河南省榮軍醫(yī)院(453000)許波
胸腔積液中多存在惡性腫瘤細(xì)胞,40%左右大量胸腔積液由惡性腫瘤引起,常見有肺癌、淋巴瘤、乳腺癌等,惡性胸腔積液主要表現(xiàn)為貧血、干咳、胸痛、體重下降[1]。細(xì)胞病理學(xué)在胸腔積液診斷中具有重要作用,良、惡性胸腔積液診斷多采用細(xì)胞涂片檢查,診斷惡性胸腔積液敏感度達(dá)50%~78%[2]。漿膜腔間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌間細(xì)胞形態(tài)相似,細(xì)胞涂片診斷難度大。而區(qū)分間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌具有重要意義,關(guān)系治療方案的確定。本研究以我院胸腔積液患者為研究對(duì)象,行細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片、免疫組化染色檢測(cè),觀察對(duì)惡性胸腔積液分型診斷符合率的影響,報(bào)告如下。
1.1 一般資料 選取2017年3月~2019年5月我院86例胸腔積液患者,男45例,女41例;年齡21~77歲,平均(49.12±12.57)歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查診斷傾向惡性;標(biāo)本為胸腔積液;患者簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn):其他部位惡性腫瘤。
1.3 方法
1.3.1 標(biāo)本制備 抽取胸腔積液10ml,分裝在3~5個(gè)管,離心(3000r/min)10min取部分沉渣,制備蘇木精-伊紅(HE)涂片。將剩余沉渣用試鏡紙包裹,用10%福爾馬林固定液固定,經(jīng)常規(guī)處理,制備成細(xì)胞蠟塊,連續(xù)細(xì)胞切片,厚3~4μm。對(duì)細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片進(jìn)行HE染色、免疫組化染色。
1.3.2 HE染色結(jié)果 由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)。根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、黏附性、核不典型性分為惡性、良性、無法肯定,良性:存在反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)溫和、彌散良好、存在典型性;惡性:惡性間皮瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性腺癌,細(xì)胞成團(tuán),細(xì)胞形態(tài)嚴(yán)重不溫和,核存在重度不典型性;無法肯定:細(xì)胞彌散,核存在中度或重度不典型性,或細(xì)胞成團(tuán),核存在中度或輕度不典型性。
1.3.3 免疫組化染色結(jié)果 采用免疫組織化學(xué)(SP)法,二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑購自上海雅吉生物科技有限公司,Maxvision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。抗體為CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin。染色過程嚴(yán)格按照說明書操作。用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)代替一抗設(shè)置空白對(duì)照,染色切片中選擇陽性組織染色設(shè)立陽性對(duì)照。支持間皮細(xì)胞的免疫組化指標(biāo):WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin;支持肺腺癌免疫組化指標(biāo):CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1。判定標(biāo)準(zhǔn):陽性:BerEP4、CK7、MOC-31、CEA、Desmin、CK5/6染色呈棕黃色細(xì)胞質(zhì),WT-1、TTF-1染色細(xì)胞核呈棕黃色,Calretinin染色細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核均顯色,CD15細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜染色。
1.4 觀察指標(biāo) ①對(duì)比細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果。②惡性胸腔積液分型診斷符合率。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS22.0分析數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用n(%)表示,χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1 細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果 細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色結(jié)果對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細(xì)胞涂片免疫組化染色的37.21%(P<0.05),見附表1、2。
