袁曉娟/湖南省長(zhǎng)沙市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法局 410013

大腸桿菌疾病是一類傳染病籠統(tǒng)的總稱，致病菌是大腸埃希氏菌內(nèi)部的一些血清型，是非常重要的一類胚胎疾病。在整個(gè)生產(chǎn)活動(dòng)中，禽類活動(dòng)的所有周圍環(huán)境里都有大腸桿菌，這種疾病在幼雞以及成年雞大腸桿菌疾病在臨床上分為許多種類，其中包含大腸埃希氏菌致病性的卵黃性腹膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦病、孵化率低、死胚、敗血癥、氣囊炎、心包炎、腫頭綜合征、腸炎等。雞群發(fā)病的概率是，致死的概率是[3]。由此可見(jiàn)，家禽大腸桿菌疾病的爆發(fā)嚴(yán)重?fù)p害了養(yǎng)殖戶的利益，造成了養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)上的巨大損失。

該病原體對(duì)于畜禽的生產(chǎn)安全造成了嚴(yán)重的損害，而最有效的防控措施就是消毒。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)量幾種類型的消毒藥劑對(duì)于分離的病原菌的最小殺菌濃度、消毒藥劑的濃度、作用時(shí)間對(duì)消毒效果的影響，對(duì)大規(guī)模集約經(jīng)營(yíng)養(yǎng)雞場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行消毒操作的實(shí)際效果觀測(cè)，為疫病的預(yù)防控制以及確定消毒的方案提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)用的染病雞來(lái)自某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠。

1.2 試驗(yàn)材料LB培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、TSA瓊脂培養(yǎng)基、腸桿菌科生化鑒定培養(yǎng)基，電熱恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、電子天平、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫空氣搖床、漩渦混合器、顯微鏡。

1.3 消毒藥劑百毒殺、84消毒液、菌毒靈、新潔爾滅、新歐福、氨酚。

2 方法

2.1 病料采集及涂片染色將送檢的病雞進(jìn)行解剖，在無(wú)菌的環(huán)境中取具備明顯大腸桿菌病病變特點(diǎn)的組織器官比如氣囊、心包、肝表滲出物進(jìn)行涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察，在無(wú)菌環(huán)境中用接種環(huán)把疑似的病料接種在液體培養(yǎng)基上，完成菌群擴(kuò)增過(guò)程。

2.2 分離培養(yǎng)病原把接種過(guò)疑似菌種的培養(yǎng)基繼續(xù)接種在麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h；再在無(wú)菌的環(huán)境中，挑取表面生長(zhǎng)為紅色菌落的半個(gè)菌落接種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)，與此同時(shí)把另外半個(gè)菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，顯微鏡下檢測(cè)；純培養(yǎng)物放置在4℃的冰箱以備之后使用。

2.3 消毒劑的配制將百毒殺、84、菌毒靈、新潔爾滅、氨酚、新歐福分別用滅菌生理鹽水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640的比例稀釋成為濃度各異的消毒試劑。

2.4 制備大腸桿菌菌懸液把已經(jīng)完成分離測(cè)定的大腸桿菌接種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，取5mL滅菌生理鹽水加入培養(yǎng)基中，反復(fù)洗下菌苔至無(wú)菌管中，用漩渦混勻30s制成菌懸液，采用麥?zhǔn)媳葷峁軐⒕鷳乙合♂尀?07CFU/mL待測(cè)菌液，保存在4℃冰箱內(nèi)備用，12h內(nèi)使用。

2.5 消毒劑在不同時(shí)間內(nèi)的殺菌結(jié)果及最小殺菌濃度確定逐一取上述種類濃度各異的消毒試劑2ml跟大腸桿菌的菌懸液0.1ml進(jìn)行均勻混合，經(jīng)過(guò)1min、10min、30min和1h、5h的時(shí)長(zhǎng)，取菌液與消毒液的混合液0.5ml加入4.5ml中和劑的試管中混勻，經(jīng)中和作用10min，從中取0.1ml的樣本涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基里上，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)完成48h的培養(yǎng)，仔細(xì)觀察各濃度殺菌劑在不同時(shí)間內(nèi)的殺菌效果，以無(wú)菌生長(zhǎng)的最低倍數(shù)作為該消毒劑在該時(shí)間內(nèi)對(duì)試驗(yàn)菌的最小殺菌濃度。

3 結(jié)果

3.1 病料涂片染色鏡檢結(jié)果疑似病料經(jīng)涂片染色鏡檢查得出：革蘭氏陰性、無(wú)芽孢短桿菌，多單個(gè)或成對(duì)存在。

3.2 細(xì)菌培養(yǎng)特性及形態(tài)特征分離出來(lái)的菌株在每一種培養(yǎng)基上長(zhǎng)成典型的大腸桿菌應(yīng)該呈現(xiàn)的菌落形態(tài)，可以判斷符合大腸桿菌典型的菌落形態(tài)特征。

3.3 消毒劑的消毒效果的測(cè)定結(jié)果百毒殺對(duì)某蛋雞企業(yè)養(yǎng)殖廠分離的大腸桿菌菌株的殺菌效果最好，1:160比例稀釋在5min內(nèi)可以達(dá)到殺菌率100%；1:80比例的菌毒靈在5min內(nèi)可以達(dá)到殺菌率100%；1:80比例的新潔爾滅在10min可以達(dá)到殺菌率100%；1:80比例的新歐福在5min可以達(dá)到殺菌率100%；1:40比例的氨酚在5min可以達(dá)到殺菌率100%。

4 討論

幾種消毒劑對(duì)大腸桿菌均具有殺菌能力，但稀釋倍數(shù)各不相同，殺菌能力與消毒劑濃度呈正相關(guān)，而且殺菌效果與殺菌時(shí)間呈正相關(guān);本次試驗(yàn)中6種消毒劑對(duì)大腸桿菌的殺菌效果與殺菌時(shí)間有關(guān)，作用10min后6種消毒劑都可以達(dá)到殺菌率100%。百毒殺的稀釋比例相對(duì)來(lái)說(shuō)也是最大的，所以在養(yǎng)殖場(chǎng)的日常消毒中，建議使用百毒殺，但是如果長(zhǎng)時(shí)間使用單一消毒劑，養(yǎng)殖廠中致病細(xì)菌會(huì)逐漸產(chǎn)生耐藥性，因此建議菌毒凈和百毒殺定期交替使用。