應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)更好地進(jìn)行食品快速檢測

李菊霞 繆樹婷

食品安全問題一直是國家和社會(huì)關(guān)注的重點(diǎn)問題，因此，相關(guān)部門一定要高度重視食品安全檢測，并注重新技術(shù)的引入，比如膠體金免疫層析技術(shù)。膠體金免疫層析技術(shù)可以有效發(fā)揮食品檢測的作用，更好地保障食品安全，提高人們的生活質(zhì)量，促進(jìn)社會(huì)的穩(wěn)定發(fā)展。

一、膠體金及免疫層析技術(shù)的含義

1.膠體金技術(shù)。膠體金技術(shù)是指氯金酸在某種環(huán)境下的一種變化反應(yīng)而形成的膠體溶液。其反應(yīng)過程首先要用的是還原劑，通常有白磷和檸檬酸鈉等，在其作用下將氯金酸按相關(guān)要求聚合成固定大小的金顆粒，然后再由靜電作用將其凝聚成穩(wěn)定的膠體溶液。膠體狀態(tài)下的金顆粒具有高電子密度的特性，其密度一般能達(dá)到107個(gè)/mm2，呈圓形的斑點(diǎn)，顏色一般為粉紅色，其大小肉眼剛好可見，在檢測中常用作一種標(biāo)記物，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響十分重大。

2.免疫層析技術(shù)。免疫層析技術(shù)是一種免疫分析技術(shù)，主要是根據(jù)抗原和抗體的反應(yīng)來進(jìn)行檢測。通常包括兩大類，一類是非競爭性免疫層析，一類是競爭性免疫層析。

非競爭性免疫層析技術(shù)主要針對(duì)一些大分子蛋白質(zhì)的檢測。首先，將采用膠體金標(biāo)記后的樣品與等待檢測抗原中的特異性抗體進(jìn)行結(jié)合，這兩類物質(zhì)結(jié)合后會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，此時(shí)需要注意將其沉積物放到結(jié)合區(qū)域中。其次，將待檢測的樣品材料放到樣品區(qū)位置，再利用毛細(xì)管將樣品與結(jié)合區(qū)進(jìn)行完全融合，其中，帶有膠體金標(biāo)記的樣品材料會(huì)由于受到張力的作用而不斷地向前移動(dòng)。此時(shí)，樣品中已經(jīng)存在的抗原物質(zhì)便會(huì)自動(dòng)與帶有膠體金標(biāo)記的樣品相互結(jié)合，形成一種結(jié)合體物質(zhì)。緊接著，樣品溶液會(huì)進(jìn)行固相化，并在通過固相化后的第一層防線時(shí)將含有結(jié)合體物質(zhì)抗體材料進(jìn)行捕獲，然后形成新的結(jié)合體復(fù)合物材料。那些沒有結(jié)合體材料的物質(zhì)不會(huì)被捕獲，它們會(huì)繼續(xù)向前移動(dòng)，然后那些結(jié)合體在通過下一道防線時(shí)會(huì)與另一種抗體結(jié)合，形成第三種結(jié)合體復(fù)合材料。

競爭性免疫層析技術(shù)主要針對(duì)一些單一抗原的小分子抗原適用，比如獸藥殘留的檢測等。該技術(shù)也是將被膠體金標(biāo)記后的樣品與抗原中的特異性抗體進(jìn)行結(jié)合，然后產(chǎn)生沉淀沉積在結(jié)合區(qū)域內(nèi)，在后續(xù)的固相化步驟中，它主要是針對(duì)待檢測抗原或者與待檢測抗原類似的物質(zhì)，如果所檢測的樣品含有抗原物質(zhì)，它會(huì)與所標(biāo)記的特異性抗體進(jìn)行結(jié)合，形成一種新的復(fù)合物材料。在固相化過程中，這種待測抗原或者其類似物在檢測區(qū)會(huì)產(chǎn)生競爭效應(yīng)，在這種情況下是不會(huì)發(fā)生反應(yīng)的，因此，檢測區(qū)域也不會(huì)產(chǎn)生顏色上的改變。

二、在食品快速檢測中的具體應(yīng)用

膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全快速檢測方面發(fā)揮著重要作用，不僅有著快速檢測的優(yōu)勢(shì)，而且檢測過程也非常簡單和方便。實(shí)際應(yīng)用舉例如下：

