氨茶堿片含量測(cè)定的不確定度評(píng)定

北京市朝陽(yáng)區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心（100124）韓鋒 錢(qián)鈺娟 劉開(kāi)玉

氨茶堿為茶堿與乙二胺復(fù)鹽，其藥理作用主要來(lái)自茶堿，乙二胺使其水溶性增強(qiáng)。本品對(duì)呼吸道平滑肌有直接松弛作用。能夠增強(qiáng)膈肌收縮力，改善呼吸功能。適用于支氣管哮喘、喘息型支氣管炎、阻塞性肺氣腫等緩解喘息癥狀；也可用于心源性肺水腫引起的哮喘。茶堿的毒性與常出現(xiàn)在血清濃度為15～20μg/ml，特別是在治療開(kāi)始，早期多見(jiàn)的有惡心、嘔吐、易激動(dòng)、失眠等，當(dāng)血清濃度超過(guò)20μg/ml，可出現(xiàn)心動(dòng)過(guò)速、心律失常，血清中茶堿超過(guò)40μg/ml，可發(fā)生發(fā)熱、失水、驚厥等癥狀，嚴(yán)重的甚至呼吸、心跳停止致死[1]。因此在日常監(jiān)督中，氨茶堿片的含量應(yīng)在藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的區(qū)間范圍內(nèi)，以保證用藥安全。

測(cè)量不確定度，簡(jiǎn)稱(chēng)不確定度，是根據(jù)所用到的信息，表征賦予被測(cè)量值分散性的非負(fù)參數(shù)[2]。不確定度可以度量某個(gè)結(jié)果與其他結(jié)果相吻合的程度，從而度量結(jié)果的可信度，以此證明結(jié)果的適宜性和質(zhì)量[3]。本文參考國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)定JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，并查看相關(guān)材料及文獻(xiàn)，對(duì)氨茶堿片含量測(cè)定（無(wú)水茶堿和乙二胺）進(jìn)行不確定度的分析與評(píng)定，提高被測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信性。

1 材料與方法

1.1 無(wú)水茶堿含量測(cè)定

1.1.1 儀器與試劑 TU-1901型紫外分光光度計(jì)（普析通用公司）；Mettler-XP105DR型電子天平 (瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.01mol·L-1氫氧化鈉（分析純）溶液；水為純化水。200ml容量瓶，250ml容量瓶及5ml單標(biāo)移液管(均為A級(jí))。氨茶堿片[規(guī)格：0.1g，批號(hào)：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實(shí)驗(yàn)溫度：27℃，實(shí)驗(yàn)用移液管及容量瓶校正溫度：20℃。

1.1.2 樣品的處理及測(cè)定[4]取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于氨茶堿100mg），置200ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液20ml與水60ml，振搖10分鐘使氨茶堿溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置250ml容量瓶中，加0.01mol·L-1氫氧化鈉溶液至刻度，搖勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C7H8N4O2的吸收系數(shù)為650計(jì)算，即得。

1.2 乙二胺含量測(cè)定

1.2.1 儀器與試劑 Mettler-XP105DR型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.1mol·L-1鹽酸滴定液（國(guó)家化學(xué)試劑質(zhì)檢中心，標(biāo)定濃度：0.1001mol·L-1）；水為純化水。25ml滴定管(A級(jí))。氨茶堿片[規(guī)格：0.1g，批號(hào)：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實(shí)驗(yàn)溫度：26℃，實(shí)驗(yàn)用滴定管校正溫度：20℃。

1.2.2 樣品的處理及測(cè)定[4]取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于氨茶堿0.5g），加水50ml，微溫使溶解，放冷，加茜素磺酸鈉指示液8滴，用鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）滴定至溶液顯黃色。每1ml鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）相當(dāng)于3.005mg的C2H8N2。

2 數(shù)學(xué)模型

2.1 無(wú)水茶堿含量測(cè)定

式中：A275nm：275nm處的吸光度；m：樣品稱(chēng)樣量；：吸收系數(shù)；m20：20片片重；：稀釋倍數(shù)；標(biāo)示量：0.1g。

2.2 乙二胺含量測(cè)定

式中：V：消耗鹽酸滴定液的體積；T：滴定度；C：鹽酸滴定液的濃度；m：樣品稱(chēng)樣量；m20：20片片重；標(biāo)示量：0.1g。

3 不確定度的來(lái)源和評(píng)定

實(shí)際實(shí)驗(yàn)中采用平行測(cè)定法，由于兩次測(cè)量值接近，故選取第一組測(cè)量值計(jì)算不確定度。

3.1 無(wú)水茶堿含量測(cè)定的不確定度

3.1.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 本品規(guī)格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.1043g，m2=0.1028g；吸光度：A275nm(1)=0.529，A275nm(2)=0.523；計(jì)算得含無(wú)水茶堿為氨茶堿標(biāo)示量：F1=79.62%，F(xiàn)2=79.87%，F(xiàn)=79.7%。

3.1.2 樣品稱(chēng)量（m）引入的不確定度 電子天平校正產(chǎn)生的不確定度，按檢定證書(shū)提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.1.2.1 精密稱(chēng)定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱(chēng)量，需使用兩次：

