循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展

【摘 要】在我國(guó)快速發(fā)展的過(guò)程中，人類的腫瘤疾病多種多樣，循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）檢測(cè)法具有無(wú)創(chuàng)、可重復(fù)和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的優(yōu)勢(shì)。近年基于物理特性、免疫親和力的CTC富集技術(shù)在腫瘤臨床診斷、治療、預(yù)后等多方面已得到應(yīng)用。文章對(duì)CTC檢測(cè)方法及其在腫瘤早期診斷、分期、預(yù)后及化療療效評(píng)估和用藥指導(dǎo)等臨床應(yīng)用方面進(jìn)行綜述.并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行展望。

【關(guān)鍵詞】循環(huán)腫瘤細(xì)胞;物理特性富集;免疫親和富集;腫瘤輔助診斷;腫瘤用藥指導(dǎo)

【中圖分類號(hào)】R737.15 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2020）10-294-02

引言

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulatingtumorcell，CTC）是指從實(shí)體腫瘤原發(fā)病灶或轉(zhuǎn)移病灶脫落，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)并參與腫瘤疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的腫瘤細(xì)胞亞群。循環(huán)腫瘤細(xì)胞理論的提出為腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、治療療效監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估等相關(guān)研究提供了新的視角，而包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌等的前期研究結(jié)果均在一定程度對(duì)此予以了驗(yàn)證?，F(xiàn)階段研究對(duì)于不同腫瘤類型、不同分期患者外周循環(huán)中存在的CTC的種類及數(shù)量，CTC的分子生物學(xué)特征以及其在腫瘤疾病進(jìn)展中的作用機(jī)制均存在一定爭(zhēng)議。同時(shí)受限于外周循環(huán)中腫瘤細(xì)胞數(shù)量稀少，且與血液細(xì)胞成分混雜，其檢測(cè)與分離極為困難，因而如何有效的檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞并檢獲高純度的循環(huán)腫瘤細(xì)胞成分對(duì)進(jìn)一步的預(yù)后分析及機(jī)制研究顯得尤為重要;本文就循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)及檢獲方式、循環(huán)腫瘤細(xì)胞現(xiàn)階段的臨床應(yīng)用等方面進(jìn)行綜述。

1 CTCs的檢測(cè)技術(shù)

CTCs的檢測(cè)技術(shù)可分為富集和鑒定兩步。CTCs的富集方法主要基于腫瘤細(xì)胞與血細(xì)胞的物理特性和生物特性差異進(jìn)行分離。物理特性主要是利用CTCs體積大小、變形性、密度、電荷等性質(zhì)的特點(diǎn)，利用濾膜、微流控、電化學(xué)等檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行富集。生物特性富集主要是基于CTCs表達(dá)的特定蛋白和其侵襲能力進(jìn)行分離，例如基于腫瘤相關(guān)抗原EpCAM的表達(dá)作免疫分選。其中CTCs的免疫分選方式可分為正性分選和負(fù)性分選，正性分選是利用腫瘤相關(guān)抗原的抗體，如抗EpCAM、抗HER2、抗EGFR等抗體對(duì)目標(biāo)CTC進(jìn)行捕獲，負(fù)性分選是利用白細(xì)胞抗原（如CD45）去除白細(xì)胞。此外，還有許多新發(fā)展的基于納米材料、適配體識(shí)別技術(shù)，基于聲學(xué)原理的分離或腫瘤細(xì)胞端粒酶活性介導(dǎo)的分離體系，以及CTCs體內(nèi)捕獲技術(shù)等，這些方法有望在一定程度上提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。富集后細(xì)胞的鑒定方法主要有細(xì)胞形態(tài)結(jié)合熒光免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）方法、利用多重PCR檢測(cè)腫瘤相關(guān)mRNA以及檢測(cè)分析活腫瘤細(xì)胞特異分泌的蛋白質(zhì)等方法。除了根據(jù)亞群特異的上皮型標(biāo)志物EpCAM、E鈣黏素、CKs等，間質(zhì)型標(biāo)志物N鈣黏素、波形蛋白、ZEB1等進(jìn)行CTCs的鑒定之外，還可以結(jié)合治療相關(guān)、某些腫瘤特異的表面標(biāo)志物同時(shí)對(duì)CTCs進(jìn)行分析，例如CTCs表面表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）的檢測(cè)。此外，Alix-Panabieres曾利用腫瘤細(xì)胞CK19、MUC1等蛋白質(zhì)的分泌對(duì)腫瘤病人體內(nèi)CTCs進(jìn)行了檢測(cè)鑒定。