1.對(duì)牛奶質(zhì)量進(jìn)行檢測。正常情況下，牛初乳在牛奶中的含量直接決定著牛奶的營養(yǎng)價(jià)值，可以以此來檢測確定牛奶的質(zhì)量問題。通常情況下，在牛初乳中一般含有IgG物質(zhì)，該物質(zhì)含量與牛奶中某些生物活性物質(zhì)的含量呈正相關(guān)，因此可以利用膠體免疫層析技術(shù)對(duì)牛奶中的IgG物質(zhì)含量進(jìn)行檢測，以判斷牛奶的質(zhì)量，其中，對(duì)IgG物質(zhì)進(jìn)行檢測采用的是競爭性抗原。首先，把標(biāo)準(zhǔn)牛奶中的IgG物質(zhì)設(shè)置成用膠體金標(biāo)記的競爭性抗原，將其置于結(jié)合區(qū)，再將自制的免抗性IgG抗體置于檢測區(qū)，然后選取一定量的牛奶作為樣品，將標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記牛奶放入檢測區(qū)中，樣品中的IgG會(huì)與帶有膠體金標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)IgG進(jìn)行自制免抗體的競爭結(jié)合，對(duì)樣品中的IgG競爭水平進(jìn)行觀察，根據(jù)觀察到的具體結(jié)果來判斷是否滿足相應(yīng)的活性，從而判斷牛奶的質(zhì)量。

2.對(duì)食品中的微生物進(jìn)行檢測。微生物、細(xì)菌等直接影響著食品的質(zhì)量，因此必須要加強(qiáng)對(duì)食品中微生物的檢測，采用膠體金免疫層析技術(shù)便可以進(jìn)行很好的分析。通常情況下，一般采用雙抗體夾心法來進(jìn)行檢測。首先，提取大腸桿菌中的o157，再利用膠體金對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記，并將其作為第一抗體置于結(jié)合區(qū)域；其次，利用o157抗血清作為第二抗體置于檢測區(qū)域，再利用羊抗鼠IgG作為進(jìn)行固相化處理的質(zhì)控線防線，然后開始整個(gè)實(shí)驗(yàn)的檢測過程。其中需要注意的是，該實(shí)驗(yàn)的檢測時(shí)間一般為15min，大腸桿菌的o157的出檢濃度最少不能低于105cfu/mL。

3.對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行檢測。黃曲霉毒素B1是曲霉菌的代謝產(chǎn)物，具有較大的毒性，如果人體食用了被黃曲霉毒素污染的食物就很容易致癌，危害非常大。利用競爭免疫層析技術(shù)，可以對(duì)食品中殘留的黃曲霉毒素進(jìn)行檢測。首先，利用膠體金對(duì)抗AFB1單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，并將其置于結(jié)合區(qū)，再利用牛血清蛋白作為檢測帶，使用羊抗鼠IgG作為質(zhì)控線的防線，最后按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行檢測即可。

4.對(duì)乳制品中的三聚氰胺進(jìn)行檢測?？梢圆捎酶偁幰种泼庖邔游鲈?，對(duì)乳制品中的三聚氰胺進(jìn)行檢測。將樣品溶液中的三聚氰胺與檢測試劑中帶有膠體金標(biāo)記的特異性抗體相結(jié)合，抑制抗體和試紙條或檢測卡中檢測線上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺變化，通過與質(zhì)控線顏色深淺的比較來判別樣品中三聚氰胺的含量，從而確保乳制品中三聚氰胺的含量符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，降低乳制品非法添加風(fēng)險(xiǎn)。特別需要注意的是，生鮮奶在常溫下易酸敗，快速檢測應(yīng)盡快進(jìn)行，4℃冰箱保存的生鮮奶應(yīng)在48h內(nèi)完成檢測。

5.對(duì)克倫特羅（瘦肉精）殘留進(jìn)行檢測?？藗愄亓_快速檢測試劑卡應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理。樣本經(jīng)勻漿、離心后，取上清液滴入樣本孔，樣本溶液中的克倫特羅與金標(biāo)抗體結(jié)合，進(jìn)而封閉金標(biāo)抗體上克倫特羅的抗原結(jié)合位點(diǎn)，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上克倫特羅蛋白偶聯(lián)物結(jié)合。當(dāng)樣品中克倫特羅含量高于檢測限時(shí)，檢測線無紅色條帶出現(xiàn)，結(jié)果為陽性；反之，當(dāng)樣本中無克倫特羅或是含量低于檢測限時(shí)，檢測線有紅色條帶出現(xiàn)，結(jié)果為陰性。

6.對(duì)沙丁胺醇進(jìn)行快速檢測。采用競爭抑制免疫層析技術(shù)，可以測定動(dòng)物組織（豬肉、牛肉、羊肉）中的沙丁胺醇。檢測卡中含有被預(yù)先固定于膜上的沙丁胺醇偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的沙丁胺醇單克隆抗體，樣本溶液滴入檢測卡的加樣孔后，樣本溶液中的沙丁胺醇與金標(biāo)抗體結(jié)合，從而阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上沙丁胺醇偶聯(lián)物結(jié)合。當(dāng)樣本溶液中的沙丁胺醇含量大于檢測限時(shí)，檢測線不顯色，結(jié)果為陽性；當(dāng)樣本溶液中沙丁胺醇含量小于檢測限時(shí)，檢測線呈紫紅色，結(jié)果為陰性。