李曼 董誠(chéng)明 王鑫源 楊朝帆 許貞

摘要：為探索不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及噴施次數(shù)對(duì)懷牛膝生產(chǎn)的影響效果，研究氯化膽堿+萘乙酸、蕓苔素內(nèi)酯、氯化膽堿及18%氯膽.萘乙酸對(duì)懷牛膝產(chǎn)量及品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可使牛膝增產(chǎn)，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及噴施次數(shù)的浸出物、B-蛻皮甾酮、多糖含量均有不同的表現(xiàn)，變異系數(shù)權(quán)重法綜合分析得出氯化膽堿+萘乙酸噴施3次效果較佳。

關(guān)鍵詞：牛膝;植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑;種類;次數(shù);品質(zhì)

牛膝為莧科植物牛膝（Achyramhes bidentata Bj）的干燥根。性味苦、甘、酸、平。功能有活血通經(jīng)，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，利尿通淋，引血下行。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。牛膝在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布，但以河南武陟、溫縣、博愛、泌陽(yáng)等地為主要產(chǎn)區(qū)，是我國(guó)著名的“四大懷藥”之一。牛膝最主要的活性成分為蛻皮甾酮、齊墩果酸型三萜皂苷以及多糖類。近年來的藥理研究表明，牛膝具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗衰老、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松等多種藥理作用，且對(duì)2型糖尿病及心血管系統(tǒng)均有一定的治療作用。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可增加葉片的光合效率，制造更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)向塊根、塊莖輸送，從而提高產(chǎn)量。且植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的作用面廣、應(yīng)用領(lǐng)域多，故而其使用越來越普遍。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的不合理使用會(huì)造成中藥材活性成分含量降低，影響藥材療效。為探索植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)懷牛膝生產(chǎn)的影響，研究氯化膽堿+萘乙酸、蕓苔素內(nèi)酯、氯化膽堿及18%氯膽.萘乙酸噴灑不同次數(shù)對(duì)懷牛膝產(chǎn)量及品質(zhì)的影響，為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑為：①大塊頭（氯化膽堿70%+萘乙酸2%）：水劑，山東菏澤永杰農(nóng)化有限公司生產(chǎn);登記證號(hào)：農(nóng)肥（2005）準(zhǔn)字0365號(hào)。②天豐素（蕓苔素內(nèi)酯0.01%）：水劑，江門市大光明農(nóng)化新會(huì)有限公司生產(chǎn);生產(chǎn)批號(hào)：HNP44024-E0684。③氯化膽堿（氯化膽堿60%）：水劑，重慶雙豐化工有限公司生產(chǎn);生產(chǎn)批號(hào)：HNP55008-E0577。④地胖哥（氯化膽堿17%、萘乙酸1%）：粉劑，重慶雙豐化工有限公司生產(chǎn);生產(chǎn)批號(hào)：HNP55008-E0095。

1.2樣品采集與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

牛膝種子由河南中醫(yī)藥大學(xué)董誠(chéng)明教授鑒定為莧科植物牛膝（Achyranthes bidentata BL）的種子，于2016年7月20日播種于河南省武陟縣大封鎮(zhèn)駕部村。試驗(yàn)共設(shè)17個(gè)處理（見表1），每個(gè)處理重復(fù)3次，牛膝株行距6cm x 13cm，每小區(qū)20m²。當(dāng)年使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，噴施濃度按照使用說明，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3測(cè)定項(xiàng)目與方法

1.3.1產(chǎn)量。2016年2月5～7日采收各小區(qū)牛膝，記錄數(shù)據(jù)，進(jìn)行產(chǎn)量分析。

1.3.2浸出物及B-蛻皮甾酮含量測(cè)定。參照《中國(guó)藥典》2015版中醇溶性浸出物測(cè)定法（通則2201）項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用水飽和正丁醇作溶劑;參照《中國(guó)藥典》2015版中采用高效液相色譜法測(cè)定牛膝藥材中B-蛻皮甾酮含量。

1.3.3多糖含量測(cè)定。采用UV法進(jìn)行多糖含量測(cè)定，最大吸收波長(zhǎng)為625nm，以吸光度為縱坐標(biāo)，100u g/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=0.0644x-0.0406.r²=0.9923。

精密稱取牛膝粉末0.5g，置錐形瓶?jī)?nèi)，加入25mL95%乙醇回流脫脂1h，藥材揮醇后加入50mL蒸餾水回流1h，過濾，用熱水分?jǐn)?shù)次洗滌藥渣，合并濾液及洗液于100mL容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，精密量取lmL轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度線，搖勻，即得供試品溶液;用0.2%蒽酮硫酸溶液顯色，測(cè)定供試品溶液的吸光度，計(jì)算多糖含量。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用Excel和DPS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，運(yùn)用變異系數(shù)權(quán)重法對(duì)牛膝各個(gè)指標(biāo)綜合分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)量比較

由表2可知，P₃處理產(chǎn)量最高，為793.74kg/667m²;T1產(chǎn)量較低，為627.53kg/667m²。在噴施同種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，不同噴施次數(shù)的處理下各個(gè)小區(qū)產(chǎn)量：D₂>D₃>D₄>D₁、T₄>T₃>T₂>T₁、L₄>L₃>L₂>L₁、P₃>P₂>P₄>P₁。在噴施相同次數(shù)時(shí)，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理下個(gè)小區(qū)產(chǎn)量：L₁>P₁>D₁>T₁、P₂>D₂>T₂>L₂、P₃>L3>D₃>T₃、L₄>P₄>D₄>T₄。P₃與CK之間具有顯著性差異，其余處理與CK之間均無顯著性差異。各處理產(chǎn)量均高于CK，各處理小區(qū)均對(duì)牛膝有增產(chǎn)作用，18%氯膽.萘乙酸噴施3次處理對(duì)牛膝增產(chǎn)作用最明顯。

