腎元顆粒對(duì)慢性腎臟病3~5期非透析患者血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4、Klotho蛋白的影響

程虹 鄒新蓉 李穎霞 王小琴

[摘要] 目的 觀察腎元顆粒對(duì)慢性腎臟?。–KD）3～5期非透析患者的血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23（FGF23）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4（FGFR4）和Klotho蛋白含量的影響，以探討腎元顆粒對(duì)CKD患者血管鈣化的可能作用機(jī)制。 方法 選取湖北省中醫(yī)院2018年6月—2019年6月收治的CKD患者60例，按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對(duì)照組（28例）和治療組（32例）。對(duì)照組采用尿毒清顆粒治療，治療組采用腎元顆粒治療。連續(xù)治療3個(gè)月，觀察兩組治療前后生化指標(biāo)[血清鈣、磷、甲狀旁腺激素（PTH）及估算的腎小球?yàn)V過率（eGFR）]水平及血清FGF23、FGFR4和Klotho蛋白含量。 結(jié)果 治療前，兩組鈣、磷、PTH、eGFR比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;治療后，治療組血清中磷、PTH含量低于對(duì)照組，鈣、eGFR高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。治療前，兩組FGF23、FGFR4、Klotho蛋白含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;治療后治療組血清FGF23、Klotho蛋白含量高于對(duì)照組，F(xiàn)GFR4含量低與對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。 結(jié)論 腎元顆粒能夠抑制FGF23、FGFR4水平，提高Klotho蛋白含量，這可能是腎元顆粒治療CKD患者血管鈣化作用機(jī)制之一。

[關(guān)鍵詞] 慢性腎臟病;腎元顆粒;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23;成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4;Klotho蛋白

[中圖分類號(hào)] R277.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）10（a）-0125-04

Effect of Shenyuan Granules on serum fibroblast growth factor 23， fibroblast growth factor receptor 4 and Klotho protein in non-dialysis patients with chronic kidney disease of stage 3-5

CHENG Hong1，2? ?ZOU Xinrong1，2? ?LI Yingxia3? ?WANG Xiaoqin1，2

1.Department of Nephrology， Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan? ?430061， China; 2.Institute of Nephrology， Hubei Institute of Traditional Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan? ?430074， China; 3.the First Clinical College， Hubei University of Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan? ?430061， China

[Abstract] Objective To observe the effect of Shenyuan Granules on the serum fibroblast growth factor 23 （FGF 23）， fibroblast growth factor receptor 4 （FGFR 4） and Klotho protein in non-dialysis patients with chronic kidney disease （CKD） of stage 3-5， so as to explore the possible mechanism of Shenyuan Granules on vascular calcification in CKD patients. Methods A total of 60 patients with CKD admitted to Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine from June 2018 to June 2019 were selected and they were divided into the control group （28 cases） and the treatment group （32 cases） by random number table method. The control group was treated with Niaoduqing Granules， while the treatment group was treated with Shenyuan Granules. After 3 months of continuous treatment， the levels of biochemical indexes （serum calcium， phosphorus， parathyroid hormone [PTH] and estimated glomerular filtration rate [GFR]）， and serum FGF23， FGFR4 and Klotho protein content were observed before and after treatment. Results Before treatment， there were no statistically significant differences in calcium， phosphorus， PTH and eGFR between the two groups （P > 0.05）. After treatment， serum phosphorus and PTH in the treatment group were lower than those inthe control group， while calcium and eGFR were higher than that in the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Before treatment， there was no significant difference in FGF23， FGFR4， and Klotho protein content between the two groups （P > 0.05）. After treatment， serum FGF23 and Klotho protein content in the treatment group were higher than those in the control group， and FGFR4 content was lower than that in the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Conclusion Shenyuan Granules can inhibit FGF23 and FGFR4 levels and increase Klotho protein content， which may be one of the mechanisms of Shenyuan Granules in the treatment of vascular calcification in patients with CKD.

