養(yǎng)正消積方劑治療惡性腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展

李揚(yáng)綜述 賈漪濤審校

目前，腫瘤的治療手段包括手術(shù)、化療、放療、靶向治療及免疫治療，中醫(yī)中藥治療也開始應(yīng)用于腫瘤。中醫(yī)把病程較長、疼痛反復(fù)發(fā)作、遷延難愈的一類疾病歸為絡(luò)病，癌癥歸屬其中，絡(luò)病理論又在中醫(yī)診療中發(fā)揮著重要的作用[1]。根據(jù)絡(luò)病理論研制開發(fā)出的養(yǎng)正消積方劑，有化瘀解毒、健脾益腎、抗癌散結(jié)之效[2-3]?！梆B(yǎng)正”即健脾補(bǔ)腎，“消積”即散結(jié)通絡(luò)，養(yǎng)正消積膠囊(或養(yǎng)正消積配方顆粒)由16味中藥組方而成，其中選用黃芪扶正氣，莪術(shù)消積，兩者共同用作全方的主藥，配伍人參、女貞子、靈芝健脾補(bǔ)腎，白花蛇舌草、半枝蓮、白英、蛇莓等解毒抗癌。近年來各項(xiàng)基礎(chǔ)及臨床研究顯示，養(yǎng)正消積方劑既可通過各種途徑抑制腫瘤進(jìn)展，還能提高免疫細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞免疫功能。另外，它還可減輕炎性反應(yīng)、調(diào)節(jié)腸道菌群、降低腫瘤標(biāo)志物及減少血管生成。文章將對養(yǎng)正消積方劑治療惡性腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展作一綜述。

1 對癌細(xì)胞增殖、黏附和遷移的影響

養(yǎng)正消積方劑由16種中草藥組成，其中包括黃芪、人參、白術(shù)、茯苓等。研究表明，養(yǎng)正消積在肝癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌和胃癌等多種腫瘤中均能夠抑制癌細(xì)胞的增殖、黏附和遷移[4-5]。

黏附斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)是胞內(nèi)外信號出入的中樞，能夠激活胞內(nèi)PI3K/AKT、RAS/MAPK等信號通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長，與癌細(xì)胞的黏附和遷移密切相關(guān)，而此過程需要Paxillin協(xié)助[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積方劑萃取物——DME25，能夠明顯地抑制骨肉瘤細(xì)胞系MG63細(xì)胞的黏附作用，卻沒有影響其增殖。進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積方劑能夠抑制癌細(xì)胞的黏附作用是因?yàn)樽柚沽薋AK和Paxillin的激活[7]。這說明養(yǎng)正消積方劑在抑制腫瘤細(xì)胞的黏附和生長中發(fā)揮著重要作用，而這種作用可能是通過抑制FAK通路實(shí)現(xiàn)的。

Ye等[8]研究發(fā)現(xiàn)，DME25能夠抑制乳腺癌、前列腺癌、肺癌、骨肉瘤、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞的生長及黏附和遷移作用，其中乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)增殖相比于對照組減少0.07。為了探索DME25抑制癌細(xì)胞黏附和遷移作用的分子機(jī)制，加入相關(guān)激酶抑制劑后，發(fā)現(xiàn)磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)參與了此過程[8]。因此，養(yǎng)正消積方劑抗癌機(jī)制所涉及的另一條信號通路可能是PI3K/AKT信號通路。

Sonic Hedgehog(SHH)相關(guān)信號通路調(diào)控著細(xì)胞增殖等過程，在腫瘤的發(fā)生等方面發(fā)揮著重要的作用[9-11]。資料顯示，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中SHH蛋白水平明顯高于正常肺組織。晚期肺癌較早期肺癌SHH的表達(dá)更高[12-13]。在體外實(shí)驗(yàn)中，肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和SKMES1的遷移、侵襲作用能夠被養(yǎng)正消積方劑抑制，而SHH抑制劑環(huán)丙胺也同樣抑制了癌細(xì)胞的遷移、侵襲。在荷瘤小鼠體內(nèi)，養(yǎng)正消積方劑比環(huán)丙胺更顯著地抑制腫瘤的生長[12]。這提示SHH是治療NSCLC的潛在靶點(diǎn)之一，而養(yǎng)正消積方劑抗腫瘤的機(jī)制之一可能是抑制SHH的表達(dá)。

研究顯示，熱休克蛋白27(HSP-27)高表達(dá)可明顯地增加癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移等方面扮演著重要角色[14-15]。Owen等[16]發(fā)現(xiàn)，DME25可抑制HSP27的磷酸化，從而有效地減少多種癌細(xì)胞的黏附作用。當(dāng)沉默HSP27后，DME25不僅抑制了癌細(xì)胞的黏附、遷移，還增加了癌細(xì)胞對順鉑的敏感性，其中對順鉑耐藥的卵巢癌細(xì)胞對順鉑的敏感性增加了8倍。

肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor, HGF)/c-MET不僅能夠促使非小細(xì)胞肺癌對TKI類藥物耐藥，還可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[17]。Jiang等[18]報(bào)道，DME25能夠抑制肺癌細(xì)胞株SKMES1和A549的黏附和遷移。在體內(nèi)移植瘤模型中，加用養(yǎng)正消積方劑，可明顯抑制由HGF誘導(dǎo)的腫瘤快速增殖，腫瘤的生長速度減慢。后續(xù)的研究表明，養(yǎng)正消積方劑與HGF受體抑制劑PHA665752有協(xié)同抗腫瘤作用。這為臨床治療肺癌等腫瘤提供了新思路。

增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)存在于正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞內(nèi)，主要作用是啟動細(xì)胞增殖[19]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積膠囊聯(lián)合化療的胃癌患者癌組織中PCNA、p53的表達(dá)水平明顯低于對照組[20]。這說明養(yǎng)正消積膠囊能抑制PCNA、p53蛋白表達(dá)，阻止胃黏膜上皮的惡性轉(zhuǎn)變，起到抗癌作用。

2 對細(xì)胞免疫功能的影響

研究表明，養(yǎng)正消積膠囊能夠促進(jìn)機(jī)體的免疫應(yīng)答，尤其是細(xì)胞免疫，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[4, 21]。徐寧等[22]在養(yǎng)正消積膠囊聯(lián)合化療治療乳腺癌的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積膠囊組增加了外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞水平及CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞的比例。陳磊[23]在消化道腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合應(yīng)用養(yǎng)正消積膠囊的患者外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞水平以及CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值明顯高于對照組。在結(jié)直腸癌的治療中，養(yǎng)正消積膠囊除了增加CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞的水平外，還促使NK細(xì)胞的水平升高，而活化的CD8+T細(xì)胞水平卻有所降低[24]。養(yǎng)正消積膠囊在增強(qiáng)放療療效的同時(shí),還改善了患者的細(xì)胞免疫功能,增加了CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞的水平[25]。除此之外，養(yǎng)正消積膠囊能夠抑制胃癌移植瘤小鼠腫瘤的生長,該作用可能與下調(diào)CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)表達(dá)相關(guān)[26]。以上研究表明，養(yǎng)正消積膠囊通過增加CD3+、CD4+T細(xì)胞的水平，下調(diào)Treg細(xì)胞的比例來增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能。

3 對炎性因子、腸道菌群及腫瘤標(biāo)志物的影響

眾所周知，炎性反應(yīng)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而癌因性疲乏(cancer-related fatigue, CRF)一般由多種因素相互作用所致，貫穿于腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后等整個過程中，是惡性腫瘤患者最常見的癥狀之一[27-28]。雖然有關(guān)CRF的研究日益增多，但引起CRF的病理生理機(jī)制仍未完全闡明，也缺乏有效的治療手段。目前公認(rèn)的機(jī)制包括炎性反應(yīng)等。

為了探討?zhàn)B正消積方劑對CRF的影響以及內(nèi)在的機(jī)制，Zhang 等[29]在原位結(jié)腸癌移植瘤小鼠模型中研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積組小鼠的游泳時(shí)間長于對照組，懸尾休息時(shí)間短于對照組，這提示養(yǎng)正消積方劑能增強(qiáng)荷瘤小鼠的抗疲勞能力。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積方劑降低了小鼠體內(nèi)IL-1β和IL-6水平，有助于減輕荷瘤小鼠體內(nèi)的炎性反應(yīng)。這也是養(yǎng)正消積方劑減輕惡性腫瘤引起疲乏狀態(tài)的重要因素。在胃癌的研究中，研究者發(fā)現(xiàn)養(yǎng)正消積膠囊能抑制荷瘤小鼠體內(nèi)IL-10和TGF-β1的表達(dá),從而逆轉(zhuǎn)腫瘤免疫逃逸,起到抗癌作用[30]。養(yǎng)正消積方劑增加了小鼠糞便菌群中擬桿菌和副擬桿菌的豐度，減少了變形桿菌和弓形桿菌的豐度[29]。資料表明，擬桿菌能一定程度上對免疫檢查點(diǎn)抑制劑PD-1抗體增敏，進(jìn)而抑制荷瘤小鼠腫瘤生長，而變形桿菌又與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[31-32]。這說明養(yǎng)正消積方劑還可通過調(diào)節(jié)腸道菌群進(jìn)而影響腫瘤生長。