2.2浸出物及B-蛻皮甾酮含量測(cè)定

2.2.1浸出物含量測(cè)定。由表3可知，不同處理浸出物含量均符合藥典規(guī)定，其中D₄處理浸出物含量最高（9.63%）;T₂處理的浸出物含量較低（6.87%）。在噴施同種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，不同噴施次數(shù)的各處理浸出物含量：D₄>D₂>D₃>D₁、T₄>T₁>T₃>T₂、L₃>L₂>L₄>L₁、P₃>P₂>P₄>P₁。在噴施相同次數(shù)時(shí)，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的各處理浸出物含量：T₁>D₁>P₁>L₁、D₂>P₂>L₂>T₂、L₃>P₃>D₃>T₃、D₄>P₄>T₄>L₄。D₂、D₄與CK之間具有顯著性差異，其余處理與CK之間均無顯著性差異。D₂、D₄牛膝藥材浸出物含量均高于CK，說明氯化膽堿+萘乙酸噴施2次處理和氯化膽堿+萘乙酸噴施4次處理對(duì)牛膝質(zhì)量產(chǎn)生有利影響，D₄含量最高，說明其處理可有效地提高牛膝中醇溶性浸出物的含量，進(jìn)而對(duì)牛膝質(zhì)量有一定的改善作用。

2.2.2β-蛻皮甾酮含量測(cè)定。由表3可知，P₄處理的β-蛻皮甾酮含量最高（0.089%），T₂處理的β-蛻皮甾酮含量最低（0.031%）。在噴施同種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，不同噴施次數(shù)的各處理β-蛻皮甾酮含量：D₄>D₂>D₁>D₃、T₃>T₄>T₁>T₂、L₄>L₁>L₃>L₂。在噴施相同次數(shù)時(shí)，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的各處理β-蛻皮甾酮含量：P₁>L₁>D₁>T₁、P₂>D₂>L₂>T₂、T₃>P₃>L₃>D₃、P₄>T₄>D₄>L₄。D₃、T₁和T₂與CK之間具有顯著性差異，其余處理與CK之間均無顯著性差異。D₃、T₁、T₂，這3種處理牛膝藥材中β-蛻皮甾酮含量均低于CK，說明氯化膽堿+萘乙酸噴施3次處理、蕓苔素內(nèi)酯噴施1次處理和蕓苔素內(nèi)酯噴施2次處理降低牛膝藥材中β-蛻皮甾酮的含量，進(jìn)而可能會(huì)對(duì)牛膝藥材質(zhì)量產(chǎn)生不利影響。

2.2.3多糖含量測(cè)定。由表3可知，T₄處理的多糖含量最高（8.08%），P₄處理的多糖含量最低（5.25%）。在噴施同種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，不同噴施次數(shù)的各處理多糖含量：D₃>D₂>D₄>D₁、T₄>T₂>T₃>T₁、L₂>L₄>L₃>L₁、P₃>P₂>P₁>P₄;在噴施相同次數(shù)時(shí)，不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的各處理多糖含量：D₁>T₁>P₁>L₁、L₂>D₂>T₂>P₂、D₃>P₃>T₃>L₃、T₄>D₄>L₄>P₄。D₃、T₄與CK之間具有顯著性差異，其余處理與CK之間均無顯著性差異;D₃、T₄牛膝藥材多糖含量均高于CK，說明氯化膽堿+萘乙酸噴施3次處理和蕓苔素內(nèi)酯噴施4次處理可提高牛膝中的多糖含量。

3 結(jié)論與討論

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是一類與植物激素具有相似生理和生物學(xué)效應(yīng)的人工合成物質(zhì)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用，可調(diào)控植株的生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)植物抗逆性，增加中藥材的產(chǎn)量，提高中藥材有效成分的含量，改善藥材品質(zhì)。牛膝中主要以蛻皮甾酮和牛膝甾酮的形式存在，其中蛻皮甾酮是牛膝中的主要藥用成分;牛膝中的多糖類成分含量較高，作用于人體內(nèi)，能夠起到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)免疫力等作用。試驗(yàn)采用4種不同種類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，每種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑均設(shè)置了4種不同的噴施次數(shù)，選擇用不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及不同噴施次數(shù)對(duì)牛膝進(jìn)行處理，以達(dá)到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)為目的。從各處理的綜合得分均高于CK可以看出，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在一定程度上能提高牛膝的產(chǎn)量，改善其品質(zhì)。試驗(yàn)表明，不同噴施次數(shù)、4種類型的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在牛膝上的使用產(chǎn)生了不同的效果，牛膝各處理的產(chǎn)量均高于CK，可見植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)牛膝有增產(chǎn)效果;變異系數(shù)權(quán)重法綜合分析得出氯化膽堿+萘乙酸噴施3次效果較佳。

藥材農(nóng)藥殘留量測(cè)定以及土壤中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量測(cè)定也很重要，在牛膝栽培的過程中，若過多地使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可能對(duì)人體、土壤及環(huán)境造成危害，農(nóng)藥的殘留量超標(biāo)也會(huì)影響中藥材的療效以及用藥安全，有待進(jìn)一步研究。