[Key words] Chronic kidney disease; Shenyuan Granules; Fibroblast growth factor 23; Fibroblast growth factor receptor 4; Klotho protein

慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）是指各種原因引起的腎臟的結(jié)構(gòu)或功能異?！?個(gè)月，包括腎臟的形態(tài)或病理異常、與腎臟相關(guān)的血尿成分異常、腎臟的影像學(xué)異常;或不明原因估算的腎小球?yàn)V過率（eGFR）下降[<60 mL/（min·1.73m2）]大于或等于3個(gè)月。CKD進(jìn)展會(huì)導(dǎo)致終末期腎衰竭、誘發(fā)心血管疾病，對(duì)患者生命帶來威脅[1]，全球約10%的人口受到CKD的影響[2]。肥胖、糖尿病、高血壓和血脂異常等均是CKD的主要危險(xiǎn)因素[3]，血管鈣化是導(dǎo)致CKD合并心血管疾?。╟ardiovascular disease，CVD）的重要因素。目前對(duì)CKD合并血管鈣化的防治方案仍存在諸多不足，開發(fā)新的治療干預(yù)措施將會(huì)減少全世界面臨CKD的風(fēng)險(xiǎn)[4]。中醫(yī)藥在延緩CKD向終末期腎臟病發(fā)展，治療并發(fā)癥，改善患者生活質(zhì)量方面起著重要作用[5]。

尿毒清顆粒是治療CKD的常用中成藥，在CKD的臨床治療中發(fā)揮了重要作用[6]。腎元顆粒是湖北省中醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）腎病科在大量臨床治療中積累的經(jīng)驗(yàn)方，可改善患者腎功能、提高患者生活質(zhì)量，與中藥辨證口服方比較，具有更明顯的效果[7]。本研究擬觀察腎元顆粒與尿毒清顆粒對(duì)CKD患者血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23（FGF23）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4（FGFR4）和Klotho蛋白含量的影響，以探討腎元顆粒對(duì)CKD患者血管鈣化的可能作用機(jī)制，以期為后續(xù)CKD血管鈣化的中醫(yī)藥治療提供一定的臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月—2019年6月我院收治的CKD患者60例，其中男34例，女26例;平均年齡（52.50±7.16）歲。按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對(duì)照組（28例）和治療組（32例），兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性，見表1。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)：2011[363]），所有患者及家屬均簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)[8]：①年齡18～74歲;②eGFR<60 mL/（min·1.73m2）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有嚴(yán)重并發(fā)癥者，如嚴(yán)重的心功能不全、肝硬化等。②由系統(tǒng)性疾病、自身免疫性疾病引起CKD者。③近2年內(nèi)有腫瘤的化學(xué)治療者。④近6個(gè)月內(nèi)使用過免疫抑制劑者。⑤感染，孕期或哺乳期的女性，精神病患者及拒絕本研究者。

1.2 方法

對(duì)照組溫水沖服尿毒清顆粒[康臣藥業(yè)（內(nèi)蒙古）有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20073256，批號(hào)：160224]，5 g/次，2次/d;治療組溫水沖服腎元顆粒（我院院內(nèi)制劑，鄂藥制字Z20070209，批號(hào)：20190306），5 g/次，2次/d，兩組均連續(xù)服用3個(gè)月。治療前后抽取患者靜脈血分離血清，進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 血清鈣、磷、甲狀旁腺激素（PTH）及eGFR檢測(cè)? 抽取空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，3000 r/min離心5 min，離心半徑8 cm，取上層血清于-80℃保存?zhèn)溆?。采用全自?dòng)生化檢測(cè)儀（貝克庫(kù)爾曼特，型號(hào)：AU5800）檢測(cè)血清中鈣、磷（寧波美康生物科技有限公司，批號(hào)：190701101）、PTH（西門子醫(yī)療，批號(hào)：023）含量及eGFR。

1.3.2 FGF23、FGFR4及Klotho蛋白檢測(cè)? 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)血清FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量進(jìn)行測(cè)定，具體操作嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后血清鈣、磷、PTH、eGFR比較

治療前兩組血清鈣、磷、PTH、eGFR比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;治療后，治療組鈣、eGFR高于對(duì)照組，血清磷、PTH含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。

2.2 兩組治療前后血清FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量比較

治療前兩組FGF23、FGFR4及Klotho蛋白含量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;治療后，治療組FGF23、Klotho蛋白含量高于對(duì)照組，F(xiàn)GFR4低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。

3 討論

骨礦物質(zhì)代謝紊亂是CKD患者常見并發(fā)癥，其導(dǎo)致的血管鈣化嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，且與增加患者死亡率相關(guān)，降低血磷，維持血鈣，控制PTH在正常范圍內(nèi)是治療CKD的目標(biāo)[9-10]。臨床數(shù)據(jù)[11]顯示，CKD患者早期便出現(xiàn)了鈣磷代謝紊亂現(xiàn)象，高磷攝入可進(jìn)一步加重腎臟損傷[12]。本研究觀察了腎元顆粒與尿毒清顆粒治療CKD患者后對(duì)血清中鈣、磷、PTH和eGFR水平的影響，結(jié)果顯示治療組鈣、eGFR高于對(duì)照組，血清磷、PTH含量低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。

