CTCs detection of breast cancer patients， which helps to monitor the recurrence and metastases of breast cancer after surgery.

[Key words] Breast cancer; Circulating tumor cells; IsoFluxTM system; CTC cluster

原發(fā)實(shí)體惡性腫瘤可持續(xù)釋放腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，擴(kuò)散到其他組織并引發(fā)轉(zhuǎn)移，此過程在血液中可以檢測(cè)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulation tumor cells，CTCs）[1-2]。CTCs不僅與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且是無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）、總生存期（OS）的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子[3-4]。2015年12月～2017年5月，我們運(yùn)用IsoFluxTM系統(tǒng)對(duì)我科收治的23例乳腺癌患者進(jìn)行了CTCs檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年12月～2017年5月深圳市人民醫(yī)院的23例乳腺癌患者作為研究對(duì)象。該研究得到了深圳市人民醫(yī)院研究倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得每個(gè)參與者的知情同意，簽署知情同意書?？墒中g(shù)的乳腺癌患者22例，年齡23～64歲，中位年齡41.5歲。所有患者均經(jīng)臨床病理證實(shí)為乳腺浸潤(rùn)性癌，根據(jù)AJCC第8版[5]乳腺癌分期系統(tǒng)對(duì)其分為Ⅰ～Ⅲ期（其中Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期5例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)空芯針穿刺活組織檢查確診為乳腺浸潤(rùn)性癌者;（2）就診前未接受任何輔助性治療者;（3）無(wú)其他部位惡性腫瘤病史者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）乳腺原位癌者;（2）患者入院前已行腫塊切除活組織檢查者;（3）既往有其他惡性腫瘤病史者。1例為24歲女性，2013年發(fā)現(xiàn)左乳7 cm大小腫物，經(jīng)空芯針穿刺活組織檢查確診為三陰性乳腺癌，經(jīng)阿霉素和環(huán)磷酰胺序貫多西他賽共8次新輔助化療后，行左乳癌改良根治術(shù)。2015年常規(guī)復(fù)查發(fā)現(xiàn)肺部多發(fā)結(jié)節(jié)，在我院及國(guó)內(nèi)多家醫(yī)院就診，均不能確定肺部病變性質(zhì)。

圖1 ? IsoFluxTM儀器設(shè)備

1.2 方法

用EDTA-K2抗凝采血管（10 mL）收集乳腺癌患者的健側(cè)上肢靜脈血7.5 mL，應(yīng)用常規(guī)采血法，避免上皮細(xì)胞污染;輕柔顛倒混勻，避免凝血。所有樣本均在室溫下儲(chǔ)存、及時(shí)運(yùn)輸，在24 h內(nèi)送達(dá)至深圳天爍精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行CTCs檢測(cè)。CTCs檢測(cè)采用美國(guó)Fluxion公司微流控血液稀有細(xì)胞分析技術(shù)（圖1）進(jìn)行CTCs富集，富集后的細(xì)胞行免疫熒光染色并采用日本尼康公司ECLIPSE Ti-E倒置電動(dòng)熒光顯微鏡進(jìn)行圖像掃描和分析。在三色免疫熒光結(jié)果中細(xì)胞角蛋白（CK）陽(yáng)性、白細(xì)胞共同抗原（CD45）陰性、4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）陽(yáng)性，且細(xì)胞核形態(tài)完整的細(xì)胞被計(jì)數(shù)為CTCs，而CK-、CD45+和DAPI+細(xì)胞被定義為白細(xì)胞。記錄CTCs的數(shù)量，檢測(cè)到1個(gè)CTCs計(jì)為檢測(cè)陽(yáng)性，并根據(jù)CTCs數(shù)量與載玻片上總細(xì)胞的比率計(jì)算純度。所有患者CTCs均由3位資深病理醫(yī)師盲法獨(dú)立確定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（IBM，Armonk，NY，USA）進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析和Kruskal-Wallis檢測(cè)。通過GraphPad Prism 6.0版（GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA，USA）繪制圖形。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)室結(jié)果

