正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化閃式提取荷葉總黃酮工藝

陳俊波，張鈺綺，初佳琦，董樹(shù)國(guó)*

(1.海南職業(yè)技術(shù)學(xué)院，海南 ?？?570216;2.吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

荷葉是睡蓮科植物蓮的干燥葉，在食用和藥用兩方面都具有很高的價(jià)值[1]。黃酮是荷葉的一種重要的生物活性物質(zhì)，具有降脂減肥、抗自由基、抗氧化、治療心血管疾病、抑菌等作用[2-3]。荷葉總黃酮的提取方法主要有熱水提取、有機(jī)溶劑提取、超聲波輔助提取、微波提取、閃式提取[4-6]。閃式提取技術(shù)是一種新型提取技術(shù)，它是在室溫下及合適的溶劑中，利用高速機(jī)械剪切力將中藥材破碎至細(xì)微的顆粒，通過(guò)劇烈攪拌和強(qiáng)力震動(dòng)促進(jìn)有效成分溶解，從而達(dá)到提取目的。閃式提取技術(shù)具有提取效率高、提取時(shí)間短、溶劑用量較少、提取溫度低、不破壞熱敏性成分等優(yōu)點(diǎn)[7-8]。本研究利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化閃式提取荷葉總黃酮的工藝條件，為荷葉中總黃酮的提取提供新方法。

1 資料與方法

1.1 材 料

荷葉、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；NaNO2、NaOH、Al(NO3)3(分析純，沈陽(yáng)市華東試劑)；無(wú)水乙醇(天津市大茂化學(xué)試劑廠)。

UV 1800紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司)；JHBE-20A閃式提取器(上海釩幟精密設(shè)備有限公司)；FA1104J電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 總黃酮含量的測(cè)定

準(zhǔn)確配制濃度為0.2000 g/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于50 mL容量瓶中，在每個(gè)容量瓶中加入1 mL 5% NaNO2溶液，振蕩6 min后加入1.0 mL 5% Al(NO3)3，振蕩5 min后加入10 mL 10%的NaOH溶液，以30%乙醇定容，以30%乙醇為空白，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)量吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合出線性方程為Y=5.905X+0.005 7，R2=0.998 7。

1.3 荷葉總黃酮提取

準(zhǔn)確稱取荷葉樣品2.00 g，置于燒瓶中，根據(jù)不同的料液比，加入不同濃度乙醇溶液，提取一定時(shí)間，過(guò)濾，濾液濃縮，定溶，按照“1.2”的顯色方法，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定提取液荷葉總黃酮的濃度，計(jì)算荷葉總黃酮的提取率。

1.4 正交實(shí)驗(yàn)

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間為考察因素，以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，采用L9(34)進(jìn)行正實(shí)試驗(yàn)，進(jìn)行閃式提取工藝的優(yōu)化。因素水平表見(jiàn)表1。

表 1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平

2 結(jié)果與討論

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化荷葉總黃酮的閃式提取工藝，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與方差分析結(jié)果分別見(jiàn)表2與表3。由表2與表3可知，乙醇濃度對(duì)荷葉總黃酮提取率有顯著影響，三個(gè)考察因素對(duì)荷葉總黃酮提取率的影響順序?yàn)椋篈(乙醇濃度)>B(料液比)>C(提取時(shí)間)。正交實(shí)驗(yàn)確定的最佳閃式提取工藝組合為A1B3C2，即乙醇濃度60%，料液比1∶40，提取時(shí)間60 s。

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

為了驗(yàn)證優(yōu)化的最佳提取工藝的可靠性，精密稱取荷葉樣品3份，按照所確定的最佳工藝組合進(jìn)行提取，按照方法“1.3”確定荷葉總黃酮提取率，結(jié)果分別為108.55、116.46、119.23 mg/g,RSD為4.84%，證明所得的優(yōu)化工藝具有較好的穩(wěn)定性與重復(fù)性。

3 結(jié) 論

閃式提取技術(shù)是一種高效、快速的新型提取技術(shù)，廣泛用于中草藥的有效成分的提取。本研究將閃式提取技術(shù)用于荷葉總黃酮的提取，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)荷葉黃酮的閃式提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明優(yōu)化的閃式提取工藝條件為:乙醇濃度60%，料液比1∶40，提取時(shí)間60 s。此工藝具有良好的重復(fù)性，能夠用于荷葉總黃酮的提取。

表 2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表 3 正交試驗(yàn)方差分析