通過調(diào)節(jié)FGF23和維生素D對(duì)腎臟、骨骼和消化系統(tǒng)的影響，可維持血清中鈣磷水平保持相對(duì)恒定[13]。FGF23作為一種新的CKD生物標(biāo)志物，是FGF家族的成員之一，可調(diào)節(jié)磷和維生素D代謝，在CKD早期水平升高，是加速CKD進(jìn)展和加重心血管并發(fā)癥的潛在致病因子[14-16]。FGF23雖屬于FGF家族，但其與FGF19、21及其他成員存在兩個(gè)不同之處：①他們并非生長(zhǎng)因子，而是調(diào)節(jié)各種代謝過程的內(nèi)分泌因子;②他們的生理受體不是FGF受體（FGFRs），而是FGFRs和Klotho蛋白的二元復(fù)合物[15]。FGF23通過結(jié)合FGFRs與Klotho蛋白，調(diào)節(jié)鈉依賴性磷酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)、維生素D的活性和PTH的分泌[17]。FGF23通過FGFR4直接靶向目的細(xì)胞，對(duì)FGF23/FGFR4信號(hào)的干預(yù)可能具有緩解CKD的作用[18]。Singh等[19]研究結(jié)果亦證實(shí)了FGFR4阻斷劑具有治療CKD的效果。Grabner等[20]研究證實(shí)FGF23通過活化FGFR4及下游信號(hào)，介導(dǎo)了心血管鈣化。Maren等[21]發(fā)現(xiàn)FGF23、FGFR4過度表達(dá)是CKD患者心血管事件的危險(xiǎn)因素。Klotho蛋白是一種與衰老有關(guān)的蛋白質(zhì)，是近年來研究的熱點(diǎn)，其作為協(xié)同受體，與FGFR結(jié)合行成復(fù)合受體通過磷酸化等反應(yīng)調(diào)節(jié)PTH的釋放從而將鈣磷控制在合適水平，其在骨礦物代謝中起著關(guān)鍵性作用[22]。補(bǔ)充Klotho蛋白或上調(diào)Klotho蛋白表達(dá)，可抑制腎間質(zhì)纖維化進(jìn)展，抑制PTH分泌[23]。本研究結(jié)果顯示，腎元顆粒與尿毒清顆粒治療后，CKD患者血清FGF23和FGFR4水平低于治療前，而Klotho蛋白含量高與治療前，提示腎元顆粒對(duì)慢性腎臟病患者血管鈣化有一定調(diào)節(jié)作用，其機(jī)制可能與FGF23/FGFR4通路有關(guān)。

《素問·宣明五氣》云：“腎藏精，精生髓，髓成骨?！蹦I所藏之精，所主之液皆可化生骨髓。若腎精充實(shí)，則髓化有源，骨得其養(yǎng)而堅(jiān)固有力;若腎精虧虛，則骨失其養(yǎng)，發(fā)為“骨痿”“骨痹”。既往的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示腎元顆粒能抑制腎性骨病模型大鼠骨組織FGF23的表達(dá)[24]，能改善鈣磷代謝，減輕CKD伴發(fā)的血管鈣化損傷。腎元顆粒組方中淫羊藿能補(bǔ)腎壯陽(yáng)、益精健骨，已有研究表明淫羊藿總黃酮（主要成分為淫羊藿苷）可能通過增加成骨細(xì)胞骨保護(hù)素的表達(dá)來抑制破骨細(xì)胞的分化和成熟，從而抑制骨吸收[25]，還可以提高腎臟BMP-7蛋白的表達(dá)，并作用于骨組織，發(fā)揮其誘導(dǎo)成骨作用。黃芪能補(bǔ)益肺脾，能減輕小管間質(zhì)的損傷，抑制腎纖維化。大黃功能清濕熱化瘀祛濁排毒，抑制腎臟高代謝，抑制系膜細(xì)胞增生，改善脂質(zhì)代謝，從多方面延緩慢性腎衰竭、改善骨礦物質(zhì)代謝紊亂。

綜上所述，腎元顆粒可升高CKD患者血清鈣、Klotho蛋白含量及eGFR水平，降低血清磷、PTH、FGF23、FGFR4含量，其對(duì)CKD患者Klotho蛋白、FGF23、FGFR4的調(diào)節(jié)作用，可能是腎元顆粒防治CKD患者血管鈣化的作用機(jī)制之一。

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（收稿日期：2020-07-08）