使用IsoFluxTM系統(tǒng)處理23例臨床標(biāo)本。免疫熒光染色后，代表性CTCs如封三圖1所示。CK+、CD45-、DAPI+的細(xì)胞被計(jì)數(shù)為CTCs，而CK-、CD45+和DAPI+細(xì)胞被定義為白細(xì)胞（封三圖2）。在計(jì)數(shù)過程中觀察到CTCs簇（Circulating tumor cells cluster），即兩個(gè)及以上CTCs聚集成的細(xì)胞團(tuán)（封三圖3）。計(jì)算每個(gè)樣本的CTCs數(shù)目總細(xì)胞量，結(jié)果顯示在表1中。

2.2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)情況分析

除P23外，擬手術(shù)的乳腺癌患者共22例（表1 P1～P22），中位年齡為41.5歲（23～64歲），77.3%（17/22）的患者腫瘤大小≥2 cm，68.2%（15/22）為Ⅱ或Ⅲ期腫瘤，50.0%（11/22）為淋巴結(jié)陽(yáng)性。90.9%（20/22）屬于浸潤(rùn)性非特殊類型，9.1%（2/22）為其他亞型。在術(shù)前使用IsoFluxTM系統(tǒng)全部檢測(cè)到CTCs，陽(yáng)性捕獲率100%。每7.5 mL全血中CTCs數(shù)目2～4201個(gè)不等，中位數(shù)173.5個(gè);檢出循環(huán)腫瘤細(xì)胞共計(jì)15 165個(gè)，平均689.3個(gè)。95.5%（21/22）檢查到每7.5 mL全血中5個(gè)以上CTCs細(xì)胞計(jì)數(shù)。檢出CTCs數(shù)量占總細(xì)胞百分比在0.0%～34.5%之間，平均值為6.0%。1例為乳腺癌術(shù)后2年出現(xiàn)肺部結(jié)節(jié)的患者，肺部CT平掃如圖2～4;CTCs檢查報(bào)告見圖5，未檢測(cè)到CTCs。

2.3 CTCs數(shù)目與腫物大小的關(guān)系分析

CTCs數(shù)目與腫物大小的關(guān)系將23號(hào)患者（CTCs=0）排除，X軸為腫物大?。╟m），Y軸為CTCs數(shù)目，作出CTCs數(shù)目與腫物大小散點(diǎn)圖（圖6）。再將CTCs數(shù)量做以e為底的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換（log轉(zhuǎn)換），作CTCs數(shù)量與腫塊大小的Pearson分析。腫塊大小和log（CTCs）顯著相關(guān)（圖7），X軸為腫物大?。╟m），Y軸為log（CTCs），皮爾遜相關(guān)系數(shù)為-0.49。

2.4 CTCs數(shù)目與TNM分期的關(guān)系分析

CTCs數(shù)目與TNM分期的關(guān)系 根據(jù)Kruskal-Wallis檢測(cè)，CTCs的數(shù)量與乳腺癌TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）之間不存在顯著的相關(guān)性。

3 討論

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是來源于實(shí)體腫瘤并在血流中循環(huán)的罕見細(xì)胞。CTCs在19世紀(jì)就已經(jīng)為人所知，但直到最近現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展才使CTCs的有效捕獲和鑒定成為可能。2004年Cristofanilli M等[4]發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者中，CTCs數(shù)目不僅與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且是無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）、總生存期（OS）的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子。AJCC第8版乳腺癌分期系統(tǒng)再次肯定了CTCs的意義，認(rèn)為臨床晚期乳腺癌患者外周血CTCs≥5個(gè)/7.5 mL、臨床早期乳腺癌CTCs≥1個(gè)/7.5 mL提示預(yù)后不良[5]。