侯杰等[33]發(fā)現(xiàn)養(yǎng)正消積膠囊能夠有效地降低晚期非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)腫瘤標(biāo)志物的水平，尤其是糖類抗原19-9(CA19-9)、細(xì)胞角蛋白-19片段(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)，具有一定的臨床推廣應(yīng)用價(jià)值。高分子糖蛋白CA50也是一種腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤組織中的含量遠(yuǎn)超過正常組織，它的量變可以提示腫瘤組織的增殖狀態(tài)。資料顯示，養(yǎng)正消積膠囊除了能明顯降低上述腫瘤標(biāo)志物外，還可顯著降低高分子糖蛋白CA50水平[34]。骨橋蛋白(osteopontin，OPN)是一種廣泛分布于多種組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，能夠參與組織修復(fù)、自身代謝等功能。OPN表達(dá)增強(qiáng)通常與腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)。研究證實(shí)，養(yǎng)正消積膠囊能明顯降低OPN的水平，進(jìn)而延長腫瘤患者生存時(shí)間[35]。

4 對腫瘤內(nèi)血管生成的影響

研究表明，養(yǎng)正消積方劑對腫瘤內(nèi)的血管生成也有顯著影響[6, 36]。養(yǎng)正消積萃取物——DME25能夠抑制人血管內(nèi)皮細(xì)胞株HECV的成管作用，并抑制細(xì)胞基質(zhì)的黏附和遷移作用，且具有濃度依賴性。FAK抑制劑PF557328與DME25聯(lián)合使用對癌細(xì)胞的黏附、遷移具有協(xié)同抑制作用[6]。Owen等[36]發(fā)現(xiàn)貝伐珠單抗能夠明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞HECV的遷移。而當(dāng)肺癌細(xì)胞存在時(shí)，貝伐珠單抗對HECV細(xì)胞遷移的這種抑制作用會減弱。但當(dāng)DME25存在時(shí)，無論是否有肺癌細(xì)胞，HECV細(xì)胞的遷移作用都會明顯減弱。當(dāng)培養(yǎng)基中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)耗竭后，單純的貝伐珠單抗對HECV的抑制作用減弱，但對于DME25的抗血管生成作用影響卻不大。可見，養(yǎng)正消積方劑抗腫瘤內(nèi)血管形成的機(jī)制除了通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的小管形成之外，還可通過抑制VEGF來實(shí)現(xiàn)。

5 其他

放化療作為治療惡性腫瘤的重要方法，但往往會引起胃腸道反應(yīng)、骨髓抑制等多種不良反應(yīng)，嚴(yán)重影響惡性腫瘤患者的生活質(zhì)量。養(yǎng)正消積方劑對治療放化療引起的不良反應(yīng)有獨(dú)特優(yōu)勢。臨床資料表明，養(yǎng)正消積膠囊能明顯減輕化療患者惡心、嘔吐、食欲減退、腹瀉、皮疹等不良反應(yīng),能顯著改善患者生活質(zhì)量[33,37-38]。養(yǎng)正消積膠囊治療后，腫瘤患者的血液毒性反應(yīng)發(fā)生率明顯降低，具體表現(xiàn)為白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白及血小板下降幅度減小，骨髓抑制率也顯著降低，由71.4%降至54.8%[39-41]。綜上，養(yǎng)正消積方劑用于放化療的輔助治療，可明顯減輕胃腸道和骨髓抑制等不良反應(yīng)，提高腫瘤患者生活質(zhì)量。

6 小 結(jié)

中藥養(yǎng)正消積方劑聯(lián)合放化療，不僅可減輕不良反應(yīng)，提高腫瘤患者的生存質(zhì)量，還能夠直接起到抗癌作用。本藥為組方，各成分都有自己獨(dú)特的作用及機(jī)制，相互配合且作用互補(bǔ)，形成一個整體，最終達(dá)到抗癌、提升機(jī)體免疫力、抗炎的功效。養(yǎng)正消積方劑通過各種機(jī)制包括抗血管形成等達(dá)到抗腫瘤效果，其抗癌譜也較為廣泛。因此，養(yǎng)正消積方劑不同于傳統(tǒng)中醫(yī)對腫瘤的治療策略如活血化瘀之法，因活血本身可能會促進(jìn)腫瘤的生長或轉(zhuǎn)移。除了文中所提到的一些信號通路及相關(guān)分子機(jī)制以外，可能還存在許多目前尚未發(fā)現(xiàn)的其他抗癌機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)正消積方劑降低了原位結(jié)直腸癌移植瘤小鼠腸道中變形桿菌的豐度，而變形桿菌又與結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關(guān)。因此，養(yǎng)正消積方劑的抗癌機(jī)制還涉及改變腸道菌群的構(gòu)成。目前拆方研究甚少，究竟是養(yǎng)正消積方劑中的哪種成分或哪幾種成分起更大的作用尚未可知，所以，其治療腫瘤的更多機(jī)制及臨床療效值得深入探討。