黃龍艷 潘越博 王璽年 吳孝杰

摘 ?要：為了獲得豬精液最佳的保存效果，本試驗(yàn)采用不同的稀釋液和保存溫度對(duì)豬精液的保存效果進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果：Ⅰ組稀釋液的稀釋保存效果最好，精子活力、有效存活時(shí)間、總存活時(shí)間及生存指數(shù)分別為0.75、98.5 h、129.8 h、75.9 h，除精子活力與其他組間差異不顯著（P>0.05）外，其他指標(biāo)差異極顯著（P<0.01）;Ⅰ組稀釋液在17 ℃條件下保存時(shí)，精子活力、存活時(shí)間和生存指數(shù)等指標(biāo)最高。

關(guān)鍵詞：豬精液稀釋液;精子活力;存活時(shí)間;生存指數(shù)

中圖分類號(hào)：R913+S859.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2020）07-0019-03

1 ?試驗(yàn)材料

1.1 精液來源

試驗(yàn)用長(zhǎng)白種公豬15頭，18～24月齡，身體健康，性欲良好，生產(chǎn)成績(jī)優(yōu)秀，體質(zhì)健壯結(jié)實(shí)，遺傳性能穩(wěn)定，且無任何遺傳疾病。人工采集公豬精液，選擇精子活力在0.8以上，且氣味、色澤正常的精液稀釋保存。

1.2儀器設(shè)備

控溫冰箱、偉力精液分析儀、恒溫水浴箱、電子秤、燒杯、量筒、高壓消毒鍋、生化培養(yǎng)箱、干燥箱、雙蒸儀、磁力攪拌器和pH測(cè)定儀。

1.3 稀釋液配方

稀釋液配方見表1。

2 ?試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)用品的消毒

為了盡可能實(shí)現(xiàn)無菌操作，試驗(yàn)所用的玻璃器械均用干燥箱進(jìn)行干燥消毒，金屬器械用高壓鍋蒸汽消毒，新鮮雞蛋洗凈外殼后用75%酒精消毒。

2.2 稀釋液的配制

準(zhǔn)確稱量葡萄糖、碳酸氫鈉、二水檸檬酸鈉、氯化鈉、氨基乙酸、氨苯磺胺和EDTA并轉(zhuǎn)移至消毒過的量杯中，加100 mL雙蒸水?dāng)嚢柘♂?將稀釋液過濾、分裝到消毒過的玻璃瓶中，蓋好瓶塞并用紗布將其包裹后高壓蒸汽消毒10 min～15 min，將溶液冷卻至室溫，按比例加入新鮮卵黃、新鮮牛奶和抗生素并攪拌混勻，測(cè)定pH后密封保存。

2.3 精液處理及保存

首先，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采集精液，測(cè)定并記錄精液pH和精子活力;然后，將同一頭豬采集的合格精液分成4份，分別用4種稀釋液按1∶3進(jìn)行稀釋;第三，將每種處理分成2份，快速測(cè)定其中一份的精子活力;第四，將精子活力最高的稀釋精液分成4份，分別置于15 ℃、16 ℃、17 ℃和18 ℃的環(huán)境中保存36 h;第五，測(cè)定精子活力、生存指數(shù)等指標(biāo)，記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

2.4 數(shù)據(jù)處理

首先統(tǒng)計(jì)15個(gè)樣本的預(yù)定測(cè)試指標(biāo)，并計(jì)算各指標(biāo)的平均值，然后利用Х2檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立分析，最終確定組間的差異顯著性。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 精液稀釋效果

如表2所示，4種稀釋液稀釋后精子的生存指數(shù)、總存活時(shí)間、有效存活時(shí)間和精子活力均以Ⅰ組稀釋液效果最好，分別為75.9 h、129.8 h、98.5 h和0.75;但稀釋后的生存指數(shù)、總存活時(shí)間、有效存活時(shí)間，Ⅰ組與Ⅱ組之間差異不顯著（P>0.05），與其他組間的差異極顯著（P<0.01）;精子活力四組間差異不顯著（P>0.05）。

3.2 稀釋精液保存溫度

為了測(cè)試稀釋精液的最佳保存溫度，對(duì)Ⅰ組稀釋液在不同溫度下精子的總存活時(shí)間、有效存活時(shí)間、生存指數(shù)和活力進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明：稀釋精液于17 ℃恒溫環(huán)境中保存效果最佳，精子的生存指數(shù)、總存活時(shí)間、有效存活時(shí)間和活力分別為72.9 h、125.9 h、97.7 h和0.66（表3）。

3.3 抗生素的作用

試驗(yàn)結(jié)果表明，在稀釋液中加入適量林肯霉素和慶大霉素可延長(zhǎng)精子抗菌時(shí)間，提高抗菌效果，并且不易產(chǎn)生耐藥性。

4 結(jié)果分析

4.1 稀釋液成分全面，用量適宜

在所設(shè)計(jì)的稀釋液配方中，Ⅰ組稀釋液的常溫保存效果最好。因?yàn)樵撓♂屢汉芯铀枰臓I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、緩沖物質(zhì)和抗生素等，所以Ⅰ組稀釋液適于精液保存，有助于提高精子活力。

4.2 Ⅰ組稀釋液保存效果比Ⅱ組好的原因

在稀釋液配方中，雖然Ⅱ組稀釋液中能量物質(zhì)葡萄糖的添加比Ⅰ組多，但緩沖物質(zhì)檸檬酸鈉和EDTA的添加量少，導(dǎo)致Ⅱ組稀釋液稀釋后的精子活力和存活時(shí)間等指標(biāo)降低，影響稀釋效果。

4.3 成分越單一，精液稀釋保存效果越差

雖然Ⅲ組稀釋液含有緩沖物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和抗生素，Ⅳ組稀釋液含有卵黃、牛奶和抗生素，但這兩種稀釋液不符合精液稀釋液組成要求，在生產(chǎn)中通常只適用于現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.4 精子活力越高，精液稀釋保存效果越好

精子活力在0.8以上時(shí)稀釋保存效果較好，保存溫度為17 ℃時(shí)可以使精子的物質(zhì)能量需求與代謝處于動(dòng)態(tài)平衡，酶的活性也很強(qiáng)，從而能維持精子活力，延長(zhǎng)精液保存時(shí)間，提高母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。

值得一提的是，影響精液稀釋和保存的因素有很多，機(jī)理也非常復(fù)雜，一些細(xì)微因素和原理有待進(jìn)一步研究探討。

作者簡(jiǎn)介：黃龍艷（1972— ），女，助理獸醫(yī)師，從事畜禽良種繁育與研究工作;E-mail：1318925701@qq.com

通信作者：潘越博