但如何準(zhǔn)確檢測(cè)CTCs是個(gè)臨床難題。近年來，分離CTCs的技術(shù)和儀器得到了發(fā)展，但都有捕獲力低下的局限性。Cellsearch系統(tǒng)是唯一經(jīng)美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)的用于乳腺癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌中CTCs計(jì)數(shù)的檢測(cè)方法[6]。2014年Rack B等[7]使用Cellsearch系統(tǒng)用于2026例Ⅰ～Ⅲ期乳腺癌患者外周血CTCs檢測(cè)，CTCs的捕獲率僅21.5%（435/2026）。其中Ⅰ期患者檢出率僅為0.6%（14/2026），Ⅱ期患者檢出率為10.2%（206/2026），Ⅲ期患者檢出率為10.5%（212/2026）?？梢?，Cellsearch系統(tǒng)在早期患者檢出率低，在檢測(cè)和監(jiān)控中的使用均因敏感度過低而受限。在21.5%檢出CTCs陽(yáng)性細(xì)胞的患者樣本中，Cellsearch僅分離出少量癌細(xì)胞，檢出CTCs數(shù)目為（0～827）個(gè)/30 mL，其中位數(shù)為1 個(gè)/30 mL，僅有3.1%（63/2021）患者檢出大于5個(gè)/30 mL。此外，低下的富集效率和產(chǎn)物純度也是該體系的缺點(diǎn)，給下游分析帶來挑戰(zhàn)。

IsoFluxTM是一項(xiàng)新型免疫磁富集儀器和微流控盒，它使用單個(gè)或多個(gè)捕獲抗體（通常以EpCAM為目標(biāo)），可從生物樣品中分離出完整的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）和其他罕見細(xì)胞類型，然后通過免疫熒光染色和自動(dòng)熒光顯微鏡掃描對(duì)采集的細(xì)胞進(jìn)行分析。IsoFluxTM可提供簡(jiǎn)單、高效的細(xì)胞轉(zhuǎn)移方法，使細(xì)胞從芯片轉(zhuǎn)移至下一步檢測(cè)的轉(zhuǎn)移率高達(dá)95%。流體聚焦技術(shù)產(chǎn)生極高的分離效率和最低的背景，因其洗脫體積極低（<5 μL）、背景污染極小，最大限度保留了樣本的完整性，為下游分析提供足夠的CTCs。富集的細(xì)胞可以與下游計(jì)數(shù)、qPCR（基因表達(dá)，突變分析）、免疫表型分型（IHC，IF）、染色體畸變分析等檢測(cè)方式相適應(yīng)。在此過程中，CTCs檢測(cè)過程大部分能由儀器自動(dòng)化完成，最大程度避免手工操作導(dǎo)致的各種不穩(wěn)定，提升實(shí)驗(yàn)室工作效率（其工作簡(jiǎn)化流程圖見圖8）。

CTCs十分罕見，僅占外周血中白細(xì)胞（WBC）的1/106～1/107，其檢出十分困難。IsoFluxTM系統(tǒng)可降低白細(xì)胞背景，極大地減少了干擾。殘留的淋巴細(xì)胞可能會(huì)干擾進(jìn)一步的CTCs分析，但通過免疫細(xì)胞染色后排除CD45+細(xì)胞，可以克服細(xì)胞間視覺分析這一問題。此次研究檢出CTCs數(shù)量占總細(xì)胞百分比在0.0%～34.5%之間，平均值為6.0%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于外周血中CTCs在白細(xì)胞中的所占比例。另一方面，對(duì)確診乳腺癌患者術(shù)前使用IsoFluxTM系統(tǒng)可全部檢測(cè)到CTCs，陽(yáng)性捕獲率100%，每7.5 mL全血中CTCs數(shù)目2～4201不等，中位數(shù)173.5;總共檢出CTCs 15 165個(gè)，平均為689.3個(gè)。95.5%（21/22）檢查到每7.5 mL全血5個(gè)以上CTCs細(xì)胞計(jì)數(shù)。因此，該系統(tǒng)用于乳腺癌CTCs的捕獲敏感性和檢出數(shù)量占有明顯優(yōu)勢(shì)。