3.1.2.2 精密稱(chēng)取樣品適量（約相當(dāng)于氨茶堿100mg）引入的不確定度 采用減重法稱(chēng)量，需使用兩次：。

3.1.3 玻璃容量器以及溫度變化引入的不確定度

3.1.3.1 溶解氨茶堿所用的200ml容量瓶引入的不確定度 使用200mlA級(jí)容量瓶，檢定證書(shū)提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度

3.1.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。實(shí)驗(yàn)溫度27℃，玻璃容量器校準(zhǔn)溫度20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1；產(chǎn)生的體積變化為±（200×7×2.1×10-4）=±0.294ml。

3.1.3.3 精密量取續(xù)濾液5ml所用的5ml單標(biāo)線吸管引入的不確定度 使用5mlA級(jí)單標(biāo)線吸管，檢定證書(shū)提供的最大允差：±0.015ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.015/=0.0061ml。

3.1.3.4 溫度變化引入的不確定度 產(chǎn)生的體積變化為±（5×7×2.1×10-4）=±0.0074ml；按均勻分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3.1.3.5 定容氨茶堿所用的250ml容量瓶引入的不確定度 使用250mlA級(jí)容量瓶，檢定證書(shū)提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3.1.3.6 溫度變化引入的不確定度 產(chǎn)生的體積變化為±（250×7×2.1×10-4）=±0.3675ml；按均勻分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

3.1.4 紫外分光光度計(jì)引入的不確定度 檢定證書(shū)給出的定量測(cè)量重現(xiàn)性為0.3%，按均勻分布，。

3.1.5 重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度 采用極差法評(píng)定，即F1=79.62%，F(xiàn)2=79.87%，極差系數(shù)C＝1.13，n=2；。

3.1.8 擴(kuò)展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.46%=0.92%。

本次氨茶堿片中無(wú)水茶堿含量測(cè)定結(jié)果為氨茶堿標(biāo)示量的(79.7±1.0)%，k=2。

3.2 乙二胺含量測(cè)定的不確定度

3.2.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：本品規(guī)格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.5107g，m2=0.5103g；滴定結(jié)果：V1=22.60ml，V2=22.55ml。

計(jì)算得含乙二胺為氨茶堿標(biāo)示量：F1=13.584%，F(xiàn)2=13.564%，F(xiàn)=13.57%。

3.2.2 樣品稱(chēng)量（m）引入的不確定度 電子天平校正產(chǎn)生的不確定度，按檢定證書(shū)提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度：。

3.2.2.1 精密稱(chēng)定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱(chēng)量，需使用兩次：。

3.2.2.2 精密稱(chēng)取樣品適量（約相當(dāng)于氨茶堿0.5g）引入的不確定度 采用減重法稱(chēng)量，需使用兩次：。

3.2.3 鹽酸滴定液滴定體積引入的不確定度

3.2.3.1 25ml酸式滴定管引入的不確定度使用25ml A級(jí)酸式滴定管，檢定證書(shū)提供的最大允差：±0.04ml。

按三角分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.04/=0.016ml。

3.2.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。

實(shí)驗(yàn)溫度26℃，玻璃容量器校準(zhǔn)溫度20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1，產(chǎn)生的體積變化為±（22.60×6×2.1×10-4）=±0.0285ml。

按均勻分布轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.0285/=0.016ml；。

3.2.4 鹽酸滴定液（C）引入的不確定度 鹽酸滴定液（0.1mol/L），購(gòu)自國(guó)家化學(xué)試劑質(zhì)檢中心，標(biāo)定濃度為0.1001mol·L-1，擴(kuò)展不確定度0.2%，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：。

3.2.5 重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度 采用極差法評(píng)定，即F1=13.584%，F(xiàn)2=13.564%，極差系數(shù)C＝1.13，n=2。。

3.2.6 滴定度（T）引入的不確定度 滴定度由藥典直接給出，未給出不確定度，忽略不計(jì)。

3.2.8 擴(kuò)展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.026%=0.052%。本次氨茶堿片中乙二胺含量測(cè)定結(jié)果為氨茶堿標(biāo)示量的(13.57±0.06)%，k=2。

4 討論

在藥物質(zhì)量分析中運(yùn)用不確定度測(cè)量有助于分析各種不確定來(lái)源對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，對(duì)藥物分析結(jié)果具有重要意義，同時(shí)可以幫助實(shí)驗(yàn)室控制數(shù)據(jù)質(zhì)量，提高工作水平，分析關(guān)鍵因素，有針對(duì)性地進(jìn)行有效的質(zhì)量保證和控制措施，以確保過(guò)程穩(wěn)定并受控。本文通過(guò)分析及計(jì)算氨茶堿片含量測(cè)定方法中，各個(gè)不確定度的來(lái)源及數(shù)值，可以看出，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大的因素包括稱(chēng)量、稀釋、儀器及重復(fù)性等。在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)盡量避免過(guò)小的稱(chēng)樣量；應(yīng)盡量減少稀釋步驟，并盡量選擇較大體積的容量器；實(shí)驗(yàn)室所用儀器應(yīng)按時(shí)檢定及校準(zhǔn)，以確保儀器靈敏度符合測(cè)量精度要求；應(yīng)盡量增加實(shí)驗(yàn)次數(shù)，減小重復(fù)性引入的不確定度，提高結(jié)果質(zhì)量。