張珍妮 張維明 葉坤偉

胰腺癌是一種高度惡性的消化腺腫瘤，具有惡性程度高、發(fā)病隱匿、早期診斷困難及治療效果較差等特點(diǎn)，導(dǎo)致患者病死率居高不下[1]。早期胰腺癌患者無(wú)明顯體征及臨床癥狀，大多數(shù)患者就診時(shí)往往已進(jìn)展至中晚期，已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，不適合行手術(shù)治療，中位生存期為6～12個(gè)月[2]。目前關(guān)于胰腺癌的早期診斷標(biāo)志物及新型治療手段的研發(fā)已成為研究熱點(diǎn)，以期改善胰腺癌患者的預(yù)后情況，從而提高生存率。隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展及檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，越來(lái)越多的非編碼RNA被報(bào)道在胰腺癌中的表達(dá)水平發(fā)生顯著變化，如微RNA(miRNA)、非編碼長(zhǎng)鏈RNA(lncRNA)等[3-4]。王杰等[5]發(fā)現(xiàn)，miR-1181可抑制腫瘤干細(xì)胞的成球形成率，同時(shí)減少側(cè)群細(xì)胞形成，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能，同時(shí)該課題組在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)miR-1181可抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖[6]，但目前關(guān)于miR-1181在胰腺癌組織中的表達(dá)情況及其意義的報(bào)道較少。本文擬通過(guò)闡明上述問(wèn)題，為胰腺癌的進(jìn)一步治療提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年5月至2018年9月于廣西醫(yī)科大學(xué)附屬武鳴醫(yī)院就診的75例胰腺癌患者，所有患者入院后均接受手術(shù)治療，留取術(shù)中的腫瘤組織及癌旁組織，同時(shí)行術(shù)中快速病理檢測(cè)明確為胰腺癌。75例患者中男性37例，女性38例，年齡為45～80歲，平均年齡為(57.21±6.39)歲。腫瘤分化程度及臨床病理分期參考《胰腺癌診治指南(2014)》[7]。腫瘤分化程度：高分化者33例，中低分化者42例；發(fā)生轉(zhuǎn)移(包括淋巴結(jié)及肝臟等臟器轉(zhuǎn)移)患者26例，無(wú)轉(zhuǎn)移患者49例；臨床分期：Ⅰ期19例、Ⅱ期22例、Ⅲ期20例、Ⅳ期14例。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)術(shù)中病理檢驗(yàn)明確診斷為胰腺癌，且同意入組；(2)首次發(fā)現(xiàn)，既往未接受手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療及其他綜合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；(2)合并嚴(yán)重肝、腎疾病，不適宜入組者。收集患者的腫瘤組織及距離腫瘤組織邊緣>2 cm的癌旁組織樣本(經(jīng)病理證實(shí)為正常組織)，儲(chǔ)存于液氮中備用。本研究所有患者的診療方案均獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，并獲得充分知情同意權(quán)，入組即刻簽署相關(guān)知情同意書。

1.2 檢測(cè)腫瘤組織及癌旁組織的miR-1181水平

液氮中取出樣本組織，應(yīng)用TRIzol試劑及miRNeasy RNA isolation試劑盒(德國(guó)Qiagen公司)提取相關(guān)樣本組織中的總RNA，提取過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，通過(guò)光密度測(cè)定法測(cè)量其濃度和純度。應(yīng)用Taq-Man miRNA Reverse Transcription試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，以U6為內(nèi)參，采用qRT-PCR法檢測(cè)miR-1181擴(kuò)增水平，每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)5次，采用2-ΔΔCt計(jì)算miR-1181的相對(duì)表達(dá)量。qRT-PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min；57 ℃ 40 s、72 ℃ 40 s，共 40個(gè)循環(huán)。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 胰腺癌組織與癌旁組織中miR-1181的表達(dá)

結(jié)果顯示，miR-1181在胰腺癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.45±0.11，顯著低于癌旁組織(1.03±0.27)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.229，P<0.001)。如圖1所示。

圖1 胰腺癌組織及癌旁組織中miR-1181的表達(dá)水平

2.2 單因素分析miR-1181與胰腺癌患者臨床指標(biāo)的關(guān)系

以胰腺癌組織中miR-1181相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)(0.37)為界，將患者分為高表達(dá)組(miR-1181>0.37，n=36)和低表達(dá)組(miR-1181≤0.37，n=39)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與低表達(dá)組相比較，高表達(dá)組中臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、高分化程度、無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移者的比例高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。如表2所示。

表2 單因素分析miR-1181與胰腺癌臨床指標(biāo)的關(guān)系

2.3 二元Logistic回歸分析miR-1181與胰腺癌臨床指標(biāo)之間的關(guān)系

由表2可知，miR-1181表達(dá)水平與胰腺癌臨床分期、腫瘤轉(zhuǎn)移及分化程度相關(guān)，以臨床分期(Ⅲ～Ⅳ)、發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移及分化程度(中低分化)為自變量，以miR-1181低表達(dá)為因變量進(jìn)行二元Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)miR-1181低表達(dá)與胰腺癌臨床分期及發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，P均<0.05。見(jiàn)表3。

表3 二元Logistic回歸分析miR-1181與胰腺癌臨床指標(biāo)之間的相關(guān)性

3 討論

miRNA作為內(nèi)源性的單鏈非編碼RNA，通過(guò)與靶mRNA的3′-UTR結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄后表達(dá)，影響相關(guān)蛋白合成，調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)行為，參與多種消化道疾病的發(fā)生、發(fā)展[8-9]。有報(bào)道指出，miR-17-92可通過(guò)MEK-ERK信號(hào)通路影響胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)周期，抑制胰腺癌細(xì)胞增殖[10]；ARK5/miR-1181/HOXA10軸的激活可促進(jìn)腫瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[11]；miRNA-330-5p在結(jié)腸癌中表達(dá)下調(diào)，發(fā)揮抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的能力[12]。目前關(guān)于miR-1181參與腫瘤發(fā)生的機(jī)制研究尚少，既往有體外研究發(fā)現(xiàn)，miR-1181可通過(guò)抑制STAT3影響胰腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力，該研究指出敲低miR-1181可促進(jìn)STAT3表達(dá)，通過(guò)影響F-actin發(fā)揮作用，而F-actin不被剪切，有利于腫瘤細(xì)胞偽足的形成，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的遷移能力[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織miR-1181表達(dá)水平顯著低于癌旁組織(P<0.05)，提示miR-1181在胰腺癌組織中表達(dá)下調(diào)，與以往的報(bào)道結(jié)果相似[5,13]。此外，本研究進(jìn)一步評(píng)估了miR-1181與胰腺癌患者臨床特征的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)miR-1181高表達(dá)組患者中，腫瘤分期為Ⅰ～Ⅱ、腫瘤高分化程度及未發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的比例均顯著高于miR-1181低表達(dá)組，表明miR-1181是一種抑癌基因，可抑制胰腺癌的進(jìn)展[13]。同時(shí)，二元Logistic回歸分析結(jié)果也驗(yàn)證了miR-1181低表達(dá)與胰腺癌進(jìn)展有關(guān)，其是胰腺癌臨床分期(Ⅲ～Ⅳ期)及腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究的不足之處在于為單中心研究，樣本量相對(duì)較小，且未進(jìn)一步分析miR-1181抑制胰腺癌增殖的具體機(jī)制及下游靶點(diǎn)。綜上所述，miR-1181可參與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展，是潛在的胰腺癌治療的基因靶點(diǎn)。