與此同時(shí)，IsoFluxTM系統(tǒng)在其他類型癌癥中也展現(xiàn)出巨大的潛力。Rao Q等[8]首次將IsoFluxTM應(yīng)用于卵巢癌的研究當(dāng)中，該系統(tǒng)從95.7%（22/23）的卵巢癌患者中檢測(cè)到CTCs計(jì)數(shù)，平均數(shù)為150.6 個(gè)/7.5 mL;87.0%（20/23）檢測(cè)到8個(gè)以上的CTCs計(jì)數(shù);Alva A等[6]在膀胱癌的研究中將IsoFluxTM和Cellsearch系統(tǒng)進(jìn)行了比較，術(shù)前將9個(gè)樣本分別運(yùn)用兩個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行CTCs的檢測(cè)，IsoFluxTM系統(tǒng)顯示4個(gè)樣本（44%）收集到CTCs≥10個(gè)/7.5 mL，而Cellsearch系統(tǒng)CTCs檢出率為0（0%）。IsoFluxTM不僅提高了CTCs檢測(cè)的靈敏度，而且在膀胱癌低/中/高各分類級(jí)別中體現(xiàn)了良好的可重復(fù)性;在60%的新輔助化療病例和73%的轉(zhuǎn)移性病例中體現(xiàn)了中高等水平的捕獲力。在關(guān)于前列腺癌另一份研究[9]中同樣將兩系統(tǒng)進(jìn)行比較，IsoFluxTM具有更好的表現(xiàn)。Cellsearch收獲CTCs平均為（10.1±9.3），只有43%檢測(cè)到5個(gè)以上的CTCs，而IsoFluxTM收獲CTCs平均為（37.6±20.8），在90%的樣本中都檢測(cè)到超過5個(gè)CTCs，IsoFluxTM檢出數(shù)量和檢出率是Cellsearch的兩倍;使用IsoFluxTM分離7.5 mL血液樣本中的CTCs需要3 h 25 min，比Cellsearch分離CTCs共需4 h更快，這種樣品制備方法的改進(jìn)使得IsoFluxTM可以高效應(yīng)用于臨床。因此，IsoFluxTM系統(tǒng)在卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌中均體現(xiàn)了較高的臨床價(jià)值。

有意思的是本組1例乳腺癌術(shù)后2年出現(xiàn)肺部多發(fā)結(jié)節(jié)的患者，該患者初始治療時(shí)為22歲女性，經(jīng)空芯針穿刺活組織檢查確診為三陰型乳腺癌，腫物7 cm大小，局部晚期，未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。經(jīng)新輔助化療后行左乳癌改良根治術(shù)，術(shù)后2年出現(xiàn)肺部多發(fā)結(jié)節(jié)（圖2～4）。當(dāng)時(shí)患者曾往返國(guó)內(nèi)多家大醫(yī)院都不能確定或排除肺轉(zhuǎn)移，而患者當(dāng)時(shí)急于結(jié)婚生育，筆者決定給她加做一項(xiàng)CTCs檢測(cè)，最后報(bào)告顯示CTCs數(shù)目為0（如圖5）。筆者分析：之前檢測(cè)的22例I～I(xiàn)II期可手術(shù)乳腺癌患者，CTCs檢出率為100%，假設(shè)該患者肺部結(jié)節(jié)為乳腺癌轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，則病情已進(jìn)展到IV期，必定能檢測(cè)出CTCs，但事實(shí)上該患者CTCs檢出結(jié)果為0。據(jù)此推斷，它的肺部結(jié)節(jié)非乳腺癌轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。于是她聽取了筆者的意見，結(jié)婚并成功生育。在之后4年的影像學(xué)隨訪的過程中，未發(fā)現(xiàn)乳腺癌轉(zhuǎn)移征象。由此可證實(shí)筆者通過CTCs檢測(cè)做出的判斷是準(zhǔn)確的。