2.2 惡性胸腔積液分型診斷符合率 確診的45例惡性胸腔積液患者中,細(xì)胞塊切片免疫組化確診惡性44例,誤診1例,診斷符合率為97.78%(44/45),其中肺腺癌36例、肺鱗癌4例、惡性間皮瘤3例,均經(jīng)肺、胸膜穿刺活檢組織學(xué)證實(shí),淋巴瘤1例經(jīng)活檢確診為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤,誤診1例,經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為足跟部惡性黑色素瘤伴胸腔轉(zhuǎn)移。肺腺癌細(xì)胞對(duì)CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達(dá)率高,惡性間皮瘤細(xì)胞對(duì)WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達(dá)率高;細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測(cè)惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細(xì)胞涂片檢測(cè),見附表3。
正常人胸膜腔內(nèi)存在5~15ml液體,起潤滑作用。當(dāng)胸部損傷、胸膜通透性增加、壁層胸膜淋巴回流障礙時(shí),可引起胸腔積液。滲出性胸腔積液多與胸膜惡性腫瘤、淋巴細(xì)胞異常等有關(guān)[3]。因此,需鑒別胸腔積液的良惡性。
附表1 HE染色結(jié)果[n(%),n=86]
附表2 免疫組化染色結(jié)果[n(%),n=86]
附表3 惡性胸腔積液分型診斷符合率
胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本采集方便,制片快速,是病理診斷的常用方法。細(xì)胞涂片HE染色觀察對(duì)積液細(xì)胞性質(zhì)判斷具有重要價(jià)值,但胸腔積液中細(xì)胞成分復(fù)雜,各種細(xì)胞形態(tài)類似,僅憑細(xì)胞涂片可能無法做出準(zhǔn)確診斷,特別是惡性間皮瘤與轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞形態(tài)非常相似[4][5]。部分病理醫(yī)生僅通過觀察細(xì)胞涂片HE染色,鑒別難度大,易出現(xiàn)誤診。而惡性間皮瘤與肺腺癌鑒別對(duì)指導(dǎo)臨床治療具有重要作用。此外,除肺腺癌外,肺鱗癌、淋巴瘤、其他腺癌、惡性黑色素瘤等也可引起胸腔積液,鑒別難度加大,需特殊染色才可能確定轉(zhuǎn)移性腫瘤來源[6]。
黃其文等[7]研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞塊切片是診斷惡性胸腔積液的有效方法,聯(lián)合免疫組化染色可為鑒別診斷肺腺癌提供依據(jù)。本研究對(duì)86例胸腔積液患者進(jìn)行細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊切片檢查,均行HE染色、SP染色,結(jié)果顯示,細(xì)胞涂片、細(xì)胞塊切片的HE染色結(jié)果對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細(xì)胞涂片免疫組化染色的37.21%(P<0.05),說明細(xì)胞塊切片免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準(zhǔn)確率高。本研究中細(xì)胞塊分布均勻,細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)良好,而細(xì)胞涂片分布不均勻,可能出現(xiàn)重疊,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)模糊,結(jié)構(gòu)不清晰。細(xì)胞涂片免疫組化染色有助于胸腔積液良惡性鑒別,但涂片細(xì)胞數(shù)量不等、厚薄不均,易出現(xiàn)高背景著色,造成誤診,且陽性表達(dá)細(xì)胞缺乏對(duì)應(yīng)性,影響判讀。細(xì)胞涂片免疫組化染色結(jié)果中15例無法確定良惡性。而細(xì)胞塊切片免疫組化染色細(xì)胞分布均勻,可準(zhǔn)確判讀,且包埋細(xì)胞塊能永久性保留標(biāo)本,以待日后回顧研究。
本研究還顯示,細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測(cè)惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細(xì)胞涂片檢測(cè),肺腺癌細(xì)胞對(duì)CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達(dá)率高,惡性間皮瘤細(xì)胞對(duì)WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達(dá)率高,可見,細(xì)胞塊免疫組化染色有助于判定漿膜腔積液細(xì)胞類型及性質(zhì),是理想的細(xì)胞病理檢測(cè)方法,可能與本研究綜合多種抗體染色結(jié)果分析,消除各抗體表達(dá)差異,避免交叉反應(yīng),從而提高敏感性有關(guān)。且細(xì)胞塊制作簡(jiǎn)單,易保存,免疫組化SP檢測(cè)簡(jiǎn)單方便,可在基層醫(yī)院廣泛開展應(yīng)用。
綜上所述,細(xì)胞塊免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準(zhǔn)確率高,有助于判定漿膜腔積液細(xì)胞類型及性質(zhì),是理想的細(xì)胞病理檢測(cè)方法。