2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用

2.1 對(duì)于腫瘤早期診斷的臨床價(jià)值

通過(guò)具體的病例分析我們可以知道，這種技術(shù)對(duì)于腫瘤的早期轉(zhuǎn)移過(guò)程有很大的借鑒意義，在具體的臨床過(guò)程中一旦檢測(cè)出了CTC，那么最終患者罹患腫瘤為良性的幾率微乎其微，可以說(shuō)在疾病的前期這項(xiàng)指標(biāo)對(duì)于日后的疾病的防治是一個(gè)標(biāo)桿。這項(xiàng)指標(biāo)對(duì)于腫瘤患者的臨床效果確實(shí)有很大的效果，這是經(jīng)過(guò)一系列的科學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的。

2.2 腫瘤分期

腫瘤分期在腫瘤治療過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，研究已證實(shí)CTC與腫瘤分期存在相關(guān)性，CTC計(jì)數(shù)越高，臨床分期越高。利用Ce1lSearch系統(tǒng)對(duì)94例大腸癌患者進(jìn)行研究，并將血液中CTC數(shù)目多2/7.5mL定義為陽(yáng)性。該研究結(jié)果顯示II期CTC陽(yáng)性率為20.7%，III期為24.1%，W期為60.7%（P=0.005），CTC檢出率隨著分期級(jí)別的增高而升高。對(duì)85例肝癌患者進(jìn)行研究，采用磁性細(xì)胞分選法統(tǒng)計(jì)CTC陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)I期患者陽(yáng)性率為66%，但W期患者陽(yáng)性率為100%，同時(shí)該研究在肝癌中證實(shí)了CTC陽(yáng)性率與TNM分期有相關(guān)性。

2.3 CTC作為腫瘤患者治療療效評(píng)估

通常預(yù)后研究更關(guān)心基線CTC計(jì)數(shù)高于或低于某一特定值時(shí)其同預(yù)后的相關(guān)性，而CTC計(jì)數(shù)對(duì)治療療效的評(píng)估則需要CTC檢測(cè)方式敏感度足夠高以實(shí)現(xiàn)整個(gè)治療期間CTC計(jì)數(shù)變化的有效監(jiān)測(cè)。Nagrath及Stott等人通過(guò)CTC-chip對(duì)CTC進(jìn)行檢測(cè)及監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)肺癌、前列腺癌等患者化療、內(nèi)分泌治療前后CTC計(jì)數(shù)會(huì)明顯下降;雖然治療導(dǎo)致的CTC計(jì)數(shù)值變化受患者個(gè)體之間差異的影響，但仍可作為評(píng)估腫瘤治療療效的參考。此外CellSearch體系及免疫磁珠等方法亦在乳腺癌及前列腺癌轉(zhuǎn)移患者治療療效評(píng)估中得到了一定的驗(yàn)證及應(yīng)用。后期研究需進(jìn)一步關(guān)注治療后CTC計(jì)數(shù)的變化是否可作為監(jiān)測(cè)治療療效反應(yīng)的早期指標(biāo)，以及其是否可作為全周期治療獲益的評(píng)判指標(biāo)。

3 關(guān)于這項(xiàng)技術(shù)的未來(lái)的發(fā)展的展望

從上文中我們可以知道，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展這項(xiàng)技術(shù)自身也在不斷的發(fā)展創(chuàng)新著。但是正是隨著時(shí)代的發(fā)展，一些疾病也出現(xiàn)了很多新的原來(lái)不曾出現(xiàn)的狀況。這說(shuō)明這項(xiàng)技術(shù)在未來(lái)仍然有很大的發(fā)展的空間，以適應(yīng)不斷發(fā)現(xiàn)的新情況。隨著對(duì)于疾病治療運(yùn)用藥物的增加，疾病的抗藥性也出現(xiàn)了增加，普通的藥物對(duì)于疾病的作用越來(lái)越小，這就要求采用更加全面的方法進(jìn)行醫(yī)治。

結(jié)語(yǔ)

CTC富集技術(shù)是一種無(wú)創(chuàng)、實(shí)時(shí)的液體活檢法，可與基因檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用。隨著CTC富集和檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)將更廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤早期診斷、病理分期、預(yù)后評(píng)估、化療療效評(píng)估及靶向藥物用藥指導(dǎo)等方面。同時(shí)CTC體內(nèi)捕獲技術(shù)的進(jìn)步、富集靈敏度和效率的提高、CTC單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的完善，有望在單細(xì)胞異質(zhì)性研究等方面實(shí)現(xiàn)新突破，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)新的腫瘤治療靶標(biāo)，推動(dòng)腫瘤靶向治療藥物的研發(fā)。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：田鵬林 ，男， 1984年7月， 大學(xué)本科，山東聊城，山東省警官總醫(yī)院監(jiān)管醫(yī)療科，主治醫(yī)師，內(nèi)科。