本組數(shù)據(jù)中，出現(xiàn)了好幾例上千個(gè)甚至多達(dá)4201個(gè)CTCs的報(bào)告單，而在以往的研究中少有超過千位CTCs計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)。筆者曾一度懷疑該儀器檢測(cè)的準(zhǔn)確性及該陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)的可靠性。由于IsoFluxTM還未普及臨床，可用于研究的臨床樣本量偏少，還無(wú)法從以往文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)中得知可能的假陽(yáng)性率與假陰性率。同時(shí)不排除這幾位患者已存在微轉(zhuǎn)移灶而影像學(xué)及其他檢查方法未檢出的可能。CTCs數(shù)目值過大也可能與病理分型、ER、PR、HER-2 狀態(tài)等相關(guān)。腫瘤侵襲性更強(qiáng)、預(yù)后更差的患者檢測(cè)出CTCs數(shù)目也可能更高。因此，仍需大樣本、前瞻性的臨床研究來驗(yàn)證以上幾種可能。本組懷疑乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的病例，CTCs檢測(cè)為0，我們據(jù)此排除了肺轉(zhuǎn)移，也從側(cè)面證實(shí)本組CTCs檢測(cè)的可靠性、準(zhǔn)確性。

在此次觀察過程中，還發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)及以上CTCs聚集形成的CTCs簇（CTCs cluster）（封三圖3）。有研究表明[10-14]，它的存在可縮短無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）和總生存期（OS），是一個(gè)獨(dú)立的復(fù)發(fā)和死亡率指標(biāo)。IsofluxTM對(duì)CTCs簇的發(fā)現(xiàn)更體現(xiàn)了它在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。

本研究還分析了22例可手術(shù)乳腺癌 CTCs數(shù)目與患者腫物大小、臨床分期的關(guān)系。結(jié)果顯示腫塊大小和log（CTCs）顯著相關(guān)。其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為隨著腫塊大小的增加，CTCs數(shù)量?jī)A向于減少，減少的幅度在腫塊較小時(shí)比較大。而CTCs的數(shù)量與乳腺癌TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）不存在顯著的相關(guān)性。這與之前的研究結(jié)果相悖。Ma S等[15]在對(duì)187位乳腺癌患者的研究中發(fā)現(xiàn)，CTCs計(jì)數(shù)與TNM分期、腫瘤大小、ki-67、分子分類和內(nèi)分泌治療之間存在相關(guān)性。Kang BJ等[16]認(rèn)為，CTCs數(shù)量與原發(fā)腫瘤體積呈正相關(guān)[16]。本研究分析本組統(tǒng)計(jì)結(jié)果的差異可能與樣本量偏少有關(guān)。CTCs數(shù)目與腫塊大小、TNM分期的關(guān)系還有待進(jìn)一步闡明。

總之，CTCs數(shù)目不僅與腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且與無(wú)進(jìn)展生存期、總生存期密切相關(guān)，對(duì)指導(dǎo)乳腺癌的診斷、治療及預(yù)后判斷有重要意義。而 CTCs 檢測(cè)技術(shù)作為一種非侵入性的腫瘤診斷方法，對(duì)患者無(wú)副作用且操作簡(jiǎn)便，更容易為患者所接受。分離富集CTCs技術(shù)具有良好的可重復(fù)性，達(dá)到實(shí)時(shí)檢測(cè)疾病進(jìn)展的目的。CTCs的分離和鑒定是轉(zhuǎn)移性腫瘤研究中一項(xiàng)快速發(fā)展的技術(shù)，但是，如何準(zhǔn)確檢測(cè)到CTCs是最重要的課題。只有檢測(cè)的CTCs是準(zhǔn)確無(wú)誤的，才能給治療和監(jiān)測(cè)提供重要指導(dǎo);若檢測(cè)有誤，有可能導(dǎo)致診療決策失誤。如何有效和準(zhǔn)確地檢測(cè)CTCs是當(dāng)前臨床都在探索的一個(gè)重要課題。此次將IsoFluxTM系統(tǒng)應(yīng)用于乳腺癌CTCs檢測(cè)進(jìn)行臨床研究過程中取得一些初步的成果。該系統(tǒng)人工操作步驟少，運(yùn)行速度快，捕獲率極高，在乳腺癌CTCs檢測(cè)中具有美好前景，未來可能成為乳腺癌患者CTCs檢測(cè)的一個(gè)理想選擇。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Becker TM，Caixeiro NJ，Lim SH，et al. New frontiers in circulating tumor cell analysis：A reference guide for biomolecular profiling toward translational clinical use[J]. International Journal of Cancer，2014，134（11）：2523-2533.

[2] Wang C，Mu Z，Chervoneva I，et al. Longitudinally collected CTCs and CTC-clusters and clinical outcomes of metastatic breast cancer[J]. Breast Cancer Research and Treatment，2017，161（1）：83-94.

[3] Mego M，Mani SA，Cristofanilli M，et al. Molecular mechanisms of metastasis in breast cancer--clinical applications[J]. Nat Rev Clin Oncol，2010，7（12）：693-701.

[4] Cristofanilli M，Budd GT，Ellis MJ，et al. Circulating tumor cells，disease progression，and survival in metastatic breast cancer[J]. New England Journal of Medicine，2004， 351（8）：781-791.

[5] Hortobagyi GN，Connolly JL，DOrsi CJ，et al. AJCC cancer staging manual[J]. Breast，2017：589-636.

[6] Alva A，F(xiàn)riedlander T，Clark M，et al. Circulating tumor cells as potential biomarkers in bladder cancer[J]. The Journal of Urology，2015，194（3）：790-798.

[7] Rack B，Schindlbeck C，Jückstock J，et al. Circulating tumor cells predict survival in early average-to-high risk breast cancer patients[J]. Journal of the National Cancer Institute，2014，106（5）：66-76.

[8] Rao Q，Zhang Q，Zheng C，et al. Detection of circulating tumour cells in patients with epithelial ovarian cancer by a microfluidic system[J]. Int J Clin Exp Pathol，2017，10（9）：9599-9606.

[9] Xu L，Mao X，Imrali A，et al. Optimization and evaluation of a novel size based circulating tumor cell isolation system[J]. PloS One，2015，10（9）：32-54.

[10] Giuliano M，Shaikh A，Lo HC，et al. Perspective on circulating tumor cell clusters：Why it takes a village to metastasize[J]. Cancer Research，2018，78（4）：845-852.

[11] Sawabata N，Susaki Y，Nakamura T，et al. Cluster circulating tumor cells in surgical cases of lung cancer[J]. General Thoracic and Cardiovascular Surgery，2020，10（7）：1-9.

[12] Davis AA，Zhang Q，Gerratana L，et al. Association of a novel circulating tumor DNA next-generating sequencing platform with circulating tumor cells（CTCs） and CTC clusters in metastatic breast cancer[J]. Breast Cancer Research，2019，21（1）：1-8.

[13] Anna F，Malgorzata S，Anna J，et al. Circulating tumor cells in early and advanced breast cancer;Biology and prognostic value[J]. Int J Mol Sci，2020，21（5）：1671-1688.

[14] Thangavel H，Angelis CD，Vasaikar S，et al. A CTC-cluster-specific signature derived from OMICS analysis of patient-derived xenograft tumors predicts outcomes in basal-like breast cancer[J]. Journal of Clinical Medicine，2019，8（11）：1772-1786.

[15] Ma S，Ling F，Gui A，et al. Predictive value of circulating tumor cells for evaluating short-and long-term efficacy of chemotherapy for breast cancer[J]. Medical Science，Monitor：International Medical Journal of Experimental and Clinical Research，2017，7（23）：4808-4816.

[16] Kang BJ，Ra SW，Lee K，et al. Circulating tumor cell number is associated with primary tumor volume in patients with lung adenocarcinoma[J]. Tuberculosis and Respiratory Diseases，2020，83（1）：61-70.

（收稿日期：2020-05-25）